鸡胚分离不同型别流感病毒的敏感性分析

近年来，由于我国对鸡胚分离不同型别流感病毒的敏感性研究较少，在多次全国流感病毒监测工作质量评估报告中指出，在全国多数的流感监测研究中心中仅有部分实验室进行鸡胚分离不同型别流感病毒的敏感性的研究，导致我国流感病毒问题难以解决，我国每年养鸡产业都将面临流感病毒的威胁。因此有关流感病毒分离的研究显得至关重要，同时鸡胚分离不同型别流感病毒的敏感性研究能够正确揭示不同型别流感病毒对鸡胚分离敏感度的差异，从而加深对不同型别流感病毒鸡胚分离的敏感性认识，对我国流感病毒监测，鸡胚的健康培养以及养鸡产业的发展具有重大意义。

鸡胚法分离福建省甲型H1N1流感病毒及分离株特征

目的建立甲型H1N1流感病毒鸡胚分离方法,了解病毒分离株特征,为疫苗制备和开展实验室常规监测等奠定基础。方法呼吸道标本接种鸡胚尿囊腔;血凝(HA)法测定收获的尿囊液中病毒滴度;逆转录PCR法检测病毒亚型特异性。使用甲醛灭活鸡胚分离物,灭活效果采用鸡胚接种法评价。血凝抑制(HI)实验检测急性期和恢复期血清,评价检测病毒感染后的免疫应答情况。结果从13份患者的呼吸道标本中分离出12株甲型H1N1流感病毒。多数病毒可在第二次传代鸡胚中分离到。病毒分离株的血凝滴度较低,为1∶1～16。阳性分离物再次接种鸡胚无法显著提高其HA效价。同鸡和人"O"型红血球比较,使用豚鼠红细胞可得到更高的血凝滴度。1‰甲醛可在24h内完全灭活病毒,但同时病毒的HA效价显著降低。病毒感染后,恢复期的HI滴度较急性期有2～16倍升高,HI抗体4倍增长需要约3w时间。结论鸡胚分离可应用于甲型H1N1流感病毒的分离,病毒的HA滴度较低。尽管甲醛可迅速灭活病毒,但灭活后病毒抗原血凝效价难以维持。病毒感染后,特异性血凝抗体产生较慢,同时滴度较低。基层实验室采用豚鼠血球更适合于病毒的HA滴度测定。

荧光RT-PCR在临床检测的应用

用建立的荧光RT -PCR检测中强毒力新城疫病毒的方法检测了 5批临床样品 ,其中有禽肉、鸡咽喉拭子 /泄殖腔拭子、鸽泄殖腔拭子 ,其中检出 3份样品中有中强毒力新城疫病毒 。

NASBA快速检测禽流感H5亚型病毒

采用建立的依赖核酸序列的扩增(Nucleicacidsequencebasedamplification,NASBA)对禽流感病毒3株H5亚型、1株H1、H3、H6亚型、3株禽流感H9亚型、5株不同宿主来源的新城疫病毒、鸭肝炎病毒、鸭瘟病毒、SPF鸡胚尿囊液及禽流感(H9)疫苗、新城疫疫苗、传染性法氏囊病疫苗、传染性支气管炎疫苗进行检测,结果NASBA(H5试剂)仅检测到禽流感病毒H5亚型,表明方法的特异性强。采用已知禽流感病毒A/Chicken/HK/1000/97(H5N1)的鸡胚尿囊液(ELD5010-7.5/mL),经10倍连续稀释,将经典的鸡胚病原分离法和NASBA进行比较,二种方法的灵敏度相当。用A/Chicken/HK/1000/97(H5N1)病毒人工感染SPF鸡、商品鸡,采用NASBA和病原分离法同时对人工感染鸡的粪拭子、血液进行了动态检测;采集感染死亡鸡的组织脏器,共检测了101个组织脏器,两种方法的符合率为90%(87/97)。

3种流感病毒检测方法的比较

目的对病毒分离培养法、实时荧光PCR法和鸡胚培养法3种检测流感病毒的方法和结果进行比较研究,筛选快速准确的检测方法,为流感监测与防控工作提供及时可靠的病原学依据。方法同时采用病毒分离培养法、实时荧光PCR法和鸡胚培养法对2014年10月~2015年3月牡丹江市流感监测哨点医院采集的流感样病例咽拭子样本进行检测,比较检测结果。结果实时荧光PCR法的流感病毒核酸检测阳性率为15.52%,其中169份为季节性H3N2流感病毒,73份为B型Yamagata株;病毒分离培养法的阳性率为6.29%,分离出63株季节性H3N2流感病毒,35株B型Yamagata株;鸡胚分离培养法检出率为0.64%。3种方法中,实时荧光PCR法的阳性率最高,病毒分离培养法次之,鸡胚分离培养法阳性率最低。结论实时荧光PCR法比病毒分离培养法和鸡胚培养法灵敏快捷、特异性强、敏感度高,适用于流感病毒的快速检测。