猪源鹑鸡肠球菌的分离鉴定、耐药性和毒力基因分析

鹑鸡肠球菌为肠球菌属的革兰氏染色阳性、触酶阴性的兼性厌氧菌。自1984年从临床样品分离得到以来,至今对其相关报道仍然较少。但近年来,研究人员发现该菌与人的感染密切相关,国内外报道病例逐渐增加。在美国和欧洲地区,耐万古霉素肠球菌(Vancomycin resistant enterococci,VRE)的出现,给治疗和控制此类病原引起的感染带来了前所未有的挑战。鹑鸡肠球菌(Enterococcus gallinarum,EG)是临床中一种重要的人兽共患条件致病菌。对首都医科大学宣武医院的临床样本进行EG分离,其中泌尿道占57.14%,其次是下呼吸道占28.57%,EG感染可引起泌尿、呼吸道感染甚至引发败血症。

饲料中添加不同水平的鸡肠粉对鲤肠道菌群结构的影响

为研究饲料中添加新型蛋白源鸡肠粉对鲤(Cyprinus carpio)肠道菌群的影响,选取初始体重为(57.30±0.10)g的鲤150尾,随机分为5组,每组10尾鱼,分别投喂鸡肠粉添加量为0%(D1组)、5%(D2组)、10%(D3组)、15%(D4组)、100%(D5组)的试验饲料,进行56 d养殖试验。饲养结束后,采集肠道样品,基于Illumina Miseq PE300平台进行高通量测序。结果表明,饲料中添加10%和15%的鸡肠粉降低了鲤肠道菌群的多样性,但具有改善肠道菌群结构的效果。D3、D4组α多样性显著低于D1组(P<0.05)。D3组降低了变形菌门(Proteobacteria)和邻单孢菌属(Plesiomonas)相对丰度,D3、D4组鲸杆菌属(Cetobacterium)和气单孢属(Aeromonas)相对丰度升高。表明在鸡肠粉添加量为10%时,鲤肠道致病菌相对丰度最低,有益菌相对丰度最高,对鲤肠道菌群结构有最好的改善作用。

鹑鸡肠球菌致化脓性脑膜炎一例并文献复习

目的探讨鹑鸡肠球菌化脓性脑膜炎的临床特点、治疗经验,以提高临床医生及药师对该病的治疗水平。方法回顾性分析我院1例鹑鸡肠球菌化脓性脑膜炎患者的临床治疗资料,并通过“鹑鸡肠球菌化脓性脑膜炎”、“enterococcus gallinarum meningitis”关键词在中国知网数据库、PubMed数据库检索相关报道作文献复习。结果共检索到8篇文献,鹑鸡肠球菌化脓性脑膜炎的易感人群主要是接受侵入性外科手术患者及免疫功能受损患者,抗感染治疗药物多选择利奈唑胺,使用疗程3周以上效果更佳。结论鹑鸡肠球菌是机会致病菌,引起化脓性脑膜炎的报道很少见,抗菌药物首选利奈唑胺,必要时联合氨基青霉素(如氨苄西林或阿莫西林),疗程不宜过短,治疗期间避免留置脑脊液引流管。

什么病危害这么大?原来是霉菌毒素、小肠球虫引起鸡肠毒综合症

近期不少客户反应,因为夏季高温高湿,霉菌毒素和小肠球虫引起的肠毒综合征多发,很是困扰。肠道是机体消化吸收的主要场所,也是机体抵御外界病原微生物的第一道防线。

1株鹑鸡肠球菌产ESBLs和AmpC酶的基因型鉴定

为检测1株临床分离的七彩鸟鹑鸡肠球菌的ESBLs和AmpC酶的基因型,探讨其耐药基因的进化机制;采用两倍稀释法测定此菌株对18种常用药物的敏感性,并用9对特异性引物进行PCR扩增、基因克隆及测序分析,确定鹑鸡肠球菌ESBLs和AmpC酶的基因型及基因亚型。结果表明,鹑鸡肠球菌为产ESBLs和AmpC酶菌,除对3代、4代头孢,碳青霉烯类和磷霉素体外敏感外,对其他常用药物均呈现耐药,具有多重耐药特性;该菌所产ES-BLs的TEM序列与AJ847364(TEM-116)序列相比发生了2处碱基突变,即512T→A和695A→C,引起了相应氨基酸的突变171Ile→Lys、232Lys→Thr,是一种新的TEM亚型,GenBank注册号DQ849329;AmpC酶与序列EF078894(ACT-like型)有97%的同源性,GenBank登录号是DQ849330。这表明该株鹑鸡肠球菌ESBLs为一种新TEM亚型,来源于同时分离的鹑鸡克雷伯菌TEM型的ESBLs;ACT型AmpC酶的存在可能与七彩鸟鹑鸡接触过β-内酰胺类药物有关。

鸡肠上皮细胞原代培养与鉴定

为了探讨鸡肠上皮细胞体外分离培养方法,进一步研究鸡源志贺菌Ipa C毒力蛋白在鸡肠上皮细胞上的受体蛋白分子,试验分别无菌取14,16,18日龄鸡胚肠组织,用300 U/m LⅪ型胶原酶和0.1 mg/m LⅠ型中性蛋白酶混合搅拌消化25 min,用壁差法纯化鸡肠上皮细胞,贴壁时间差为3 h,分别种植于20%FBS包被过的和未包被过的一次性塑料细胞培养瓶中,在倒置显微镜下观察细胞生长状态,透射电镜下对培养细胞进行鉴定。结果表明:采用16日龄鸡胚肠组织用Ⅺ型胶原酶和Ⅰ型中性蛋白酶联合消化25 min,可获得较多的肠隐窝单位,肠上皮细胞在20%FBS包被过的一次性细胞培养瓶中贴壁效果良好,细胞生长状态良好;透射电镜下可见鸡肠上皮细胞的微绒毛,鉴定为鸡肠上皮细胞。

大豆寡糖对肉仔鸡肠黏膜免疫球蛋白含量的影响

非消化寡糖由于不能被非反刍动物体内分泌的消化酶分解,在肠道后段可选择性促进双歧杆菌和乳酸杆菌等有益菌群的增殖及抑制大肠杆菌等有害菌的增殖,从而维持了肠道微生态平衡（Gibson和Roberfroid,1995;Houdijk等,2002;Bielecka等,2002）;而且非消化寡糖具有低热、稳定、无残留和耐药性等优点。被看作是一种很有开发潜力的绿色饲料添加剂。

鸡血管活性肠肽RNA探针制备及其在鸡肠Remak神经的原位杂交反应

应用RT-PCR方法从鸡脑中扩增血管活性肠肽(VIP)基因片段,将其连接于pGM-T easy。分别利用pGM-T easy中T7和SP6启动子及其RNA聚合酶,以线性化的VIP/pGM-Teasy为模板转录合成正、反义DIG标记RNA探针。通过原位杂交方法将合成的探针用于探查VIP-mRNA在鸡肠Remak神经(INR)中的分布情况。结果表明,INR的神经元胞体中有VIP-mRNA的转录,且这种神经元数量众多;原位杂交阳性神经元胞体大部分是大型神经元细胞,呈圆形或椭圆形;阳性神经元胞体在INR神经节中呈层状或成群分布。INR的神经纤维呈弱阳性。在节间束也有少量的阳性细胞分布。本研究从基因水平证明INR中有VIP神经元存在。

人源福氏志贺菌对鸡肠上皮原代细胞侵袭特性研究

为研究人源福氏志贺菌对鸡肠上皮原代细胞侵袭力和侵袭特性,进一步验证人源志贺菌对鸡的致病性并建立体外研究模型,采用Hela细胞庆大霉素保护试验和免疫组织化学染色检测分离的人源福氏志贺菌ZD02株的毒力。然后采用细胞免疫组织化学染色研究ZD02株对鸡肠上皮细胞的侵袭力和相关侵袭特性。人源福氏志贺菌ZD02株能够侵入Hela细胞,庆大霉素保护试验结果显示,感染后30、60、90、120min时ZD02株侵袭率分别为1.43%、2.43%、2.56%、2.62%,证明ZD02株具有毒力。ZD02株侵袭鸡肠上皮原代细胞免疫组织化学检测结果显示,ZD02株能侵入鸡肠上皮细胞,感染后1、2、3、4h时ZD02株侵袭率分别为1.7%、6.2%、8.0%、11.2%。鸡肠上皮原代细胞经EGTA处理后,ZD02株侵袭率显著提高。人源福氏志贺菌ZD02株对鸡肠上皮细胞具有侵袭力,且从肠上皮细胞基底侧部侵袭。本研究进一步验证了志贺菌人禽互传的可能性,鸡肠上皮原代细胞可作为研究志贺菌致病机理的体外模型。

鹑鸡肠球菌感染的临床特点和耐药性分析(附35例)

目的探讨鹑鸡肠球菌感染的临床特点及耐药性。方法收集本院细菌室2002年1月～2007年12月间,经法国梅里埃公司VITEK32型全自动细菌分析鉴定仪,检测出的鹑鸡肠球菌感染的临床病例,对其临床特点及耐药性进行分析。结果有35例检出鹑鸡肠球菌,男性20例,女性15例;平均年龄72岁。全部病例均为院内感染,检出部位主要是泌尿道、下呼吸道。侵入性治疗及过度使用抗生素及免疫抑制剂是主要的易感因素。该菌对万古霉素天然耐药,对青霉素G,左氧氟沙星和莫西沙星类药物高度耐药,而对利奈唑胺高度敏感。结论鹑鸡肠球菌被感染者均为院内感染。侵入性治疗,过度使用抗生素和免疫制剂是其易感因素。对万古霉素天然耐药,利奈唑胺对其高度敏感。

细胞信号转导和骨架在人源福氏志贺菌侵袭鸡肠上皮原代细胞中的作用

为研究细胞信号转导和骨架在人源福氏志贺菌侵袭鸡肠上皮原代细胞中的作用,分别用酪氨酸蛋白激酶、酪氨酸蛋白磷酸酶、蛋白激酶C、Ca2+通道等信号转导抑制剂染料木黄酮、原钒酸钠、星状孢子素、硝苯地平和微丝蛋白聚合抑制剂细胞松弛素B处理鸡肠上皮原代细胞后,采用细胞免疫组织化学染色检测人源福氏志贺菌ZD02株对鸡肠上皮原代细胞侵袭率,用间接免疫荧光双重标记检测ZD02株侵袭鸡肠上皮原代细胞后F-肌动蛋白分布的变化。结果显示,染料木黄酮、硝苯地平和细胞松弛素B能显著抑制人源福氏志贺菌ZD02株内化,星状孢子素和原钒酸钠对ZD02株的内化无影响,人源福氏志贺菌侵袭鸡肠上皮原代细胞时F-肌动蛋白发生聚集。本研究表明人源福氏志贺菌ZD02株侵袭鸡肠上皮原代细胞过程中需要酪氨酸蛋白激酶、Ca2+通道活化以及细胞微丝重排。

鸡肠上皮原代细胞体外分离培养与鉴定

为了探讨鸡肠上皮原代细胞分离培养方法,进一步研究人源志贺菌对鸡的致病性和为相关侵袭特性提供体外模型,分别取不同日龄鸡胚,用0.1 g/mLⅠ型中性蛋白酶和300 U/mLⅪ型胶原酶联合分离纯化鸡肠上皮原代细胞,筛选其最佳培养方法,并对培养细胞进行鉴定;然后采用0.125%胰酶和0.01%EDTA联合消化进行鸡肠上皮原代细胞传代。结果显示,应用Ⅰ型中性蛋白酶和Ⅺ型胶原酶消化15日龄鸡胚肠组织可获得满意的肠上皮细胞分离效果,细胞贴壁性良好。培养出圆形或多角形单层生长呈"铺路石样"的细胞,培养的细胞在12 h内贴壁,24～48 h明显增殖,72 h后细胞增殖速度减慢,生长状况不良。经透射电镜观察鉴定为肠上皮细胞。且传代后细胞贴壁生长良好。建立的鸡肠上皮原代细胞分离培养方法可获得纯度较高的鸡肠上皮原代细胞,制备的细胞可以连续传代3次。

生长抑素前体蛋白1和前脑啡肽原mRNA在鸡肠Remak神经中的分布

肠Remak神经(Intestinal nerve of Remak,INR)是禽类特有的一根自主神经节链,但INR中肽类递质的分布至今仍然存在许多疑问。本文应用RT-PCR方法从鸡脑组织提取的RNA中扩增生长抑素前体蛋白1(Somatostatin precursor1,PSS1)和前脑啡肽原(Preproenkephalin,PPE)基因片段,将其连接于pGM-Teasy质粒,经过转化大肠杆菌、挑取阳性克隆和测序鉴定,确定为目的片段。分别以线性化的SS1/pGM-Teasy和PPE/pGM-Teasy质粒为模板,用体外转录的方法合成正反义地高辛标记RNA探针。通过原位杂交方法将合成的探针用于探查PPE和PSS1 mRNA在鸡空回肠段和直肠段INR中的分布情况。结果表明:INR中大部分神经细胞中有PPE和PSS1的mRNA的转录,其中PPE探针杂交阳性细胞在空回肠段和直肠段INR分别占83.79%±7.96%和96.04%±4.53%,而PSS1探针在空回肠段和直肠段INR中的杂交阳性细胞分别占86.98%±7.93%和86.07%±6.11%;在整个INR中都可能有PPE和PSS1 mRNA共存于同一神经细胞的现象;原位杂交阳性神经细胞胞体呈有突起的梭形或椭圆形,其纵轴与INR延伸的方向平行;阳性神经细胞胞体在INR神经节中呈层状或成群分布,在节间束也有少量的阳性细胞分布。本文从基因水平证明INR中大量神经细胞进行PPE或PSS1的mRNA的转录。

鸡肠狼毒植物中曼西醇型二萜成分的研究

目的:研究鸡肠狼毒植物根中的二萜化学成分及其药理活性。方法:冷浸法提取总浸膏,硅胶层析法分离,现代光谱手段鉴定结构。结果:分离得到8个已知曼西醇型二萜,分别为Proliferin A(1)、Proliferin B(2)、Proliferin C(3)、Proliferin D(4)、Euphorprolitherin B(5)、Euphorprolitherin D(6)、SPr5(7)和14-desoxo-3-O-prorionyl-5,15-di-O-acetyl-7-O-nicotinoyl-myrsinol-14β-acetate(8)。应用光谱手段和与文献数据对照的方法鉴定了所有化合物的结构,进一步通过化合物1、2和4对人癌细胞的增殖抑制活性进行研究,结果表明化合物1对人卵巢癌细胞具有明显细胞毒性(IC507.7μmol/L)。结论:从鸡肠狼毒植物中分离得到的化合物Proliferin A是首个具有卵巢癌细胞A2780增殖抑制活性的曼西醇型二萜。

鸡肠中血管活性肠肽的提取与测定

目的研究鸡肠不同部位血管活性肠肽的含量及其不同提取方法对血管活性肠肽含量的影响。方法分别取新鲜鸡的十二指肠、空肠、和回肠段,除去油脂及污物,用水冲洗干净,甩干水分,分别称取20.0g,采用不同方法提取,用酶联免疫吸附法测定血管活性肠肽的含量。结果鸡的十二指肠、空肠和回肠部位血管活性肠肽含量分别为25.53,25.01和23.27ng/g;热水提取含量较高,在酸性条件下加热容易破坏。结论鸡的全肠均含丰富的血管活性肠肽。