华蟾素联合三氧化二砷抑制鸡胚尿囊膜血管生成的实验研究

目的:观察和比较华蟾素注射液、三氧化二砷注射液单药以及联合用药后对鸡胚尿囊膜(CAM)血管生成的抑制作用。方法:100只七日龄鸡胚随机分为4组(每组25只):生理盐水(NS)对照组、华蟾素组、As2O3组和华蟾素联合As2O3组。CAM上植入甲基纤维素碟,加入各组药物,观察对血管生长的影响。结果:华蟾素、As2O3以及两药联合对鸡胚尿囊膜新生血管均有抑制作用,以两药联合后抑制血管的作用最强。结论:华蟾素、As2O3以及两药联合均具有抗血管生成作用,两药联用后且具有协同作用。

人卵巢癌鸡胚尿囊膜血管生成模型的建立

目的 :研究人卵巢癌鸡胚尿囊膜血管生成模型的建立方法。方法 :在鸡胚尿囊膜上接种卵巢肿瘤细胞株 ,根据接种细胞株的种类分为HO8910PM、TYK、SKOV3等 3组 ,每组根据接种细胞数量的不同分为 8个亚组 ,阴性对照组、1× 10 4 、1× 10 5、1× 10 6 、1×10 7、1× 10 8、1× 10 9、1× 10 10 组 ,每一亚组 10只 10日龄鸡胚 ,根据分组在鸡胚尿囊膜上接种相应的细胞数。孵育 3d后观察比较血管生成与接种细胞种类、数量的关系。结果 :将细胞株HO8910PM、TYK、SKOV3接种于鸡胚尿囊膜上后 ,随着接种细胞数量的增多 ,血管生成逐渐增强 ,与阴性对照PBS相比 ,细胞株HO8910PM、TYK、SKOV3引起血管显著生成的细胞数每只鸡胚分别为 1× 10 6 ,1× 10 7,1× 10 7;能使血管生成达到高峰的接种细胞数量分别为每只鸡胚 1× 10 8、1× 10 9、1× 10 9。结论 :应用人卵巢肿瘤细胞株接种鸡胚尿囊膜建立肿瘤血管生成模型 ,适宜的接种细胞数为每只鸡胚 1× 10 8～ 1× 10 9。

Image-Pro Plus图像分析软件定量鸡胚尿囊膜血管新生面积的方法

目的应用Image-Pro Plus 5.0图像处理和分析软件,研究鸡胚尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)血管新生面积定量的新方法。方法20只发育良好的7日龄鸡胚,分为龙葵给药组和对照组,每组10只。将中药龙葵水提液及等量蒸馏水吸附于5 mm直径的定性滤纸,置于CAM上。利用Image-Pro Plus 5.0软件,定量血管新生面积、蛋壳开窗处对应的CAM面积,计算出血管新生面积与CAM面积的比值。结果用Image-Pro Plus 5.0可方便、自动、准确地进行给药前后的数据收集和面积计算。统计分析表明,受试物龙葵可明显抑制CAM血管新生,与对照组比较有极显著差异(P<0.001)。结论Image-Pro Plus 5.0图像处理和分析软件是一种高效、准确的统计血管新生面积的工具,用该软件定量蛋壳开窗部位下的血管新生面积占开窗部位所对应的CAM总面积,不仅操作简便,而且数据计算自动生成,可较准确地反映鸡胚血管新生情况。

应用鸡胚尿囊绒膜锥虫蓝吸收法评价化学物质的眼刺激性

背景:传统多采用兔眼刺激实验(Draize实验)评价化学物质眼刺激性,即将化学物涂进兔眼睛后观察其变化,这种方法费时,费力,且给动物带来很大痛苦。各国实验室都在寻找动物替代实验的方法。目的:采用鸡胚尿囊绒膜-锥虫蓝吸收实验作为兔眼刺激实验替代方法评价化学物眼刺激性的可行性。设计、时间及地点:观察实验,于2008-05/09在中国检验检疫科学研究院毒理学实验室完成。材料:无特定病原体级受精鸡卵,9日龄,购于北京梅里亚通实验动物技术有限公司。方法:将1g/L的锥虫蓝溶液滴加在受化学物质刺激损伤的鸡胚尿囊绒膜上,通过计算鸡胚尿囊绒膜受损伤后吸收锥虫蓝的量,半定量测定化学物质对鸡胚尿囊绒膜的刺激性,并将所得结果与体内兔眼刺激实验评分结果进行比对,作相关性分析。同时预测了5种常见有机溶剂的眼刺激性。主要观察指标:鸡胚尿囊绒膜受刺激损伤后吸收锥虫蓝的量。结果:鸡胚尿囊绒膜-锥虫蓝吸收法与体内兔眼刺激实验评分结果相关性很好(R2=0.9259)。5种常见有机溶剂未稀释时,甘油无眼刺激性,丙酮、乙醇、二甲基亚砜、甲醇均有较高刺激性。当稀释为1%后,丙酮、乙醇、二甲基亚砜无眼刺激性,但甲醇刺激性仍然较高。结论:鸡胚尿囊绒膜-锥虫蓝吸收法可以代替兔眼刺激试验对化学物质眼刺激性进行评价。

益气化瘀解毒方含药血清对鸡胚尿囊膜血管生成的影响

目的:探讨益气化瘀解毒含药血清对鸡胚尿囊膜血管生成的影响。方法:取孵育7 d的种蛋制成CAM模型,加入益气化瘀解毒整方高、中、低3个剂量组的含药血清,继续孵育3 d,固定标本,拍熙,计数新生毛细血管数目。结果:高、中、低剂量组与不合药血清组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);高、中剂量组与低剂量组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);高、中剂量组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)结论:益气化瘀解毒方能抑制CAM血管新生,具有抗血管生成作用。

麝香保心丸的小鼠含药血清促鸡胚尿囊膜血管生长的研究

目的探讨麝香保心丸含药血清促鸡胚尿囊膜(CAM)血管生长的适当作用条件,为血清药理学筛选平台打下基础。方法以CAM为模型,观察小鼠不同喂药时间、喂药剂量和采血时间制备的麝香保心丸含药血清对CAM的促血管生长作用。结果麝香保心丸含药血清组的CAM血管生长数目明显多于空白对照组 (P<0．05),麝香保心丸含药血清组与血清灭活组的差异无显著性(P>0．05)。在临床等效剂量5倍剂量时喂药 4 d,末次喂药30 min后取得的麝香保心丸血清作用于CAM,其血管生长数目最多。结论用临床等效剂量的5 倍剂量喂养小鼠、喂药4 d、末次喂药后30 min得到的血清研究麝香保心丸的促血管生长作用效果最好。

黄芪、脉络宁注射液载入修饰胶原对鸡胚尿囊膜血管新生的协同促进作用

背景:课题组先期研究发现黄芪载入修饰后胶原可以促进血管新生,与生长因子载入疗效相当,运用中医理论中具有协同作用的中药合用是否能进一步提高疗效尚不清楚。目的:探查黄芪、脉络宁载入修饰后胶原促鸡胚尿囊膜血管新生及长入胶原的疗效,并证明黄芪与脉络宁是否有协同作用。方法:实验分空白组、控制组(单纯胶原)、黄芪组(黄芪注射液1mL载入胶原)、脉络宁组(脉络宁注射液1mL载入胶原)、黄芪+脉络宁组(黄芪注射液及脉络宁注射液各0.5mL载入胶原),各组植入鸡胚尿囊膜孵化7d后取出,测定鸡胚尿囊膜内微血管数、各组胶原内微血管数、血红蛋白含量、rhVEGF165阳性细胞数。结果与结论:各实验组鸡胚尿囊膜内血管呈轮辐状生长及鸡胚尿囊膜包裹标本率高于空白组与控制组,鸡胚尿囊膜内微血管数、胶原内微血管数、血红蛋白含量、rhVEGF165阳性细胞数均高于控制组,差异有显著性意义(P<0.01);其中黄芪+脉络宁组又高于黄芪组与脉络宁组,差异有显著性意义(P<0.05)。提示黄芪、脉络宁载入胶原后可以促进鸡胚尿囊膜内血管新生并刺激血管长入胶原内,黄芪与脉络宁合用具有协同作用,机制之一为刺激血管内皮细胞血管内皮生长因子的表达。

川芎嗪、葛根素、银杏黄酮及三七皂苷对鸡胚尿囊膜血管生长的影响

目的研究川芎嗪、葛根素、银杏黄酮及三七皂苷对鸡胚尿囊膜血管生长的影响。方法培养海兰种种蛋 ,观测局部用药对生长七日及五日鸡胚尿囊膜血管数目、血管面积的变化。结果葛根素及三七皂苷对鸡胚尿囊膜血管数目、血管面积影响不明显 ,川芎嗪、银杏黄酮减少鸡胚尿囊膜血管数目、血管面积 ,与对照组相比差异具显著性。结论川芎嗪、银杏黄酮可抑制鸡胚尿囊膜血管生长。

三氧化二砷对鸡胚尿囊膜血管形成的抑制作用

背景与目的:三氧化二砷(As2O3)注射液,临床对肝癌等实体瘤的治疗具有一定的疗效,其作用机制有待阐明。本研究探讨三氧化二砷注射液对鸡胚尿囊膜(ch ick embryo chorioallantoic m embrane,CAM)血管生成的影响。方法:应用CAM模型和计算机图像分析技术,观察三氧化二砷注射液对血管形成的影响。结果:三氧化二砷注射液10、20和40μg/m l作用3 d后,CAM上的血管面积分别为(25.7±4.2)%、(24.7±2.5)%和(21.5±6.7)%,与生理盐水对照组[血管面积为(30.7±4.6]%]相比,差异有显著性(P<0.05,P<0.01,P<0.01);不同剂量组间比较,差异无显著性(P>0.05)。结论:三氧化二砷注射液对于CAM血管形成具有较强的抑制作用,可以研究试用于抗肿瘤血管形成治疗。

鸡胚尿囊液对小鼠免疫功能与抗应激作用的影响

用 10日龄鸡胚的尿囊液 ,以不同剂量给小鼠灌胃 ,连用 10d ,进行免疫学指标测定和抗应激试验。结果表明 ,鸡胚尿囊液能提高小鼠T淋巴细胞酯酶染色率、巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数 ,能使小鼠脾指数增加 ,对小鼠游泳时间有所延长 ,但对小鼠耐常压缺氧时间影响不明显。试验说明 ,鸡胚尿囊液能显著提高小鼠的免疫功能 ,对小鼠抗应激能力也有一定提高。

几种收涩中药对鸡胚尿囊膜血管生成影响的实验研究

目的研究收涩中药乌梅、椿皮、金樱子、五味子、五倍子、赤石脂、禹余粮对鸡胚尿囊膜生成的影响。方法采用血清药理学方法,制备收涩药物的大鼠血清;建立鸡胚绒毛尿囊膜模型,并应用鸡胚绒毛尿囊膜模型进行活性筛选。于鸡胚发育的第5天,将加药物血清后的明胶海绵载体加于鸡胚绒毛尿囊膜上,孵育48 h后,固定鸡胚绒毛尿囊膜,取出,采用医用图像采集系统分析结果。结果收涩药物金樱子、五味子、五倍子、乌梅、赤石脂、椿皮对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管数目有一定抑制作用(P<0.05);乌梅组、椿皮组对抑制新血管生成有一定的趋势,与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论收涩中药对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管有一定的抑制作用。

隐丹参酮对鸡胚尿囊膜血管生成的抑制作用

目的评价隐丹参酮对鸡胚尿囊膜(CAM)新生血管生成的抑制作用。方法在六日龄CAM上植入含隐丹参酮的甲基纤维素膜片并孵化48 h。解剖显微镜下计数加药组和对照组局部血管数,用抑制率反映药物对CAM新生血管形成的影响。结果隐丹参酮0.1μg/egg和0.2μg/egg剂量相关性减少CAM局部的血管数,抑制率分别达到65%和72%;与对照组相比用药组局部血管明显变细受损。结论隐丹参酮对CAM血管生成有显著的抑制作用。

鸡胚尿囊膜血管生长的特点及观测方法

研究鸡胚尿囊膜血管的特点以及观测方法。培养海兰种种蛋 ,观测不同培养天数以及模拟用药后鸡胚尿囊膜血管数量、血管面积的变化。结果表明 ,鸡胚尿囊膜血管数量、血管面积随培养天数的增加而增加 ,生存能力亦随之增强。培养

不同浓度生肌玉红胶原对鸡胚尿囊膜血管新生的影响

目的:观察不同浓度生肌玉红膏提取液载入修饰后胶原(生肌玉红胶原)促鸡胚尿囊膜(CAM)血管新生的作用。方法:实验分空白组、对照组(无药胶原)、实验组1、2、3(分别将生肌玉红膏提取液以0.8、1.6、3.2mg/ml载入胶原),各组胶原植入7日龄CAM,孵化7天后取出,观察鸡胚成活、血管生长、胶原降解情况,测定植入胶原周围CAM内微血管数和胶原内血红蛋白浓度以及胶原内组织总DNA含量。结果:各实验组CAM内血管围绕胶原呈轮辐状生长,胶原包裹率和降解率均以实验组2最高,实验组2植入胶原周围CAM微血管数和血红蛋白含量以及胶原内总DNA量均高于对照组及其它实验组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:生肌玉红胶原可以促进CAM血管新生,最佳浓度为1.6mg/ml。

人大肠癌鸡胚尿囊膜移植模型的建立及血管生成特征的观察

目的研究人大肠癌腺癌细胞株HT-29鸡胚尿囊膜移植模型建立的方法,观察和分析其血管生成的特征。方法将不同浓度的人大肠癌腺癌细胞株HT-29接种于鸡胚尿囊膜(chick embryo chorioallantoic membrane,CAM),观察影响大肠癌鸡胚移植模型瘤体成活的因素、瘤体生长特征和血管生成情况。结果建立了人大肠癌CAM移植模型。移植模型瘤体易于生长,具有较强的血管生成作用。结论该模型易于复制,能动态观察大肠癌的血管生成过程,可用于大肠癌的生物学行为、药物筛选等领域的研究。

鸡胚尿囊绒毛膜法研究细胞间黏附分子-1在血管生成中的作用

目的 探讨细胞间黏附分子 1(intercellularadhesionmolecule 1,ICAM 1)在血管生成中的作用。 方法采用鸡胚尿囊绒毛膜 (chorioallantoicmembrane ,CAM)法进行在体血管生成实验。 结果 1 10d鸡胚的尿囊绒毛膜经ICAM 1作用 3d后 ,明胶海绵周围放射状走行的微血管非常明显 ,似车辐 ,显微镜下明胶海绵内有垂直长入的微血管 ,明胶海绵周边CAM间充质内微血管数目显著多于对照组 (P <0 0 1)。 2 6d鸡胚的尿囊绒毛膜经Anti ICAM 1作用 3d后 ,明胶海绵周围放射状走行的微血管极不明显 ,显微镜下明胶海绵内几乎没有新生的微血管 ,明胶海绵周边CAM间充质内微血管数目显著少于对照组 (P <0 0 1)。 结论 结果提示 1 ICAM 1有诱导微血管生成的作用 ;2 ICAM 1参与胚胎的血管生成。

鸡胚尿囊绒膜试验检测化妆品的刺激性

目的 研究鸡胚尿囊绒膜 -苔盼蓝吸收 (CAM -TB)试验作为体内眼刺激试验 (Draizetest)的替代方法检测化妆品产品时眼刺激性的可行性。方法 用该方法对 17种化妆品的刺激性进行检测 ,与Draizetest的结果进行比较 ,作相关性分析。结果 CAM -TB与Draizetest的相关系数为 0 9375。结论 CAM -TB试验可作为Draizetest眼刺激试验的一种替代方法 ,用于评价化妆品对眼刺激性。

藤梨根含药血清对鸡胚尿囊膜微血管生长的影响

目的:探讨中药藤梨根对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的影响,以衡量其抑制或诱生新血管发生的能力。方法:采用CAM技术和计算机图像分析技术,观察藤梨根含药血清对鸡胚绒毛尿囊膜血管数量和血管面积的影响。结果:藤梨根高剂量组与空白组、血清组比较,有较明显的抑制新血管生成能力,低剂量组无显著影响。结论:藤梨根对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管有一定的抑制作用。