鸡球虫Eimeria tenella体外繁殖适应株的建立研究

本项目采用鸡球虫子孢子接种鸡胚、鸭胚和小鸭 ,试图培养出鸡体外繁殖适应株 ,建立起球虫体外培养模型。实验结果表明E .tenella接种 3批小鸭E .maxima接种 2批小鸭均未获成功。E .tenella接种 3批共 31只鸭胚 ,也未见子孢子发育至卵囊。而E .tenella能在鸡胚中发育至卵囊。但初代次接种时 ,接种过量胚容易死亡。接种量过低 ,卵囊收获量减少。因此采用了加大接种剂量和增加接种胚数的方法 ,促使球虫逐渐适应鸡胚。直线传代至第 8代 ,球虫已适应鸡胚 ,接种剂量由每胚 4万条子孢子降至 1万条 ,一直传至 2 4代 ,建立起一株E .

DHAV-3适应鸡胚毒株的培育及特性测定

旨在培育鸭甲型肝炎病毒血清3型(DHAV-3)适应鸡胚毒株并对其特性进行研究。利用鸭胚从临床病料中分离得到的DHAV-3 LC强毒株经卵黄囊接种鸡胚传代、纯化获得适应鸡胚毒株,并对毒株的致病性、毒力稳定性、免疫原性和基因组特征进行测定。结果显示,利用鸭胚接种成功从病料中分离鉴定DHAV-3 LC强毒株,对鸭胚和雏鸭的半数致死量分别为10-6.20/0.2 mL和10^(-4.25)/0.2 mL。经卵黄囊接种鸡胚69代,获得适应鸡胚毒株DHAV-3 CA。CA株的F4、F16、F21、F31、F41和F51代病毒液的ELD50分别为10^(-6.44)/0.3 mL,10^(-6.60)/0.3 mL,10^(-7.44)/0.3 mL,10^(-7.80)/0.3 mL,10-7.43/0.3 mL和10^(7.25)/0.3 mL;各代病毒对1日龄雏鸭不致病,但在体内连续传代出现接种雏鸭死亡。F21代病毒制备的油包水灭活疫苗免疫蛋鸡,血清中和抗体效价达1∶500以上;以2.5×10^(4.8)ELD50及以上剂量的F31代病毒经颈部皮下接种1日龄雏鸭,攻毒保护率均在90%以上。F21代病毒全基因组序列分析显示,与DHAV-3 LC相比,基因组内无碱基插入或缺失,但有32个位点发生碱基突变;VP0基因的C1410T和A1411G突变与病毒在鸡胚中的传代次数有相关性。本试验成功培育出适应鸡胚毒株DHAV-3 CA,具有良好的免疫原性,但存在致病性返祖现象。