不同配伍生物膜对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响:寻求最佳组合方式

背景:如何使生长因子安全的在体内稳定持久的表达,并获得长期的促血管生成效应是亟待解决的问题,这就需要一个良好的药物缓释系统,即可控释的生物模拟系统。目的:探讨不同配伍的生物膜对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响,寻找最佳的组合方式。设计、时间及地点:生物材料学体外观察,于2008-06/2009-05在江苏省中医院中心实验室完成。材料:通过交联剂将肝素、中药与Ⅰ型胶原发生共价结合,然后rhVEGF165、碱性成纤维细胞生长因子与肝素发生生理性结合,将血管生成素1制成微球均匀植入生物膜内,即为实验所需生物膜。方法:将制备的生物膜置于正对观察窗的鸡胚绒毛尿囊膜表面的血管最少处,然后贴在鸡胚绒毛尿囊膜表面上,封口膜封闭假气室,继续孵育。实验组在给予生物膜基础上,依次加入0,10,50,100ng碱性成纤维细胞生长因子,从中筛选出最显著促进鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的组合作为生物膜1;再依次加入100μL丹参注射液、黄芪注射液、三七总甙注射液、川芎嗪注射液,同法筛选出生物膜2;再依次加入10,50ng血管生成素Ⅰ,同法筛选出生物膜3作为实验最终结果。同时设立空白对照组,鸡胚绒毛尿囊膜表面未贴生物膜,仅加入PBS。加药7d后取绒毛尿囊膜,拍摄给药部位,采用Image Pro Plus 5.0.2进行数据收集。主要观察指标:不同配伍的生物膜对血管新生面积的影响。结果:①与空白对照组比较,生物膜+0,10,50,100ng碱性成纤维细胞生长因子各组新生血管面积均明显增加,其中生物膜+100ng碱性成纤维细胞生长因子组增加幅度最高(P<0.01),为此将其选为生物膜1。②与生物膜1组比较,生物膜1+三七总甙注射液组、生物膜1+川芎嗪注射液组无明显变化,生物膜1+丹参注射液组、生物膜1+黄芪注射液组新生血管面积分别增加25.48%,63.21%(P均<0.01),因此将生物膜1+黄芪注射液组作为生物膜2的最佳组成。③与生物膜2组比较,生物膜2+10ng血管生成素Ⅰ组新生血管面积无明显差异;生物膜2+50ng血管生成素Ⅰ组新生血管面积增加21.49%(P<0.05),因此将其作为生物膜3。结论:在实验制备的生物膜基础上,加入100ng碱性成纤维细胞生长因子、100μL黄芪注射液组、50ng血管生成素Ⅰ的组合,具有明显促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的作用。

益气消癥法方药含药血清对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响

目的:观察益气消癥法方药含药血清对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生的影响。方法:实验分正常空白血清组(空白血清组)、西药米非司酮组(RU486组)、中药高中低剂量组(中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组)、17β-Estradiol组(E2组)、ICI 182,780组(ICI组)、E2+ICI组、中药高中低剂量+E2组。取7日龄鸡胚制成CAM模型。各组加入药液后继续孵育72h。解剖显微镜下放大10倍,计数各组滤纸片周围一二级血管数。结果:中药高剂量组一二级血管数明显低于空白血清组,差异有显著性(P<0.01);中药中剂量组二级血管数低于空白血清组,差异有显著性(P<0.01),但中药中剂量组二级血管数高于中药高剂量组,差异有显著性(P<0.05);中药中剂量组二级血管数和中药低剂量组一二级血管数与空白血清组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。E2+中药高剂量组一二级血管数低于E2组,差异有显著性(P<0.01)。E2+中药中剂量组和E2+中药低剂量组一二级血管数与E2组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:益气消癥法方药含药血清对CAM血管新生有抑制作用,并且中药含药血清有抑制雌激素促血管增殖的作用。

1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮新衍生物对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的抑制作用研究

目的 研究 1H 异吲哚 1,3(2H) 二酮新衍生物对血管新生的抑制作用。方法 应用鸡胚绒毛尿囊膜血管生成模型 ,通过计数、比较载体周围 0 5cm内血管的分支点数 ,观察不同化合物对于在体血管新生的抑制作用。结果 通过对 18种 1H 异吲哚 1,3(2H) 二酮新衍生物的研究 ,发现化合物 1,2 ,3,4 ,11和 13对鸡胚绒毛尿囊膜的血管新生有明显的抑制作用。结论 筛选出来的化合物 1,2 ,3,4 ,11和13有望成为新的抑制血管新生的药物。

鸡胚绒毛尿囊膜数字图像血管定量分析

目的:以生物医学工程的角度,研究基于数字图像处理技术的鸡胚绒毛尿囊膜图像血管自动分析方法,设计和研制专用实验检测系统。方法:实验于2005-06/2007-06分别在上海理工大学医疗器械与食品学院中心实验室和上海中医药大学进行。根据鸡胚绒毛尿囊膜血管图像的特点,研究和开发了包括鸡胚绒毛尿囊膜血管数字图像背景褪色、血管增强、背景和血管定标、标尺校准、血管测量区域划分、血管面积及面积比参数测量等主要分析软件,以及相应的测量分析系统。通过实验检验分析方法和测量参数,并对分析系统进行改进。结果:建立了有效的鸡胚绒毛尿囊膜数字图像血管自动分析的方法和步骤,研制了专用的实验分析系统。通过药物实验对鸡胚绒毛尿囊膜血管图像进行了参数检测,获取了多组实验数据,并进行了统计分析。统计分析结果显示试验药物有抑制血管生长作用,且作用大小呈剂量依赖关系。结论:经实验证明基于数字图像处理技术的鸡胚绒毛尿囊膜图像血管自动分析方法能提供可靠的鸡胚绒毛尿囊膜模型定量分析数据,并且在分析速度、测量精度、数据重复性等方面均优于常规人工目测血管计数方法。

单味成分生脉素促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的实验研究

目的 :建立研究生脉素含药血清促进血管生成活性的鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM ,ChickenChorioal lantoicMembrane)实验模型 ,探讨生脉素促进血管生成活性的作用机理 ,阐明生脉素促进血管生成的生物学机制。方法 :将高、中、低剂量生脉素及空白对照含药血清作为被测物置于CAM表面的载体上 ,作用后制备CAM标本 ,解剖显微镜下观察、计算机图像分析仪图像分析 ,得到定量数据 ,进一步统计学分析。结果 :生脉素含药血清具有明显的促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的作用 ,用药组较空白组有显著性差异 ,中剂量组较低剂量有显著性差异 ,高、中剂量组无差异。

鸡传染性法氏囊病毒鸡胚适应株的培育

将鸡传染性法氏囊病毒（IBDV）野毒株分别经绒毛膜和尿囊腔途径接种于鸡胚进行传代培养，应用AGP法和Dot－ELISA法分别对每代收取的不同培养物（绒毛膜和尿囊液）进行检测。结果显示，经绒毛膜途径传至第3代，尿囊腔途径传至第4—5代，即成为鸡胚完全适应株，可作为鸡胚培养病毒用毒种，方法应选择操作简便、且收获物质量高。数量多的尿囊腔接种途径。

鬼臼毒素及其衍生物对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管生成的影响

目的:建立鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验模型,观察鬼臼毒素及其衍生物对CAM新生血管生成的影响。方法:鸡胚孵育7d后,将无水乙醇溶解的鬼臼毒素及其衍生物的明胶海绵载体植入CAM上,并孵化72h。剪下CAM,解剖镜下拍照,计数血管,分析其对于血管生成的影响。结果:去氧鬼臼毒素、苦鬼臼毒酮、苦鬼臼毒素和鬼臼毒素具有明显抑制CAM血管生成作用,鬼臼毒酮和异苦鬼臼毒素抑制作用不明显。结论:鬼臼毒素及其衍生物抗肿瘤活性可能与其抑制新生血管的作用有关。

检测成纤维细胞生长因子生物学活性的一种新方法

9日龄来杭鸡鸡胚绒毛尿囊膜(chorfoallantoic mcmbrance, CAM)植入甲基纤维素九作为待测成分载体,于载体中加入50～100ng/10μl重组碱性成纤维细胞生长因子(rccombinant basic fibroblast growth factor, rbFGF),3天后,即可观察到rbFGF明显诱导尿囊膜血管增粗和载体周围新生毛细血管密度增加并呈辐辏状。该技术是一个能在体内检测rbFGF的生物学活性的简便适用的方法。

鸡胚绒毛膜尿囊膜血管试验法用于评价化妆品眼刺激性的可行性研究

目的研究鸡胚绒毛膜尿囊膜血管试验法(chorioallantoic membrane vascular assay,CAMVA)评价化妆品眼刺激性的可行性,并用改良后的方法对14种市售化妆品进行眼刺激性的评价。方法通过控制样品的浓度、与鸡胚绒毛膜尿囊膜的接触时间,以及对评价体系的改良,尝试建立一套标准的CAMVA法评价化妆品眼刺激性的方法。结果护肤类产品无刺激性,用后冲洗类、染发类产品的浓度、与鸡胚绒毛膜尿囊膜的接触时间均与刺激性大小成正比。在3%的浓度下,用后冲洗类产品的最佳接触时间为20 min,体内外试验结果一致性为90%(9/10);染发类产品为5 min,体内外试验结果一致性为100%(2/2)。结合改良后的评价体系可做到刺激性分级,体内外试验结果一致性为用后冲洗类产品80%(8/10),染发类产品50%(1/2)。结论用CAMVA法可以对化妆品的眼刺激性进行评价,但实验条件和判定标准还需进一步优化。

碳酸酐酶对鸡胚血液酸碱平衡的抑制效应

碳酸酐酶有催化CO2+H2O=H2CO3的效应。这种酶存在于血液中CO2和许多离子运输过程的生物学系统中（Bundy,1977）。尽管很久以前,人们就了解到鸡胚组织中含有碳酸酐酶,但是,有关其生理作用的研究（Clark,1951;Gay等,1981）很少。

传染性法氏囊病病毒广西流行毒株的分离鉴定及其遗传进化分析

为了解传染性法氏囊病病毒（IBDV）广西流行株的遗传变异规律，本研究通过鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）接种的方法对2006年-2007年间采集自广西各鸡场的疑似传染性法氏囊病（IBD）的病料进行病毒分离，设计针对VP2高变区（vVP2）g／引物对分离物通过RT—PCR进行鉴定及序列分析。共分离出9个IBDV毒株，其ELD50在105／0．2毫升～106．5／0．2毫升之间。

17400 鲨鱼软骨血管生成抑制因子的纯化及生物学活性研究

采用盐酸胍抽提、膜超滤、丙酮分级沉淀、Sephadex-75柱层析和C_4反相高效液相色谱等分离步骤,从广东阳江鲨鱼软骨中纯化获得新的鲨鱼软骨血管生成抑制因子SCAI-c(Shark Cartilage Angiogenesis In-hibitor-c,SCAI-c);SDS-PAGE电泳银染显示为一条带,根据蛋白质的相对迁移率计算,分子量为17 400;它对鸡胚绒毛尿囊膜血管的形成具有显著抑制效应,并有明显的浓度依赖关系.SCAI-c与SCAI-a具有类似的生物学特征.

齐墩果酸和去氧胆酸衍生物合成及抗血管生成活性研究

目的合成齐墩果酸、去氧胆酸-丙酮基衍生物并评价2者对新生血管生成的影响。方法以丙酮/K2CO3作为反应体系,利用溴代川芎嗪分别与齐墩果酸和去氧胆酸发生亲核取代反应,得到齐墩果酸和去氧胆酸衍生物。采用鸡胚绒毛尿囊膜模型(chorioallantoic membrane,CAM)对其进行在体新生血管活性评价。结果产物结构经1H-NMR、13C-NMR及IR确证为齐墩果酸乙酰甲酯和和去氧胆酸乙酰甲酯;二者作用于CAM模型后,新生血管的数目均比空白组减少。结论在丙酮/K2CO3/溴代川芎嗪反应体系中,得到齐墩果酸和去氧胆酸-丙酮基衍生物;经CAM模型测试发现去氧胆酸-丙酮基衍生物对新生血管具有较好抑制活性。

干扰素生物学作用的研究进展

干扰素（Interferon．IFN）是人和动物细胞受到适宜的刺激时产生的一种微量的、具有高度生物学活性的糖蛋白．是由Issacs和Lindenmann等于1957年利用鸡胚绒毛尿囊膜研究流感病毒干扰现象时发现的。随着分子生物学及DNA重组技术的迅速发展．应用基因工程技术将会生产出大量高效的十扰素应用于人畜疾病。同时中药也能诱导机体产生干扰素，从而发挥其各种生物学作用，相信随着中药有效成分的进一步深入研究，干扰素将会得到更为广泛的应用。

鸡干扰素研究进展

干扰素（Interferon，IFN）是1957年，英国病毒生物学家AlickIsaacs和瑞士研究人员Jean Lindenmann在利用鸡胚绒毛尿囊膜研究流感干扰现象时发现的，被病毒感染的细胞产生一种能作用于其他细胞并干扰病毒复制的因子，故将其命名为干扰素。

重组人内皮抑制素抑制肺黑色素瘤转移

目的:研究重组人内皮抑制素的抗肿瘤活性。方法:鸡胚绒毛尿囊膜实验观察重组人内皮抑制素的体内抗血管生成活性;将B16-BL6黑色素瘤细胞尾静脉注入C57BL/6小鼠体内,构建肺转移瘤模型,评价重组人内皮抑制素的抗肿瘤活性。结果:重组人内皮抑制素可以明显抑制血管的生成。与生理盐水组相比,高、中、低剂量重组人内皮抑制素明显减少肺转移瘤数目,并对由于黑色素瘤体积的增长而引起的肺重增加也有抑制趋势。结论:重组人内皮抑制素通过抑制血管生成可以抑制肺黑色素瘤的转移。

苦参总碱对血管生成抑制作用的初步研究

水煎煮法提取苦参总碱(Alkaloids ofSophora Flavescens,ASF),检测其对鸡胚绒毛尿囊膜(chickchorioallantoic membrance,CAM)血管生成的影响,并以鸡胚绒毛尿囊膜为模型检测其活性.结果发现,2 mg/ml4、mg/ml、8 mg/ml给药组的血管数目较对照组均明显减少(P<0.05),所有给药组显微镜所见的血管结构均较对照组模糊.2 mg/ml、4 mg/ml、8 mg/ml三个给药组对CAM血管生成的抑制率分别为14.8%、28.1%和46.0%.因此,苦参总碱对CAM血管生成有一定的抑制作用.

鸭瘟活疫苗生产工艺改进试验

利用尿囊腔接种法替代绒毛尿囊膜接种法生产鸭瘟活疫苗,收获的胚液和绒毛尿囊膜及胎儿的病毒含量(ELD50 )均高于《中华人民共和国兽用生物制品规程》2000年版中的病毒含量标准,而且降低了早死率,提高了鸡胚利用率。

研制鸡痘细胞冻干苗的试验报告

鸡痘是威胁养鸡业流行较广的一种传染病。在预防上使用的疫苗,日本是用鸡胚和鸭胚绒毛尿囊膜制作的,我国目前使用的“鸡痘鹌鹑化弱毒疫苗”也是用鸡胚绒毛尿囊膜制作的,这种方法产量少、方法烦琐。从一九七六年五月到一九七七年九月,我们共同研制了鸡痘细胞冻干苗,兹将试验情况报告如下: