鸡胚脊髓背角神经营养物质的HPLC纯化分析

目的 纯化鸡胚脊髓背角内的神经营养物质。方法 采用 Sephadex G- 2 0 0凝胶过滤层析法分离鸡胚脊髓背角内的神经营养物质 ,以鸡胚背根神经节细胞培养结合 MTT法检测各洗脱峰液的神经营养活性。所得活性组分用高效液相色谱技术 (HPL C)进一步分离 ,同前用 MTT法检测各洗脱峰液的神经营养活性。结果 经层析获得三个洗脱峰 ,其中第 2洗脱峰液促进培养神经细胞生长的活性最强 (P<0 .0 1) ,提示 2峰洗脱液含有神经营养物质。 HPL C后获得 7个洗脱峰。经 MTT法测定各峰洗脱液对鸡胚 DRG神经细胞的生长活性发现 F峰有明显的神经营养活性 (P<0 .0 5 )。结论 通过分离纯化获得了有较强活性的神经营养物质。

NGF、BDNF和NT-3在鸡胚脊髓发育中的表达变化

目的探讨神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)和神经营养因子3(NT-3)在鸡胚脊髓发育中的表达变化。方法对发育第7d(E7)和第14d(E7)鸡胚腰段脊髓用NGF、BDNF和NT-3抗体进行免疫组化和Western blot检测。观察NGF、BDNF、NT-3在脊髓两时相的分布和含量变化。结果脊髓发育第7d,NGF仅在腹侧白质表达,BDNF阳性细胞主要分布于脊髓腰段腹角神经元的核周质及神经突起内,而NT-3阳性细胞则分布于腹角前外侧群神经元;脊髓发育至第14d,不但白质NGF表达进一步增强,脊髓灰质内亦出现少量NGF阳性细胞,尤其是背角细胞可见强的NGF表达;BDNF除腹角染色外,也扩展至整个背角神经元及神经突起,并出现一些BDNF阳性胶质细胞;NT-3除分布于腹角前外侧群神经元外,中间带、背角内亦出现了一些NT-3阳性神经元。Western blot进一步证明上述3种因子的表达量均随发育进程增强,尤以BDNF为甚,其E14的表达量约为E7的2.7倍。结论NGF、BDNF和NT-3在脊髓的表达随发育进程由腹角向背角扩展,且表达量逐渐升高。提示,NGF、BDNF和NT-3可能与促进脊髓的发育有关。

神经生长导向因子Slit在鸡胚脊髓中的表达

目的:探讨神经生长导向因子Slit在鸡胚脊髓中的表达模式对发育和再生神经轴突的导向作用。方法:制备地高辛标记的RNA探针,应用原位杂交技术检测Slit基因mRNA在鸡胚不同发育期脊髓中的表达情况。结果:Slit基因mRNA的表达在中线结构区呈现优势。结论:神经生长导向因子Slit在鸡胚脊髓发育期轴突投射和神经通路形成中起重要作用。

鸡胚发育过程中音猬因子超表达对Pax家族基因表达的影响

目的 探讨鸡胚发育过程中,音猬因子（Shh）基因在脊髓中超表达后对配对框（Pax）基因家族Pax3、Pax6以及Pax7蛋白表达的影响。方法 在鸡胚龄2.5-3.0d（E2.5-E3）时,实验组利用鸡胚脊髓活体电转基因技术将携带Shh基因的质粒和携带有绿色荧光蛋白（GFP）报告基因的质粒共转入鸡胚脊髓,对照组则只转入报告基因质粒。E4时取材,每组至少取3例,冷冻切片后采用原位杂交技术检测Shh基因的mRNA表达水平,利用荧光免疫技术检测Shh在鸡胚脊髓中超表达后对Pax3,Pax6以及Pax7蛋白表达水平的影响,并将对照组及实验组中3种基因在脊髓两侧的表达量进行统计学分析。结果 原位杂交结果表明,E4时Shh的mRNA主要表达在脊髓底板和脊索,实验组结果显示,利用鸡胚脊髓活体电转技术成功建立了Shh超表达模型。对照组中荧光免疫结果表明,Pax3主要表达于脊髓翼板、生肌节、背根以及背根神经节;Pax6主要表达于跨越翼板和基板的脊髓中间部位;Pax7则主要均匀表达于翼板、顶板和生肌节。Shh超表达后,脊髓转染侧与未转染侧相比Pax3、Pax6以及Pax7的表达量差异极显著（P〈0.01）,这3种基因在脊髓中的表达均被抑制。结论 在鸡胚发育过程中,Pax家族Pax3、Pax6以及Pax7 3种基因在鸡胚脊髓中具有不同的表达模式,Shh超表达后对其均具有明显的抑制作用,显示这3种Pax基因受Shh信号通路调控。

体外培养神经—肌肉形成接头的研究

神经肌肉接头能在体外培养下形成。早在1907年,Harrison(1)就注意到培养的蛙胚胎肌组织上有膨大的结构,并有自发的肌肉收缩;Szepsenwol(1946,1947)(2,3)培养鸡胚的体节和脊髓成分,证明能形成神经肌肉接头;但工作是很初步的。近十多年来,胚胎脊髓与肌肉的联合培养方法,推进了体外培养下神经、肌肉以及接头的形态结构和生理功能的研究。