鸡胚绒毛尿囊膜试验(HET-CAM)评价化妆品原料舒缓功效的创新方法建立和应用

通过对经典的鸡胚绒毛尿囊膜试验(HET-CAM)进行创新改良,并对其评估化妆品原料的舒缓功效方面进行了初步应用。将0.05%浓度的SDS溶液滴加到鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)表面,建立SDS刺激模型,作为阳性对照。将SDS溶液分别与不同浓度的舒缓原料配置成受试溶液,滴加到CAM表面,记录5 min内CAM开始出现出血、血管溶解、凝血的时间,通过计算IS值,评价受试溶液的刺激性。结果表明,0.05%的SDS能引起CAM的中度刺激性,而不同舒缓原料能够不同程度地减轻或完全拮抗0.05%SDS的刺激性。因此,本研究建立了CAM试验评价原料舒缓功效的方法,通过比较IS值大小,可判断不同原料拮抗SDS刺激性的程度,从而对原料的舒缓功效进行评价。

鸡胚绒毛膜尿囊膜血管试验法用于评价化妆品眼刺激性的可行性研究

目的研究鸡胚绒毛膜尿囊膜血管试验法(chorioallantoic membrane vascular assay,CAMVA)评价化妆品眼刺激性的可行性,并用改良后的方法对14种市售化妆品进行眼刺激性的评价。方法通过控制样品的浓度、与鸡胚绒毛膜尿囊膜的接触时间,以及对评价体系的改良,尝试建立一套标准的CAMVA法评价化妆品眼刺激性的方法。结果护肤类产品无刺激性,用后冲洗类、染发类产品的浓度、与鸡胚绒毛膜尿囊膜的接触时间均与刺激性大小成正比。在3%的浓度下,用后冲洗类产品的最佳接触时间为20 min,体内外试验结果一致性为90%(9/10);染发类产品为5 min,体内外试验结果一致性为100%(2/2)。结合改良后的评价体系可做到刺激性分级,体内外试验结果一致性为用后冲洗类产品80%(8/10),染发类产品50%(1/2)。结论用CAMVA法可以对化妆品的眼刺激性进行评价,但实验条件和判定标准还需进一步优化。

鸡胚绒毛尿囊膜血管生成模型在中药研究中应用方法探讨

本文对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成模型 (鸡胚CAM )进行改良 ,尝试用中药血清药理学方法、组织匀浆、中药多糖及生药等给药方式 ,将本血管活性整体模型引入中医药研究中。

鸡胚尿囊绒毛膜法研究细胞间黏附分子-1在血管生成中的作用

目的 探讨细胞间黏附分子 1(intercellularadhesionmolecule 1,ICAM 1)在血管生成中的作用。 方法采用鸡胚尿囊绒毛膜 (chorioallantoicmembrane ,CAM)法进行在体血管生成实验。 结果 1 10d鸡胚的尿囊绒毛膜经ICAM 1作用 3d后 ,明胶海绵周围放射状走行的微血管非常明显 ,似车辐 ,显微镜下明胶海绵内有垂直长入的微血管 ,明胶海绵周边CAM间充质内微血管数目显著多于对照组 (P <0 0 1)。 2 6d鸡胚的尿囊绒毛膜经Anti ICAM 1作用 3d后 ,明胶海绵周围放射状走行的微血管极不明显 ,显微镜下明胶海绵内几乎没有新生的微血管 ,明胶海绵周边CAM间充质内微血管数目显著少于对照组 (P <0 0 1)。 结论 结果提示 1 ICAM 1有诱导微血管生成的作用 ;2 ICAM 1参与胚胎的血管生成。

益气消癥法方药含药血清对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响

目的:观察益气消癥法方药含药血清对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生的影响。方法:实验分正常空白血清组(空白血清组)、西药米非司酮组(RU486组)、中药高中低剂量组(中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组)、17β-Estradiol组(E2组)、ICI 182,780组(ICI组)、E2+ICI组、中药高中低剂量+E2组。取7日龄鸡胚制成CAM模型。各组加入药液后继续孵育72h。解剖显微镜下放大10倍,计数各组滤纸片周围一二级血管数。结果:中药高剂量组一二级血管数明显低于空白血清组,差异有显著性(P<0.01);中药中剂量组二级血管数低于空白血清组,差异有显著性(P<0.01),但中药中剂量组二级血管数高于中药高剂量组,差异有显著性(P<0.05);中药中剂量组二级血管数和中药低剂量组一二级血管数与空白血清组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。E2+中药高剂量组一二级血管数低于E2组,差异有显著性(P<0.01)。E2+中药中剂量组和E2+中药低剂量组一二级血管数与E2组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:益气消癥法方药含药血清对CAM血管新生有抑制作用,并且中药含药血清有抑制雌激素促血管增殖的作用。

活血化瘀中药对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的观察常用活血化瘀中药赤芍、当归、红花、川芎、丹参、黄芪及复方当归补血汤、血府逐瘀汤、芎芍胶囊等对鸡胚绒毛尿囊膜(chorioall antoic membrane,CAM)新生血管生成的影响。方法制备CAM模型,分别应用赤芍、当归、红花、川芎、丹参、黄芪及当归补血汤、血府逐瘀汤、芎芍胶囊的含药血清,观察CAM血管生成的情况,同时,设立生理盐水对照组、空白血清对照组、空白对照组及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)阳性对照组。结果所选药物及bFGF皆有促进CAM新生血管生成的作用,其中,丹参及当归补血汤、血府逐瘀汤、芎芍胶囊等复方在血管生成及血管计数方面,均明显优于生理盐水对照组、空白血清对照组及空白对照组,与阳性对照药bFGF的作用相当;中药复方的作用优于丹参之外的其他单味中药。结论活血化瘀中药丹参及当归补血汤、血府逐瘀汤、芎芍胶囊具有较好的促进CAM新生血管生成的作用。本实验从一个侧面阐明了活血化瘀中药及方剂治疗缺血性疾病的作用机理,同时,研究也体现了中药复方应用的科学依据。

麝香保心丸对鸡胚绒毛尿囊膜及培养的血管内皮细胞的促血管生成作用

目的 :探讨麝香保心丸在鸡胚绒毛尿囊膜模型及培养的微血管内皮细胞系统中的促血管生成作用。方法 :分别以重组碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF ,贝复济 )和生理盐水为阳性和阴性对照 ,作用于绒毛尿囊膜 (chrioallantoicmembrane ,CAM) ,通过一级、二级血管计数 ,初步评价麝香保心丸的促血管生成活性 ;并通过观察它对培养的牛肾上腺微血管内皮细胞增殖及管腔结构形成的影响 ,验证其促血管生成效应 ;同时检测麝香保心丸作用于培养的人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子 (VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的mRNA表达及其上清液中VEGF、bFGF含量 ,初步探索其作用机理。结果 :麝香保心丸组CAM上血管数比生理盐水组明显增加 ;麝香保心丸组内皮细胞及管腔数目均较生理盐水组明显增多 ,前者细胞表达VEGF和bFGFmRNA明显增高 ,上清液中VEGF和bFGF含量明显增多。结论 :麝香保心丸能促进CAM及培养的微血管内皮细胞的血管生成。

26种活血化瘀中药对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的:采用鸡胚绒毛尿囊膜(ChickChorioallantoicMembrane,CAM)法从26种活血化瘀中药中初筛血管生成抑制剂。方法:试验组分别为26种活血化瘀中药,所用片剂、胶囊剂、丸剂、散剂溶解成饱和溶液,汤剂制成含生药2g/ml的水煎醇沉液,注射液、口服液、膏剂用原药物浓度。种鸡蛋孵化7天,建立CAM模型,按20μl胚加药液于明胶海绵载体上,每日1次,连续3天。孵化第10天,计数CAM载体周围5mm的血管分支点。结果:15种活血化瘀中药CAM的血管分支点数量降低(P<0.05)。结论:榄香烯乳剂、莪术油葡萄糖注射液、磷酸川芎嗪注射液、注射用阿魏酸钠、雷公藤多苷片、火把花根片、祖师麻片、复方斑蝥胶囊、大黄广廿灬虫虫丸、大活络丸、复方丹参滴丸、七厘散、活血通脉片、三棱丸及桃红四物汤Ⅱ号具有抑制CAM血管生成的作用。

黄芪、当归配伍后促鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的药效比较研究

目的 :探讨黄芪、当归不同配伍对鸡胚绒毛尿囊膜 (chorioallantoicmembrane ,CAM )新生血管生成的影响。方法 :制备CAM模型 ,观察应用黄芪与当归 5∶1配比的含药血清后CAM血管生成的情况。结果 :黄芪与当归合用后 ,在血管生成表现以及血管计数方面 ,均明显优于生理盐水对照组及其他配比组。结论 :黄芪与当归按 5∶1配伍具有较好的促进CAM新生血管生成的作用 ,表明当归补血汤原方配比为最佳组合 。

重楼中几个甾体皂苷类成分对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的对重楼中的成分进行分离鉴定,结合药理模型筛选具有抑制血管生长活性的成分。方法采用乙酸乙酯提取和硅胶柱层析法进行提取分离;利用1HNMR、13CNMR、13CNMR-APT、MS、IR、UV确定其化学结构,并且应用鸡胚绒毛尿囊膜模型进行活性筛选。于鸡胚发育的第7天,将加药后的明胶海绵载体加于鸡胚绒毛尿囊膜上,孵育2 d后,固定鸡胚绒毛尿囊膜,取出观察。结果从重楼中分离得到了4个甾体皂苷类成分,分别为重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅴ和纤细薯蓣皂苷。通过活性筛选发现重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、纤细薯蓣皂苷3组鸡胚尿囊膜的小血管数目均小于空白组,其中重楼皂苷I经统计分析P<0.05具有显著性差异。结论重楼皂苷Ⅰ具有抑制血管生长的活性。

龙葵抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的研究

目的:探讨龙葵对血管新生的影响。方法:应用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生模型进行研究,在鸡胚培养的第7天,分别给予高、中、低3个剂量(2·5,2·0,1·5mg·μL-1)的龙葵水提物。培养至第9天收集数据进行评估。结果:龙葵给药组血管新生面积明显小于对照组(P<0·001)。病理形态学分析表明,给药组载体下CAM新生组织中新生血管数显著减少,并可见大血管结构破坏迹象。周围CAM组织中仅见少量新生血管。而对照组的载体下组织及周围CAM中均见大量新生血管。结论:龙葵可明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管新生。

水蛭、斑蝥对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的影响

目的研究中药水蛭、斑蝥对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的影响。方法将12只Wistar大鼠随机分为水蛭组(高低剂量组)、斑蝥组(高低剂量组)、血清组和空白组,中药水蛭、斑蝥各制成水煎液,灌胃7d,采血清备用。建立6d鸡胚绒毛尿囊膜血管模型,观察各组血清对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的影响。结果水蛭高剂量组有明显地抑制新生血管数量的作用,与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05);斑蝥高、低剂量组与空白组比较,亦能较强地抑制新生血管数(P<0.05);水蛭、斑蝥高低剂量组有抑制血管生成面积的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论虫类中药水蛭、斑蝥对CAM血管生成有一定的抑制作用。

芥子碱对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的:探讨芥子碱对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)新生血管生成的影响。方法:用溶剂萃取法制备芥子碱,通过CAM模型,检测芥子碱对CAM新生血管生成的影响。结果:与生理盐水对照组相比,中、大剂量芥子碱组(5.0、10.0g/L)CAM实验作用部位的血管生成明显受抑,周围血管网模糊,密度减少(P<0.01),抑制率分别达到54.24%和71.62%,而小剂量组(2.5g/L)差异不显著(P>0.05)。结论:芥子碱具有一定的抗血管生成活性,且其作用效果呈剂量依赖性。

蛇莓抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管新生作用研究

目的:研究蛇莓对血管新生的影响。方法:应用鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)血管新生模型,在鸡胚培养的第7天,分别给予大、中、小三个剂量的蛇莓水提物,培养至第9天收集数据进行评估。结果:蛇莓给药组血管新生面积明显小于对照组(P<0.001),载体下CAM新生组织中新生血管数显著减少,并可见大血管结构破坏迹象,载体周围CAM组织中仅见少量新生血管。而对照组的载体下组织及周围CAM中均见大量新生血管。结论:蛇莓可明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管新生。

当归补血汤超滤膜提取物对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响

目的观察当归补血汤超滤膜提取物对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生的影响,探讨其在治疗缺血性疾病中的作用机制。方法将不同浓度当归补血汤超滤膜提取物、表皮生长因子(EGF)和生理盐水(NS)分别通过载体加到孵化7d的CAM上,继续孵化3d,体视显微镜下观察CAM特异性血管生长情况及血管数目变化。结果当归补血汤超滤膜提取物(0.1g/L^0.3g/L)有明显的促进CAM血管新生作用,与生理盐水组比较有统计学意义(P<0.05),其作用与浓度呈正相关,其中以0.3g/L作用最显著,但与EGF组比较促CAM血管新生作用相对较弱(P<0.05)。结论当归补血汤超滤膜提取物能够明显促进CAM血管新生,且作用与剂量呈正相关,提示当归补血汤超滤膜提取物在治疗缺血性疾病方面可能与其促进血管新生有关。

复方红豆杉胶囊对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)法观察复方红豆杉胶囊对血管生成的影响。方法种蛋在孵育7d后制备CAM模型,复方红豆杉胶囊低、高剂量含药血清、生理盐水、硫酸鱼精蛋白、空白血清滴加于CAM表面载体上,作用48h后观察胚胎存活情况,显微镜下计数CAM载体周围的一、二级血管数目。结果复方红豆杉胶囊低、高剂量组均有抑制CAM血管生成作用,一、二级血管数目明显少于生理盐水和空白血清组(P<0.01)。结论复方红豆杉胶囊具有明显的抑制CAM血管生成的作用。

养心通脉有效部位方对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响

目的探讨养心通脉有效成分部位方(YTⅡ)对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响。方法制备养心通脉有效部位方组(YTⅡ组)、养心通脉方原方组(YTⅠ组)、麝香保心丸组(SBW组)、重组牛碱性成纤维细胞生长因子组(bFGF组)和无药血清组(KX组)各组的含药血清,另外设置空白组,共6组,每组25个鸡胚。复制鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型。从0h、24h、48h、72h和96h共5个时间点,观察YTⅡ及各组对CAM模型鸡胚存活情况、CAM标本形态和CAM新生血管数量的影响。结果分组加药后96h时,bFGF组和YTⅡ组存活率明显高于其它各组。加药72h后各药物组粗大血管及细小分支迅速增多,血管网络清晰,呈叶脉样,放射性生长,加药96h时更明显,尤以bFGF组和YTⅡ组血管生长最为旺盛。加药48h,72h和96h,各药物组与空白组、KX组比较,均具有显著性差异(P<0.05),各组血管新生数呈bFGF组>YTⅡ组>YTⅠ组>SBW组>KX组>空白组的趋势。结论YTⅡ与YTⅠ、SBW、bFGF同样具有促血管新生的作用,且YTⅡ作用与bFGF作用相当,明显优于YTⅠ和SBW。

珠母贝糖胺聚糖对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的探讨珠母贝糖胺聚糖的抗肿瘤作用机制。方法采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型观察珠母贝糖胺聚糖单用及与5-氟尿嘧啶(5-FU)合用对CAM血管生成的影响。结果珠母贝糖胺聚糖CPG、PGⅠ、PGⅡ在实验所选剂量(0·5、5、50、500mg·L-1)下,无明显的直接抑制CAM血管生成作用;但CPG、PGⅠ、PGⅡ在实验所选剂量(5、50mg·L-1)下与5-FU(2·5mg·L-1)合用时,均能增敏5-FU的抑制CAM血管生成作用(P<0·01),并呈一定的剂量效应关系,其中PGⅡ增敏效果较好。结论珠母贝糖胺聚糖通过抑制肿瘤血管生成而对5-FU的抗肿瘤作用起增敏效果。