鸡胚绒毛尿囊膜试验(HET-CAM)评价化妆品原料舒缓功效的创新方法建立和应用

通过对经典的鸡胚绒毛尿囊膜试验(HET-CAM)进行创新改良,并对其评估化妆品原料的舒缓功效方面进行了初步应用。将0.05%浓度的SDS溶液滴加到鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)表面,建立SDS刺激模型,作为阳性对照。将SDS溶液分别与不同浓度的舒缓原料配置成受试溶液,滴加到CAM表面,记录5 min内CAM开始出现出血、血管溶解、凝血的时间,通过计算IS值,评价受试溶液的刺激性。结果表明,0.05%的SDS能引起CAM的中度刺激性,而不同舒缓原料能够不同程度地减轻或完全拮抗0.05%SDS的刺激性。因此,本研究建立了CAM试验评价原料舒缓功效的方法,通过比较IS值大小,可判断不同原料拮抗SDS刺激性的程度,从而对原料的舒缓功效进行评价。

鸡胚绒毛尿囊膜试验评估氨基酸表面活性剂与常规表面活性剂的眼刺激性

通过鸡胚绒毛尿囊膜试验(Het-Cam Test)研究氨基酸表面活性剂与常规表面活性剂对眼的刺激性。分别配制质量分数为1%的被测溶液,取0.3 m L滴加在鸡胚绒毛尿囊膜上反应5 min,对试验过程录影并拍照,根据刺激评分(IS)法测评结果。由试验结果可知,IS(椰油酰甘氨酸)=4.93,IS(月桂酸肌氨酸钠)=4.95,IS(椰油酰丙氨酸钠)=4.96,IS(月桂醇硫酸酯铵)=9.59,IS(月桂醇聚醚硫酸酯钠)=9.25,IS(月桂酰两性基乙酸钠)=9.10,IS(烷基糖苷)=4.82。除烷基糖苷外,氨基酸表面活性剂较其他被测常规表面活性剂温和。

鸡胚尿囊膜(HET-CAM)眼刺激替代试验对产品及原料评价的比较

目的比较鸡胚尿囊膜试验(HET-CAM)作为一种眼刺激替代方法对产品或原料的评价。方法采用HET-CAM和兔眼Draize试验方法,对19种原料和23种化妆品及家用洗涤产品眼刺激性进行检测,对体内体外试验的结果进行统计比较。结果比较体内体外试验,原料和产品的kappa系数分别为0.826,0.531;灵敏度分别为100%,81.8%;特异度分别为85.7%,77.8%。结论 HET-CAM可作为Draize试验的替代试验,HET-CAM系统更适合对单纯化学品原料进行眼刺激试验。

鸡胚绒毛尿囊膜试验研究不同香波对眼的刺激强度

通过鸡胚绒毛尿囊膜试验(Het-Cam Test)研究6款香波对眼的刺激强度。分别配制质量分数1%的香波溶液,取0.3 m L溶液滴加在鸡胚绒毛尿囊膜上,反应5 min,对试验过程录影并拍照,并根据刺激评分(IS)法测评结果。结果发现:(1)由索芙特提供的焗油修复类型和氨基酸表活无硅类型香波为轻度刺激品,清爽去屑类型香波为中度刺激品,P品牌焗油护理香波为轻度刺激品,清爽去屑香波为中度刺激品,Z品牌无硅生姜香波为轻度刺激品;(2)去屑类香波的刺激性比其他品类略高;(3)在本试验所采用的香波样品中,含聚二甲基硅氧烷(PDMS)的香波和不含PDMS的香波都是轻度刺激品,但含PDMS的香波刺激评分(IS)比不含PDMS的香波低。

10种常用防晒剂的鸡胚绒毛尿囊膜试验和人体皮肤斑贴试验研究

根据使用频率选用了4-甲基苄亚基樟脑、甲氧基肉桂酸乙基己酯、奥克立林、水杨酸乙基己酯、胡莫柳酯、二甲基PABA乙基己酯、二苯酮-3、双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪、苯基苯并咪唑磺酸和丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷等具有代表性的10种有机防晒剂,通过鸡胚绒毛尿囊膜试验和人体皮肤斑贴试验分别对每种防晒剂的刺激性进行了评价。HET-CAM实验结果表明,苯基苯并咪唑磺酸和二苯酮-3具有强刺激性,其他8种防晒剂具有中度刺激性;人体皮肤斑贴试验结果显示,苯基苯并咪唑磺酸和二苯酮-3对皮肤有不良反应,其他8种防晒剂对皮肤无不良反应。

鸡胚绒毛尿囊膜试验用于化妆品的体外眼刺激性评价

采用鸡胚绒毛尿囊膜(HET-CAM)试验评价了66种不同品类化妆品筛选配方或终配方产品的眼刺激性,并与家兔眼刺激试验结果比较,考察HET-CAM试验的可靠性,并建立本实验室该方法的化妆品产品眼刺激性评价标准。家兔眼刺激试验结果表明,66个样品中有6个样品具有微刺激性,4个样品为轻刺激性,其余样品均无眼刺激性。按照国家质量监督检验检疫总局的行业标准分级,HET-CAM法共有38个样品为眼刺激阳性,假阳性率50.0%,假阴性率为0,灵敏度为100%,特异度为66.7%,如果采用≤4分为眼刺激阴性,>4分为眼刺激阳性的评价标准,则66个样品中有29个样品为眼刺激阳性,37个样品为眼刺激阴性,灵敏度为100%,特异度提高至74.7%,假阴性率为0,假阳性率降低至33.9%。结果显示,HET-CAM试验用于化妆品产品的体外眼刺激性评价时,可采用刺激积分≤4分为无眼刺激,>4分为眼刺激性阳性的判断标准。

活血化瘀中药对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的观察常用活血化瘀中药赤芍、当归、红花、川芎、丹参、黄芪及复方当归补血汤、血府逐瘀汤、芎芍胶囊等对鸡胚绒毛尿囊膜(chorioall antoic membrane,CAM)新生血管生成的影响。方法制备CAM模型,分别应用赤芍、当归、红花、川芎、丹参、黄芪及当归补血汤、血府逐瘀汤、芎芍胶囊的含药血清,观察CAM血管生成的情况,同时,设立生理盐水对照组、空白血清对照组、空白对照组及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)阳性对照组。结果所选药物及bFGF皆有促进CAM新生血管生成的作用,其中,丹参及当归补血汤、血府逐瘀汤、芎芍胶囊等复方在血管生成及血管计数方面,均明显优于生理盐水对照组、空白血清对照组及空白对照组,与阳性对照药bFGF的作用相当;中药复方的作用优于丹参之外的其他单味中药。结论活血化瘀中药丹参及当归补血汤、血府逐瘀汤、芎芍胶囊具有较好的促进CAM新生血管生成的作用。本实验从一个侧面阐明了活血化瘀中药及方剂治疗缺血性疾病的作用机理,同时,研究也体现了中药复方应用的科学依据。

麝香保心丸对鸡胚绒毛尿囊膜及培养的血管内皮细胞的促血管生成作用

目的 :探讨麝香保心丸在鸡胚绒毛尿囊膜模型及培养的微血管内皮细胞系统中的促血管生成作用。方法 :分别以重组碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF ,贝复济 )和生理盐水为阳性和阴性对照 ,作用于绒毛尿囊膜 (chrioallantoicmembrane ,CAM) ,通过一级、二级血管计数 ,初步评价麝香保心丸的促血管生成活性 ;并通过观察它对培养的牛肾上腺微血管内皮细胞增殖及管腔结构形成的影响 ,验证其促血管生成效应 ;同时检测麝香保心丸作用于培养的人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 (VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的mRNA表达及其上清液中VEGF、bFGF含量 ,初步探索其作用机理。结果 :麝香保心丸组CAM上血管数比生理盐水组明显增加 ;麝香保心丸组内皮细胞及管腔数目均较生理盐水组明显增多 ,前者细胞表达VEGF和bFGFmRNA明显增高 ,上清液中VEGF和bFGF含量明显增多。结论 :麝香保心丸能促进CAM及培养的微血管内皮细胞的血管生成。

26种活血化瘀中药对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的:采用鸡胚绒毛尿囊膜(ChickChorioallantoicMembrane,CAM)法从26种活血化瘀中药中初筛血管生成抑制剂。方法:试验组分别为26种活血化瘀中药,所用片剂、胶囊剂、丸剂、散剂溶解成饱和溶液,汤剂制成含生药2g/ml的水煎醇沉液,注射液、口服液、膏剂用原药物浓度。种鸡蛋孵化7天,建立CAM模型,按20μl胚加药液于明胶海绵载体上,每日1次,连续3天。孵化第10天,计数CAM载体周围5mm的血管分支点。结果:15种活血化瘀中药CAM的血管分支点数量降低(P<0.05)。结论:榄香烯乳剂、莪术油葡萄糖注射液、磷酸川芎嗪注射液、注射用阿魏酸钠、雷公藤多苷片、火把花根片、祖师麻片、复方斑蝥胶囊、大黄广廿灬虫虫丸、大活络丸、复方丹参滴丸、七厘散、活血通脉片、三棱丸及桃红四物汤Ⅱ号具有抑制CAM血管生成的作用。

鸡胚绒毛尿囊膜技术的改进

目的 :摸索改进鸡胚绒毛尿囊膜 (chickchorioallantoicmembrane ,CAM)技术 ,为抗血管形成药物筛选提供良好的体内血管实验模型。方法 :对传统的蛋壳上开窗方式的CAM技术进行改进 ,将孵育 3d的鸡胚脱离蛋壳移入平皿中 ,继续孵育 3d后将待测药物植入到CAM和卵黄囊膜 (yolksacmembrane,YSM )上 ,2 4h后观察药物对CAM和YSM血管的作用。结果 :平皿中孵育鸡胚至第 6天 ,鸡胚存活率为 46 .7% ,生长状况良好 ,CAM直径达到1.2cm。检测的 6种药物出现两种不同的心血管效应 ,即抑制和吸引趋化血管的效应。结论 :平皿中孵育CAM技术在研究药物、生物因子、肿瘤等的血管效应方面有良好的应用价值。

黄芪、当归配伍后促鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的药效比较研究

目的 :探讨黄芪、当归不同配伍对鸡胚绒毛尿囊膜 (chorioallantoicmembrane ,CAM )新生血管生成的影响。方法 :制备CAM模型 ,观察应用黄芪与当归 5∶1配比的含药血清后CAM血管生成的情况。结果 :黄芪与当归合用后 ,在血管生成表现以及血管计数方面 ,均明显优于生理盐水对照组及其他配比组。结论 :黄芪与当归按 5∶1配伍具有较好的促进CAM新生血管生成的作用 ,表明当归补血汤原方配比为最佳组合 。

重楼中几个甾体皂苷类成分对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的对重楼中的成分进行分离鉴定,结合药理模型筛选具有抑制血管生长活性的成分。方法采用乙酸乙酯提取和硅胶柱层析法进行提取分离;利用1HNMR、13CNMR、13CNMR-APT、MS、IR、UV确定其化学结构,并且应用鸡胚绒毛尿囊膜模型进行活性筛选。于鸡胚发育的第7天,将加药后的明胶海绵载体加于鸡胚绒毛尿囊膜上,孵育2 d后,固定鸡胚绒毛尿囊膜,取出观察。结果从重楼中分离得到了4个甾体皂苷类成分,分别为重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅴ和纤细薯蓣皂苷。通过活性筛选发现重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、纤细薯蓣皂苷3组鸡胚尿囊膜的小血管数目均小于空白组,其中重楼皂苷I经统计分析P<0.05具有显著性差异。结论重楼皂苷Ⅰ具有抑制血管生长的活性。

龙葵抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的研究

目的:探讨龙葵对血管新生的影响。方法:应用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生模型进行研究,在鸡胚培养的第7天,分别给予高、中、低3个剂量(2·5,2·0,1·5mg·μL-1)的龙葵水提物。培养至第9天收集数据进行评估。结果:龙葵给药组血管新生面积明显小于对照组(P<0·001)。病理形态学分析表明,给药组载体下CAM新生组织中新生血管数显著减少,并可见大血管结构破坏迹象。周围CAM组织中仅见少量新生血管。而对照组的载体下组织及周围CAM中均见大量新生血管。结论:龙葵可明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管新生。

鸡胚绒毛尿囊膜血管生成模型在中药研究中应用方法探讨

本文对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成模型 (鸡胚CAM )进行改良 ,尝试用中药血清药理学方法、组织匀浆、中药多糖及生药等给药方式 ,将本血管活性整体模型引入中医药研究中。

水蛭、斑蝥对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的影响

目的研究中药水蛭、斑蝥对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的影响。方法将12只Wistar大鼠随机分为水蛭组(高低剂量组)、斑蝥组(高低剂量组)、血清组和空白组,中药水蛭、斑蝥各制成水煎液,灌胃7d,采血清备用。建立6d鸡胚绒毛尿囊膜血管模型,观察各组血清对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的影响。结果水蛭高剂量组有明显地抑制新生血管数量的作用,与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05);斑蝥高、低剂量组与空白组比较,亦能较强地抑制新生血管数(P<0.05);水蛭、斑蝥高低剂量组有抑制血管生成面积的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论虫类中药水蛭、斑蝥对CAM血管生成有一定的抑制作用。

芥子碱对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的:探讨芥子碱对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)新生血管生成的影响。方法:用溶剂萃取法制备芥子碱,通过CAM模型,检测芥子碱对CAM新生血管生成的影响。结果:与生理盐水对照组相比,中、大剂量芥子碱组(5.0、10.0g/L)CAM实验作用部位的血管生成明显受抑,周围血管网模糊,密度减少(P<0.01),抑制率分别达到54.24%和71.62%,而小剂量组(2.5g/L)差异不显著(P>0.05)。结论:芥子碱具有一定的抗血管生成活性,且其作用效果呈剂量依赖性。

蛇莓抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管新生作用研究

目的:研究蛇莓对血管新生的影响。方法:应用鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)血管新生模型,在鸡胚培养的第7天,分别给予大、中、小三个剂量的蛇莓水提物,培养至第9天收集数据进行评估。结果:蛇莓给药组血管新生面积明显小于对照组(P<0.001),载体下CAM新生组织中新生血管数显著减少,并可见大血管结构破坏迹象,载体周围CAM组织中仅见少量新生血管。而对照组的载体下组织及周围CAM中均见大量新生血管。结论:蛇莓可明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管新生。