鸡胚背根神经节培养法测定神经生长因子活性的条件优化

鸡胚背根神经节培养法是测定神经生长因子(NGF)和神经营养因子活性的重要方法。我们通过考察培养基、鸡血浆和鸡胚浸液的比例、背根神经节部位、培养时间等条件对NGF刺激神经节生长的影响,从而建立了一套检测NGF活性的优化条件。在含20％鸡血浆和15％鸡胚浸液的DMEM的培养基中,利用伊莎褐鸡胚腰部的背根神经节,在终浓度为30ng/ml 的蛇毒NGF的刺激下,培养36h可以得到理想的实验结果。该条件重复性好、分辨率高、简单实用。

鸡胚背根神经节培养法测定神经生长因子(NGF)活性的条件优化

目的 探索一套稳定可靠的鸡胚背根神经节测定 NGF活性的实验条件。 方法 通过观察培养基、鸡血浆和鸡胚浸液的比例、背根神经节部位、培养时间等条件对 NGF刺激神经节生长的影响 ,从而建立一套该培养法检测 NGF活性的优化条件。 结果 以 DMEM为母液 ,在含 2 0 %鸡血浆和 1 5 %鸡胚浸液的培养基中 ,利用伊莎褐鸡胚腰椎背根神经节 ,在终浓度为 3 0 ng/ ml的蛇毒 NGF的刺激下 ,培养 3 6h可以得到较好的实验结果。 结论 该条件简单实用、分辨率高。

鸡胚背根神经节的摘取方法及培养条件的改进优化

探讨摘取鸡胚DRG的有效方法,并对培养条件进行优化,为神经营养因子突起鉴定奠定基础。根据鸡胚DRG的生长状态和解剖特点,采用分部摘取法摘取鸡胚DRG,利用NGF对不同部位的DRG进行鉴定,同时通过不同血清浓度、不同培养基及不同观察时间鸡胚DRG神经突起的生长状态,对培养条件进行优化。结果显示分部摘取法摘取鸡胚DRG提高了实验的可操作性和可重复性;综荐骨部的鸡胚DRG为实验最佳取材部位;无血清RPMI-1640培养基为最适神经突起生长鉴定培养基。

鸡胚背根节神经细胞微团悬滴培养法的建立及应用

采用神经细胞微团悬滴培养法培养Hamburger35期鸡胚背根节 (dorsalrootganglion ,DRG)神经元 .结果 ,神经元于培养 2 4h后开始生长 ,5～ 8d神经突起联成网状 ,说明本法可行 .该法为今后进一步探讨神经营养因子对培养神经元存活、生长的影响奠定了基础 .

非悬滴开放式培养法在鸡胚背根节体外培养中的应用

本研究针对悬滴培养法在操作和应用上存在的问题和局限性，改用操作简便、适用范围广的非悬滴开放式培养法培养鸡胚背根节。将数个鸡胚背根节按一定间隔种植在内置生长基质盖玻片的35mm培养皿中，加人适量培养液，置于CO2。孵箱中进行培养。结果显示.从培养24h至60h各时期，培养皿中背根节生长状况均良好，神经突起明显增长，表明用非悬滴开放式培养法培养鸡胚背根节是可行且可靠的。

NGF,BDNF和NT-3在培养鸡胚背根节神经元的表达

目的 探讨NGF ,BDNF ,NT - 3在体外培养鸡胚背根节神经元中的表达变化。方法 采用NGF ,BDNF ,NT - 3的兔抗血清分别对培养前后的鸡胚背根节神经元以免疫组化ABC法染色。观察NGF、BDNF和NT - 3在培养前、后鸡胚背根节神经元的表达情况 ,计数并比较培养前、后三种因子免疫阳性神经元百分数。结果 未培养的神经元 ,NGF ,BDNF ,NT - 3的阳性神经元百分数分别是 :10 %± 3%,2 7%± 5 %,2 9%± 7%。培养 48小时后 ,NGF ,BDNF ,NT - 3的阳性神经元百分数分别是 :77%± 6 %,6 4%± 7%,2 4%± 7%。结论 培养后NGF ,BDNF的表达较未培养者增加 (P <0 0 1) ,而NT - 3者则有减少 (P <0 0 5 )。提示在体外培养的鸡胚背根节神经元NT - 3的表达有不同于NGF和BDNF的调节方式。

改良的悬滴培养法及其在鸡胚背根节体外培养中的应用

作者改良了Maximow双盖片悬滴培养方法。将种植有组织植块的生长基质盖片粘贴于普通培养瓶之顶壁，并在培养瓶内加入一定量Hanks平衡盐溶液。利用其中NaHCO3和H2O作用能够释放CO2以及水分蒸发可以调节相对湿度的原理，在培养瓶中建立了一个相当于CO2孵箱的气体环境。瓶塞密闭后入37℃恒温箱中培养。利用改良的悬滴培养法对鸡胚背根节进行了体外培养，所有背根节均生长良好，神经突起明显增长，证实了本方法的可行性与可靠性。

鸡胚背根神经节感觉神经元体外培养研究

本文对背根神经节感觉神经元的体外培养条件进行了研究。结果表明利用差速贴壁法可使神经元纯度达到95％以上;在血清和适宜的细胞外基质存在条件下，神经元分散良好。本研究还通过外源性脑源性神经营养因子对神经元纤维再生的作用进一步证实了该方法的可靠性。

鸡胚背根神经节感觉神经元体外培养的聚集作用

体外培养鸡胚背根神经节感觉神经元时观察到，分散的神经元细胞具有显著的重新聚集倾向，１０％血清或０．５％牛血清白蛋可以防止细胞的重新聚集。背根神经节感觉神经元聚集倾向的机制尚不清楚。

鸡胚脊神经节的分散细胞培养法

神经组织分散细胞培养法是Ｎａｋａｉ［１］于１９５６年首创。Ｎａｋａｉ利用酶学方法将神经组织分离成相互独立的单个细胞进行培养。神经细胞是高度分化的细胞，形态结构和生理机能极其复杂，因此培养神经细胞要求条件特殊且复杂。我们的研究对象是神经成长圆锥（ｇｒｏ...

鸡胚背根神经节神经元在体内培养的研究

目的建立一种易于观察、取材方便、价格低、实验周期短、经济实用的鸡胚背根神经节神经元(dorsal root gan-glions neuron,DRGn)体内培养的方法。方法摘取孵化13～15d间鸡胚的背根神经节,经胰蛋白酶消化分离等方法获得纯化的神经元,将其按一定浓度移植于载体的绒毛尿囊膜层后,继续培养。结果 DRGn在载体的绒毛尿囊膜层培养3～5d时,可观察到神经细胞仍存活;培养6～9d时,可观察到神经细胞的生长;培养11～13d时,可观察到神经网络形成。结论鸡胚背根神经节神经元能在鸡胚的绒毛尿囊膜层生长、分化及再聚集并发育成正常神经网络组织。

再改良的悬滴培养法及其在鸡胚背根节体外培养中的应用

作者应用再改良的悬滴培养方法，培养鸡胚背根节。将Hamburger35期鸡胚腰段背很节分别种植于涂有鼠尾胶原的48孔组织培养板孔中，每扎加入培养液100VI，翻转培养板，使背根节和培养液滴悬挂在培养孔内。再将培养板置入加有一定量Hanks平＠I盐溶液的玻璃缸中，密封缸周绿，将其放入37C恒温箱中培养。利用NaHCO。和H对的作用能释放CO。以及水份受热蒸发产生相对湿度，从而在缸内建立相当CO。孵箱的细胞生长环境。本方法是在本研究组改良悬滴培养法的基础上作了进一步改进，改进后的方法操作更为简便，更能节约大量人力、物力和时间，并且由于每批各实验组间所培养的背根节都生长在同一培养板的环境中，保证了实验的同步及培养条件的完全一致。我们应用本法进行了二十余次实验，共种植了1000余个背根节，对经凝胶过滤层析和高效液相色谱技术分离的备用背根描脊髓背角提取液各组份进行了生物学活性检测，确定了有活性的组份及其有效作用的最低剂量。结果表明本方法是体外培养鸡胚背报节的一种简便可靠、省时、省力的好方法。

体外培养鸡胚背根节神经细胞的形态学观察

为探讨鸡胚背根节（DRG）神经元的体外发育过程，分别取培养0、1、2、3、4、5、7、14、21天的神经元，计数相同面积内（2．5×105μm2）神经元的存活数，观察培养神经元的形态变化并与体内者比较。结果：各时相神经元的存活数分别是94±4、83±6、67±4、65±7、68±5、71±9、73±6、22±4、0个。神经元的形态在培养48小时内无显著变化，多为球形或椭圆形，但至3天后，不少神经元呈锥形或梭形，而体内者仍为圆球形或卵圆形。由此提示，离体后，仅部份神经元在一定时段内能够存活生长，且神经元的体外发育过程可能与其在体内的情况有所不同。

备用根大鼠脊髓后角组织提取液对培养的鸡胚背根节神经突起生长的影响

应用组织培养方法，观察备用根大鼠手术侧和非手术侧脊髓后角组织提取液对鸡胚背根节神经突起生长的影响。结果显示：备用根大鼠手术侧脊髓后角组织提取液作用的背根节神经突起生长密度（１５５．２５±１４．２５）明显高于非手术侧提取液作用的背根节神经突起生长密度（８９．１４±９．６０）。提示部份去传入纤维支配的脊髓后角组织可能存在着促进神经突起生长的神经营养活性物质。

藻酸双酯钠对大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑环境的影响及对鸡胚背根神经节的促生长作用

目的观察藻酸双酯钠(PSS)对大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑环境的影响及对培养的鸡胚背根神经节的促生长作用。方法采用大鼠大脑中动脉结扎模型研究PSS对局灶性脑缺血再灌注后脑环境的影响;采用鸡胚背根神经节体外培养模型研究PSS对培养的鸡胚背根神经节的促生长作用。结果在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型中,PSS可呈剂量依赖性阻止大脑皮质Ca2+释放,降低脑组织Na+,NO,丙二醛(MDA)浓度,抑制一氧化氮合酶(NOS),增强超氧化物歧化酶(SOD),Na+-K+- ATPase,Ca2+-ATPase活性,提高K+浓度;在鸡胚背根神经节体外培养模型中,PSS可呈剂量依赖性促进鸡胚背根神经节生长。结论 PSS能改善大鼠局灶性脑缺血再灌注后的损伤脑环境,促进鸡胚背根神经节生长,对局灶性脑缺血有保护作用。

鸡胚背根节神经细胞的分离

为获取背根节神经元，采用Hamburger35期来亨鸡胚，摘取其脊髓腰段背根节（DRG）制成细胞悬液，并制备DRG的HE染色石蜡切片。测量DRG切片上神经元和非神经元胞体最大径后，参照细胞大小结合形态学来区分背根节细胞悬液中的神经元和非种经元成份。用离心沉降法（1000转／分，5min）和自然沉降贴壁法（37℃，30min）分离细胞悬液中的神经元。结果显示：DRG切片上神经元与非神经元（主要是卫星细胞）的脑体最大径分别在6～22pm与1～4pm之间。按此大小测得DRG细胞悬液中神经元与非神经元（主要是卫星细胞）之比约为1：12左右；经离心沉降和自然沉降贴壁后两者比值可增至约1：1．6左右。其中神经元约80％保留，而非神经元丢失约90％。表明用此技术鸡胚DRG细胞悬液中的大部分神经元被分离出来了。

体外原代培养小鼠胚胎背根神经节细胞的神经化学特征

目的探讨胚胎背根神经节(DRG)感觉神经元作为体外研究神经多肽的细胞模型之有效性。方法采用免疫荧光及相差显微技术对30只胚胎小鼠背跟神经节细胞选择性神经多肽的分布、细胞大小及其多肽表达与细胞大小之间的关系进行观察比较。结果培养时间达3周龄的DRG细胞主要以中小直径(30～20μm)的细胞为主,与成年在体脊髓DRG细胞的形态多形性特征类似;选择性神经多肽(钙调素基因相关多肽、P物质、甘丙肽和nociceptin)的表达也随着体外培养时间的延长明显增强,且从早期仅在胞体部位表达到3周时细胞周围神经突起也出现显著免疫荧光阳性。此外,体外培养达到3周时,降钙素基因相关多肽和P物质主要在体积较小的神经细胞表达,与成年鼠DRG的分布特征一致。而甘丙肽与nociceptin在不同大小DRG神经元的表达没有像降钙素基因相关多肽和P物质一样随着培养时间的延长而出现明显改变。结论胚胎小鼠DRG神经细胞培养可以作为研究感觉神经细胞某些重要的神经多肽(降钙素基因相关多肽,P物质)在调节感觉神经细胞内相关信号转导通路中作用的体外模型。

备用根猫脊髓背角提取液对鸡胚背根节神经细胞存活的影响

本研究组既往的研究表明，备用根猫脊髓背角组织块和提取液促神经突起生长的活性明显增强。为观察去传入猫脊髓背角提取液对神经元存活的影响，我们采用单侧后肢备用根猫（切除一侧Ll－L。、L，－Sz背报节，保留L。背根为备用根）五只，分别取术后五天T12-S3节段脊髓背角组织，匀浆、离心获得上清液、制成条件培养液后，加入鸡胚背根节神经细胞是液培养。于48h时，以l％台盼蓝染色，计数神经细胞存活率。结果显示：手术侧组神经细胞存活率为0.85±0.04，而非手术侧组神经细胞存活率仅为0．55fo．10。两者相比有显著性差异（P＜0．of）。提示备用根猫脊髓背角提取液对培养中的鸡胚背报节神经元除有促进神经突起生长的作用外还有明显的促神经元存活作用。