脑必舒注射液对鸡胚背根节神经突起生长促进作用的实验观察

以进口脑活素注射液为阳性对照 ,观察了脑必舒注射液对鸡胚背根节神经突起的体外促生长作用。结果表明 :分别含 4 0 %脑必舒注射液与进口脑活素的培养液对鸡胚背根节神经突起的生长有相当的促进作用。在脑必舒与进口脑活素的作用下 ,神经突起的生长状况与阴性对照组相比有显著差异。

备用根大鼠脊髓后角组织提取液对培养的鸡胚背根节神经突起生长的影响

应用组织培养方法，观察备用根大鼠手术侧和非手术侧脊髓后角组织提取液对鸡胚背根节神经突起生长的影响。结果显示：备用根大鼠手术侧脊髓后角组织提取液作用的背根节神经突起生长密度（１５５．２５±１４．２５）明显高于非手术侧提取液作用的背根节神经突起生长密度（８９．１４±９．６０）。提示部份去传入纤维支配的脊髓后角组织可能存在着促进神经突起生长的神经营养活性物质。

激活素促进鸡胚神经节神经突起生长作用

为了探讨激活素（activin）促进鸡胚背根神经节（dorsal root ganglia，DRG）突起生长、维持神经节细胞生存作用及其与一氧化氮（NO）释放的关系，实验采用8d的鸡胚分离背根神经节，原代培养法，观察鸡胚背根神经节的体外生长情况。研究结果表明，添加激活素A培养的背根神经节有明显的神经突起生长，形成密集的网络，背根神经节可存活8～10d；而阴性对照组几乎无神经突起生长，背根神经节可存活3～4d。添加激活素A的背根神经节单层培养神经节细胞也可长期存活；而阴性对照组在培养第5d几乎无神经节细胞生存。NO检测结果显示，添加激活素A培养的背根神经节上清NO分泌水平明显降低，与阴性对照组比较差异显著（P〈0．05）；激活素A与神经生长因子（nerve growth factor，NGF）具有协同抑制背根神经节NO分泌作用。激活素结合蛋白（follistatin）明显抑制激活素A诱导的背根神经节神经突起生长。研究结果提示，激活素可维持鸡胚神经节细胞存活并刺激神经突起生长，其作用与抑制神经损伤因子NO的释放有关。

激活素结合蛋白阻断激活素诱导鸡胚神经节神经突起生长作用及其机制研究

目的探讨激活素结合蛋白(follistatin,FS)与激活素(activin)调控鸡背根神经节(dorsal root ganglia,DRG)神经突起生长的作用机制。方法实验采用8d的鸡胚分离背根神经节,观察原代培养鸡胚背根神经节的体外生长情况。结果激活素A促进培养鸡背根神经节神经突起生长,形成密集的网络;激活素结合蛋白与激活素A同时添加培养,呈现剂量依赖性阻断激活素促背根神经节神经突起生长。添加激活素结合蛋白培养的背根神经节上清NO分泌水平明显高于单纯激活素A培养组,统计学比较差异显著(P<0.05);添加激活素结合蛋白培养的背根神经节激活素IIA型受体(ActRIIA)表达水平明显低于单纯激活素A培养组。结论激活素结合蛋白可以阻断激活素A刺激的鸡胚神经节神经突起生长,其作用与阻断激活素A诱导ActRIIA表达、中和激活素A抑制神经损伤因子NO释放作用有关。

藻酸双酯钠对大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑环境的影响及对鸡胚背根神经节的促生长作用

目的观察藻酸双酯钠(PSS)对大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑环境的影响及对培养的鸡胚背根神经节的促生长作用。方法采用大鼠大脑中动脉结扎模型研究PSS对局灶性脑缺血再灌注后脑环境的影响;采用鸡胚背根神经节体外培养模型研究PSS对培养的鸡胚背根神经节的促生长作用。结果在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型中,PSS可呈剂量依赖性阻止大脑皮质Ca2+释放,降低脑组织Na+,NO,丙二醛(MDA)浓度,抑制一氧化氮合酶(NOS),增强超氧化物歧化酶(SOD),Na+-K+- ATPase,Ca2+-ATPase活性,提高K+浓度;在鸡胚背根神经节体外培养模型中,PSS可呈剂量依赖性促进鸡胚背根神经节生长。结论 PSS能改善大鼠局灶性脑缺血再灌注后的损伤脑环境,促进鸡胚背根神经节生长,对局灶性脑缺血有保护作用。

鸡胚背根神经节培养法测定神经生长因子活性的条件优化

鸡胚背根神经节培养法是测定神经生长因子(NGF)和神经营养因子活性的重要方法。我们通过考察培养基、鸡血浆和鸡胚浸液的比例、背根神经节部位、培养时间等条件对NGF刺激神经节生长的影响,从而建立了一套检测NGF活性的优化条件。在含20％鸡血浆和15％鸡胚浸液的DMEM的培养基中,利用伊莎褐鸡胚腰部的背根神经节,在终浓度为30ng/ml 的蛇毒NGF的刺激下,培养36h可以得到理想的实验结果。该条件重复性好、分辨率高、简单实用。

低浓度神经生长因子存在下GPI-1046刺激鸡胚神经节突起生长(英文)

对GPI-1046是否具有神经营养作用目前有两种不同的认识。Steiner等认为GPI-1046能促进体外培养的感觉神经节神经元突起生长。但Harper等却没能证明GPI-1046有这样的作用。由于GPI-1046在临床上具有重要应用价值和前景,我们重新评价了GPI-1046对体外培养鸡胚神经节的神经营养作用,发现在低浓度神经生长因子(nerve growth factor,NGF)存在下,GPI-1046能明显促进鸡背根神经节神经突起的生长。

鸡胚背根神经节培养法测定神经生长因子(NGF)活性的条件优化

目的 探索一套稳定可靠的鸡胚背根神经节测定 NGF活性的实验条件。 方法 通过观察培养基、鸡血浆和鸡胚浸液的比例、背根神经节部位、培养时间等条件对 NGF刺激神经节生长的影响 ,从而建立一套该培养法检测 NGF活性的优化条件。 结果 以 DMEM为母液 ,在含 2 0 %鸡血浆和 1 5 %鸡胚浸液的培养基中 ,利用伊莎褐鸡胚腰椎背根神经节 ,在终浓度为 3 0 ng/ ml的蛇毒 NGF的刺激下 ,培养 3 6h可以得到较好的实验结果。 结论 该条件简单实用、分辨率高。

NGF,BDNF和NT-3在培养鸡胚背根节神经元的表达

目的 探讨NGF ,BDNF ,NT - 3在体外培养鸡胚背根节神经元中的表达变化。方法 采用NGF ,BDNF ,NT - 3的兔抗血清分别对培养前后的鸡胚背根节神经元以免疫组化ABC法染色。观察NGF、BDNF和NT - 3在培养前、后鸡胚背根节神经元的表达情况 ,计数并比较培养前、后三种因子免疫阳性神经元百分数。结果 未培养的神经元 ,NGF ,BDNF ,NT - 3的阳性神经元百分数分别是 :10 %± 3%,2 7%± 5 %,2 9%± 7%。培养 48小时后 ,NGF ,BDNF ,NT - 3的阳性神经元百分数分别是 :77%± 6 %,6 4%± 7%,2 4%± 7%。结论 培养后NGF ,BDNF的表达较未培养者增加 (P <0 0 1) ,而NT - 3者则有减少 (P <0 0 5 )。提示在体外培养的鸡胚背根节神经元NT - 3的表达有不同于NGF和BDNF的调节方式。

鸡胚背根神经节的摘取方法及培养条件的改进优化

探讨摘取鸡胚DRG的有效方法,并对培养条件进行优化,为神经营养因子突起鉴定奠定基础。根据鸡胚DRG的生长状态和解剖特点,采用分部摘取法摘取鸡胚DRG,利用NGF对不同部位的DRG进行鉴定,同时通过不同血清浓度、不同培养基及不同观察时间鸡胚DRG神经突起的生长状态,对培养条件进行优化。结果显示分部摘取法摘取鸡胚DRG提高了实验的可操作性和可重复性;综荐骨部的鸡胚DRG为实验最佳取材部位;无血清RPMI-1640培养基为最适神经突起生长鉴定培养基。

鸡胚背根节神经细胞的分离

为获取背根节神经元，采用Hamburger35期来亨鸡胚，摘取其脊髓腰段背根节（DRG）制成细胞悬液，并制备DRG的HE染色石蜡切片。测量DRG切片上神经元和非神经元胞体最大径后，参照细胞大小结合形态学来区分背根节细胞悬液中的神经元和非种经元成份。用离心沉降法（1000转／分，5min）和自然沉降贴壁法（37℃，30min）分离细胞悬液中的神经元。结果显示：DRG切片上神经元与非神经元（主要是卫星细胞）的脑体最大径分别在6～22pm与1～4pm之间。按此大小测得DRG细胞悬液中神经元与非神经元（主要是卫星细胞）之比约为1：12左右；经离心沉降和自然沉降贴壁后两者比值可增至约1：1．6左右。其中神经元约80％保留，而非神经元丢失约90％。表明用此技术鸡胚DRG细胞悬液中的大部分神经元被分离出来了。

鸡胚背根神经节感觉神经元体外培养研究

本文对背根神经节感觉神经元的体外培养条件进行了研究。结果表明利用差速贴壁法可使神经元纯度达到95％以上;在血清和适宜的细胞外基质存在条件下，神经元分散良好。本研究还通过外源性脑源性神经营养因子对神经元纤维再生的作用进一步证实了该方法的可靠性。

鸡胚背根神经节感觉神经元体外培养的聚集作用

体外培养鸡胚背根神经节感觉神经元时观察到，分散的神经元细胞具有显著的重新聚集倾向，１０％血清或０．５％牛血清白蛋可以防止细胞的重新聚集。背根神经节感觉神经元聚集倾向的机制尚不清楚。

鸡胚背根神经节神经元在体内培养的研究

目的建立一种易于观察、取材方便、价格低、实验周期短、经济实用的鸡胚背根神经节神经元(dorsal root gan-glions neuron,DRGn)体内培养的方法。方法摘取孵化13～15d间鸡胚的背根神经节,经胰蛋白酶消化分离等方法获得纯化的神经元,将其按一定浓度移植于载体的绒毛尿囊膜层后,继续培养。结果 DRGn在载体的绒毛尿囊膜层培养3～5d时,可观察到神经细胞仍存活;培养6～9d时,可观察到神经细胞的生长;培养11～13d时,可观察到神经网络形成。结论鸡胚背根神经节神经元能在鸡胚的绒毛尿囊膜层生长、分化及再聚集并发育成正常神经网络组织。

鸡胚背根节神经细胞微团悬滴培养法的建立及应用

采用神经细胞微团悬滴培养法培养Hamburger35期鸡胚背根节 (dorsalrootganglion ,DRG)神经元 .结果 ,神经元于培养 2 4h后开始生长 ,5～ 8d神经突起联成网状 ,说明本法可行 .该法为今后进一步探讨神经营养因子对培养神经元存活、生长的影响奠定了基础 .

备用根猫脊髓背角提取液对鸡胚背根节神经细胞存活的影响

本研究组既往的研究表明，备用根猫脊髓背角组织块和提取液促神经突起生长的活性明显增强。为观察去传入猫脊髓背角提取液对神经元存活的影响，我们采用单侧后肢备用根猫（切除一侧Ll－L。、L，－Sz背报节，保留L。背根为备用根）五只，分别取术后五天T12-S3节段脊髓背角组织，匀浆、离心获得上清液、制成条件培养液后，加入鸡胚背根节神经细胞是液培养。于48h时，以l％台盼蓝染色，计数神经细胞存活率。结果显示：手术侧组神经细胞存活率为0.85±0.04，而非手术侧组神经细胞存活率仅为0．55fo．10。两者相比有显著性差异（P＜0．of）。提示备用根猫脊髓背角提取液对培养中的鸡胚背报节神经元除有促进神经突起生长的作用外还有明显的促神经元存活作用。

体外培养鸡胚背根节神经细胞的形态学观察

为探讨鸡胚背根节（DRG）神经元的体外发育过程，分别取培养0、1、2、3、4、5、7、14、21天的神经元，计数相同面积内（2．5×105μm2）神经元的存活数，观察培养神经元的形态变化并与体内者比较。结果：各时相神经元的存活数分别是94±4、83±6、67±4、65±7、68±5、71±9、73±6、22±4、0个。神经元的形态在培养48小时内无显著变化，多为球形或椭圆形，但至3天后，不少神经元呈锥形或梭形，而体内者仍为圆球形或卵圆形。由此提示，离体后，仅部份神经元在一定时段内能够存活生长，且神经元的体外发育过程可能与其在体内的情况有所不同。