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流行性感冒病毒鸡胚高产株的遗传特性分析 被引量:2
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作者 董婕 张立国 +3 位作者 陈爱君 吴昆昱 孙梅生 张智清 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期367-370,共4页
Influenza virus strain A/PR/8/34(H1N1)acquired a high-yielding property after serial passages in fertilized eggsSix internal RNA segments of the high-yielding strain were sequenced from their cloned cDNAs and co... Influenza virus strain A/PR/8/34(H1N1)acquired a high-yielding property after serial passages in fertilized eggsSix internal RNA segments of the high-yielding strain were sequenced from their cloned cDNAs and compared with the corresponding original sequences in the prime A/PR/8/34(H1N1)strainNinety-three point mutations were found accumulated in six genes(PB2,PB1,PA,NP,M,and NS),which lead to 27 amino acid changesA significant low mutation frequency without amino acid change was observed in PA geneThe mutation frequency at the amino acid level was the highest(about 3%)in M2 proteinOur data suggest that the unequal distribution of mutations among different viral proteins may correlate with individual role of each protein in viral 展开更多
关键词 流行性感冒病毒 高产 遗传特性分析 高产毒 基因突变
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鸭瘟鸡胚化弱毒株细菌人工染色体的构建与鉴定 被引量:2
2
作者 张传健 许梦微 +2 位作者 王志胜 侯继波 王继春 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第5期1064-1070,共7页
为了构建鸭瘟鸡胚化弱毒株DEV(atten)的细菌人工染色体(BAC),将转移载体质粒pDEVgC-pHA2DNA和DEV(atten)DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF)进行重组,通过三轮挑斑纯化,以获得纯化的鸭瘟重组病毒。将纯化的鸭瘟重组病毒的DNA电转化到E.Coli D... 为了构建鸭瘟鸡胚化弱毒株DEV(atten)的细菌人工染色体(BAC),将转移载体质粒pDEVgC-pHA2DNA和DEV(atten)DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF)进行重组,通过三轮挑斑纯化,以获得纯化的鸭瘟重组病毒。将纯化的鸭瘟重组病毒的DNA电转化到E.Coli DH10B中,对获得的克隆用酶切、PCR方法进行鉴定并测序。提取阳性克隆的DNA转染CEF,以拯救重组病毒。再通过将带有相同同源臂和UL44(糖蛋白质C,gC)基因的片段和阳性克隆的DNA共转染鸡胚成纤维细胞进行重组,以获得gC恢复病毒。采用0.01感染复数(MOI)感染CEF对亲本病毒、恢复病毒进行多步法生长曲线测定,比较其有无差异。结果显示:成功获得了DEV的mini-F重组病毒,命名为DEV(atten)-mini-F,获得2个阳性克隆S1、S2,将S1命名为pDEV(atten),应用pDEV(atten)拯救重组病毒获得gC恢复病毒DEV(atten)ΔgC-R,生长特性的结果显示亲本病毒与恢复病毒间无显著性差异。表明成功构建的DEV(atten)的细菌人工染色体为全基因组的感染性克隆。 展开更多
关键词 鸭瘟 化弱毒 细菌人工染色体
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雏鸭人工接种鸭肝炎鸡胚化弱毒株MY后组织结构动态变化的比较研究
3
作者 罗薇 柏黎黎 +3 位作者 杨晓农 刘群 刘内生 邓一科 《中国兽药杂志》 2008年第5期16-20,共5页
对鸭肝炎鸡胚化弱毒株MY接种4日龄雏鸭后的组织变化进行了动态观察比较研究。结果显示:雏鸭接毒12 h肝、肾呈现轻度细胞变性;48 h后组织变性程度减轻,汇管区周围细胞增生;144 h细胞核、浆染色加深,组织修复迹象明显;14 d结构正常。接毒1... 对鸭肝炎鸡胚化弱毒株MY接种4日龄雏鸭后的组织变化进行了动态观察比较研究。结果显示:雏鸭接毒12 h肝、肾呈现轻度细胞变性;48 h后组织变性程度减轻,汇管区周围细胞增生;144 h细胞核、浆染色加深,组织修复迹象明显;14 d结构正常。接毒12 h脾脏白髓、法氏囊滤泡中淋巴细胞减少,72 h脾、24 h法氏囊中淋巴细胞有所增多。心脏、肺、脑组织在接毒各期皆有轻度的充血、出血。鸭肝炎鸡胚化弱毒株MY与标准毒导致的多组织变性、坏死相比,其变性轻而可逆;与疫苗HY所致的组织变化相似,但结构恢复时间早。结果表明:鸭肝炎鸡胚化弱毒株MY接种4日龄雏鸭,虽可造成雏鸭肝、肾等实质器官轻微的组织病变,但损伤的组织结构可在短期内修复,并恢复至正常;脾脏、法氏囊中的淋巴细胞在接毒后,也由减少到增多。本研究为鸭肝炎鸡胚化弱毒株MY用作鸭肝炎疫苗株的安全性从病理组织学角度提供了依据。 展开更多
关键词 鸭肝炎化弱毒MY 组织结构 动态变化
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鸡球虫Eimeria tenella体外繁殖适应株的建立研究 被引量:6
4
作者 谢明权 温列娜 +1 位作者 吴惠贤 张健騑 《广东畜牧兽医科技》 2000年第4期12-15,共4页
本项目采用鸡球虫子孢子接种鸡胚、鸭胚和小鸭 ,试图培养出鸡体外繁殖适应株 ,建立起球虫体外培养模型。实验结果表明E .tenella接种 3批小鸭E .maxima接种 2批小鸭均未获成功。E .tenella接种 3批共 31只鸭胚 ,也未见子孢子发育至卵囊... 本项目采用鸡球虫子孢子接种鸡胚、鸭胚和小鸭 ,试图培养出鸡体外繁殖适应株 ,建立起球虫体外培养模型。实验结果表明E .tenella接种 3批小鸭E .maxima接种 2批小鸭均未获成功。E .tenella接种 3批共 31只鸭胚 ,也未见子孢子发育至卵囊。而E .tenella能在鸡胚中发育至卵囊。但初代次接种时 ,接种过量胚容易死亡。接种量过低 ,卵囊收获量减少。因此采用了加大接种剂量和增加接种胚数的方法 ,促使球虫逐渐适应鸡胚。直线传代至第 8代 ,球虫已适应鸡胚 ,接种剂量由每胚 4万条子孢子降至 1万条 ,一直传至 2 4代 ,建立起一株E . 展开更多
关键词 小鸭 适应 球虫 药物防治
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DHAV-3适应鸡胚毒株的培育及特性测定
5
作者 杨云川 刘锦琳 +7 位作者 刘泓邑 吴敏 刘海兰 徐兴胜 陈思怀 李阁 李德龙 李继祥 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期41-48,共8页
旨在培育鸭甲型肝炎病毒血清3型(DHAV-3)适应鸡胚毒株并对其特性进行研究。利用鸭胚从临床病料中分离得到的DHAV-3 LC强毒株经卵黄囊接种鸡胚传代、纯化获得适应鸡胚毒株,并对毒株的致病性、毒力稳定性、免疫原性和基因组特征进行测定... 旨在培育鸭甲型肝炎病毒血清3型(DHAV-3)适应鸡胚毒株并对其特性进行研究。利用鸭胚从临床病料中分离得到的DHAV-3 LC强毒株经卵黄囊接种鸡胚传代、纯化获得适应鸡胚毒株,并对毒株的致病性、毒力稳定性、免疫原性和基因组特征进行测定。结果显示,利用鸭胚接种成功从病料中分离鉴定DHAV-3 LC强毒株,对鸭胚和雏鸭的半数致死量分别为10-6.20/0.2 mL和10^(-4.25)/0.2 mL。经卵黄囊接种鸡胚69代,获得适应鸡胚毒株DHAV-3 CA。CA株的F4、F16、F21、F31、F41和F51代病毒液的ELD50分别为10^(-6.44)/0.3 mL,10^(-6.60)/0.3 mL,10^(-7.44)/0.3 mL,10^(-7.80)/0.3 mL,10-7.43/0.3 mL和10^(7.25)/0.3 mL;各代病毒对1日龄雏鸭不致病,但在体内连续传代出现接种雏鸭死亡。F21代病毒制备的油包水灭活疫苗免疫蛋鸡,血清中和抗体效价达1∶500以上;以2.5×10^(4.8)ELD50及以上剂量的F31代病毒经颈部皮下接种1日龄雏鸭,攻毒保护率均在90%以上。F21代病毒全基因组序列分析显示,与DHAV-3 LC相比,基因组内无碱基插入或缺失,但有32个位点发生碱基突变;VP0基因的C1410T和A1411G突变与病毒在鸡胚中的传代次数有相关性。本试验成功培育出适应鸡胚毒株DHAV-3 CA,具有良好的免疫原性,但存在致病性返祖现象。 展开更多
关键词 鸭甲型肝炎病毒血清3型 适应 卵黄囊接种 致病性返祖
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鸭病毒性肝炎活疫苗(CH60株)规模化生产工艺改进试验
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作者 李辰龙 王洪斌 +1 位作者 孙心 于洪涛 《兽医导刊》 2015年第6期39-40,共2页
在鸭病毒性肝炎活疫苗(CH60株)生产时,用10日龄和11日龄进行病毒增值,同时把病毒稀释倍数由100倍改为5000倍,将鸡胚死亡高峰期、最终死亡率、单胚平均收获单产、病毒含量ELD50进行对比分析,结果表明将病毒进行100倍稀释后,用11... 在鸭病毒性肝炎活疫苗(CH60株)生产时,用10日龄和11日龄进行病毒增值,同时把病毒稀释倍数由100倍改为5000倍,将鸡胚死亡高峰期、最终死亡率、单胚平均收获单产、病毒含量ELD50进行对比分析,结果表明将病毒进行100倍稀释后,用11日龄鸡胚增值鸭病毒性肝炎目日毒(CH60株)与10日龄鸡胚相比死亡高峰期时间、最终死亡率、病毒含量ELD50、单胚平均收获单产等基本相同;将病毒进行5000倍稀释后,用11日龄鸡胚增值鸭病毒性肝炎弱毒(CH60株)与10日龄鸡胚相比死亡高峰期时间推迟12~24h,最终死亡率基本相同、单胚平均收获单产可提高30%左右、病毒含量ELD50略有上升;采用5000倍稀释病毒,接种l1日龄鸡胚的生产工艺可以提高收获单产,降低生产成本,提高产品效价。 展开更多
关键词 鸭病毒性肝炎化弱毒(CH60) 稀释倍数 接种日龄
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β-丙内酯对流感病毒鸡胚高产母本株灭活条件的研究 被引量:2
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作者 唐静 鲁健 +2 位作者 郭俊峰 舒跃龙 辛丽 《国际病毒学杂志》 2016年第1期8-9,16,共3页
目的 流感病毒鸡胚高产母本株A/PR8/34株和X-157株灭活条件的研究.方法 应用改良后的β-丙内酯灭活法对流感病毒鸡胚高产母本株进行灭活.经试验证明,0.5‰β-丙内酯在37℃水浴,pH值范围在7.4-8.0之间条件下作用2h.补加0.5‰β-丙内酯,p... 目的 流感病毒鸡胚高产母本株A/PR8/34株和X-157株灭活条件的研究.方法 应用改良后的β-丙内酯灭活法对流感病毒鸡胚高产母本株进行灭活.经试验证明,0.5‰β-丙内酯在37℃水浴,pH值范围在7.4-8.0之间条件下作用2h.补加0.5‰β-丙内酯,pH值为9,温度为4℃条件下过夜,能彻底灭活且保证流感病毒表面主要抗原的完整性.结果 采用改良后的β-丙内酯灭活法对流感病毒鸡胚高产母本株A/PR8/34株和X-157株灭活效果良好,鸡胚3代安检合格.灭活前后病毒血凝滴度不变.结论 改良后的β-丙内酯灭活法可用于流感病毒鸡胚高产母本株的灭活. 展开更多
关键词 流感病毒 高产母本 β-丙内酯 灭活条件
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禽波氏杆菌鸡胚强毒株对雏鸡的致病性
8
作者 杨萍萍 朱瑞良 +3 位作者 魏凯 赵雪 胡莉萍 刘静静 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期2083-2089,共7页
以从孵化场将出壳鸡胚中分离到的鸡胚强毒株禽波氏杆菌LL09作为试验菌株,分别经鼻腔、眼睛和腹腔3种感染方式和1,7,14,21d不同日龄感染海蓝褐蛋雏鸡,检测其致病过程、病理变化,以及LL09在不同感染方式和不同感染日龄对雏鸡的生长抑制和... 以从孵化场将出壳鸡胚中分离到的鸡胚强毒株禽波氏杆菌LL09作为试验菌株,分别经鼻腔、眼睛和腹腔3种感染方式和1,7,14,21d不同日龄感染海蓝褐蛋雏鸡,检测其致病过程、病理变化,以及LL09在不同感染方式和不同感染日龄对雏鸡的生长抑制和NDV灭活苗免疫后HI抗体水平的影响差异。结果发现:LL09能引起雏鸡眼睛分泌物增多,咳嗽等呼吸道症状,且能入侵内脏组织,导致气管黏膜纤毛细胞脱落,肺出血,心肌细胞、肝细胞、脾细胞、肾小管上皮细胞等变性坏死等病理变化。3种感染方式中以腹腔感染危害最为严重,入侵内脏组织的比例最高,对雏鸡的生长抑制作用最强,对NDV免疫后HI抗体水平的影响最大,其次是经鼻腔感染组和经眼睛感染组。LL09分别于不同日龄感染雏鸡结果发现,感染日龄与LL09对雏鸡的危害直接相关,越早期感染,对雏鸡的体质量抑制越严重,对NDV免疫后的HI抗体水平的影响越大,内脏组织的感染几率越高。尤其是1d和7d感染组危害比较严重,而21d感染雏鸡症状不明显,且未在除气管和肺脏以外的内脏组织中检测到LL09的感染。对禽波氏杆菌LL09鸡胚强毒株的致病性检测结果表明,LL09作为鸡胚分离株,同样可以导致禽类的呼吸道感染,且能入侵内脏组织,以腹腔感染和1周内感染的危害最为严重。 展开更多
关键词 禽波氏杆菌 强毒 致病性
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2013~2014年中国湖北省新甲型H1N1流感病毒鸡胚适应性突变分析 被引量:4
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作者 方斌 刘琳琳 +3 位作者 叶国军 李翔 余晓 江永忠 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期582-589,共8页
为了解湖北省流感监测网络中新甲型H1N1流感病毒鸡胚适应性突变的情况,本研究对3株湖北省新甲型H1N1流感病毒鸡胚株和对应细胞株进行HA、NA和MP蛋白进化树和基因进化速率分析,氨基酸突变位点、鸡胚适应性突变位点和三维建模分析。鸡胚... 为了解湖北省流感监测网络中新甲型H1N1流感病毒鸡胚适应性突变的情况,本研究对3株湖北省新甲型H1N1流感病毒鸡胚株和对应细胞株进行HA、NA和MP蛋白进化树和基因进化速率分析,氨基酸突变位点、鸡胚适应性突变位点和三维建模分析。鸡胚株和对应细胞株在进化树分布和基因进化速率上的差异均呈现NA>HA>MP的特点,在3株鸡胚株中发现4个鸡胚适应性突变位点:HA蛋白为Q223R和V527I,NA蛋白为M19I和H275Y,其中Q223R突变会造成抗原表位Sb和Ca2相邻间的结构变化,H275Y为典型的神经氨酸酶耐药突变位点。结果表明鸡胚适应性突变会在湖北省流感监测网络的流感病毒鸡胚分离工作中发生,这些突变可能影响疫苗候选株的筛选和疫苗有效性,因此需加强流感监测网络中鸡胚适应性突变的监测工作。 展开更多
关键词 新甲型H1N1流感病毒 鸡胚株 进化树 适应性 抗原表位 耐药位点
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2017—2018年北京市东城区新甲型H1N1流感病毒HA基因特征研究 被引量:1
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作者 李艳宇 李姗姗 +1 位作者 杜嘉鑫 高鹏 《职业与健康》 CAS 2020年第20期2834-2838,共5页
目的了解2017年4月1日—2018年3月31日期间北京市东城区新甲型H1N1流感病毒流行特征,并分析细胞株和鸡胚株血凝素(HA)基因遗传变异情况。方法收集2017年4月1日—2018年3月31日期间北京市东城区流感数据,分析新甲型H1N1流感的流行特征;... 目的了解2017年4月1日—2018年3月31日期间北京市东城区新甲型H1N1流感病毒流行特征,并分析细胞株和鸡胚株血凝素(HA)基因遗传变异情况。方法收集2017年4月1日—2018年3月31日期间北京市东城区流感数据,分析新甲型H1N1流感的流行特征;用实时荧光PCR(RT-PCR)方法对选取的7株新甲型H1N1细胞分离株和其相对应的7株鸡胚株进行HA基因序列扩增并测序,用DNASTAR 5.0和MEGA 6.0软件对测序结果进行系统进化树和遗传特征分析。结果2017年4月1日—2018年3月31日期间在北京市东城区共检测样本1780份,新甲型H1N1阳性99份,阳性率是5.56%,细胞分离出新甲型H1N1为51株,鸡胚株为15株。测序成功的13株毒株与世界卫生组织(WHO)推荐的北半球疫苗株A/Michigan/45/2015(甲型/密歇根/45/2015)在系统进化树上位于同一大分支上,同源性较高。其核苷酸同源性为98.96%~100.00%,氨基酸同源性为97.92%~100.00%。其中S74R、P137S、S164T、S183P、T185N、T216K、I267T共7个氨基酸位点(包含抗原决定簇位点)发生改变,决定流感毒力的D222位点和二硫键未发生改变。结论目前北京市东城区新甲型H1N1流感病毒与疫苗株匹配性较高,但是其HA序列中氨基酸位点变异仍存在,要长期从分子水平进行监测,预防新甲型H1N1流感发生大流行。 展开更多
关键词 新甲型H1N1流感病毒 HA基因 鸡胚株 序列分析 进化树
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Different quasispecies with great mutations hide in the same subgroup J field strain of avian leukosis virus 被引量:6
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作者 MAO YaQing LI WeiHua +2 位作者 DONG Xuan LIU JinHua ZHAO Peng 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2013年第5期414-420,共7页
Blood samples were collected from a local strain of chickens associated with serious tumor cases in Shandong Province. The samples were inoculated into chicken embryo fibroblast and DF-1 cells for virus isolation and ... Blood samples were collected from a local strain of chickens associated with serious tumor cases in Shandong Province. The samples were inoculated into chicken embryo fibroblast and DF-1 cells for virus isolation and identification, respectively. The inoculated cells were screened for three common chicken tumor viruses. Nine strains of avian leukosis virus subgroup J (ALV-J) were identified, and were designated LY1201-LYI209. The env gene from the LY1201 strain was amplified and cloned. All nine resultant env clones (clones 01-09) were sequenced, and the gp85 and gp37 amino acid regions were subjected to homology analysis. Clones 01 and 03 had 10 amino acid deletions in the gp85 region compared to the other seven clones, suggesting that at least two quasispecies with obvious mutations coexist in the same field strain. Among these nine clones, three had identical gp85 and gp37 sequences, and were recognized as the dominant LY1201 quasispecies. The amino acid sequence homology of gp37 and gp85 among the nine clones was 98.5%-100.0% and 96.6%-100.0% respectively, suggesting that the gp85 region of the env gene can better display the quasispecies diversity of ALV-J than gp37. 展开更多
关键词 avian leukosis virus subgroup J(ALV-J) gp85 gp37 quasispecies diversity
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