鸡胸软骨硫酸软骨素的提取及分离纯化

为优化硫酸软骨素的提取工艺和初步分析其结构,采用中心组合设计和响应面分析优化鸡胸软骨硫酸软骨素的酶法提取工艺,三氯乙酸除蛋白质、乙醇沉淀以及柱色谱精细纯化得到高纯度硫酸软骨素,并采用高效凝胶过滤色谱判定其纯度,红外光谱和核磁共振初步分析其结构。结果表明,硫酸软骨素的最佳提取工艺参数为温度55.68℃,pH值为6.40,时间为3.85h,葡萄糖醛酸和硫酸软骨素提取率分别达到9.82%和28.05%。高效凝胶过滤色谱分析其纯度为99.01%。红外光谱和核磁共振显示硫酸软骨素主要是4硫酸化软骨素。

鸡胸软骨硫酸软骨素的制备及结构分析

首先分析了鸡胸软骨中主要营养成分,再用酶法提取生物活性多糖硫酸软骨素,并用三氯乙酸除蛋白、乙醇沉淀和柱色谱进行分离纯化得到高纯度产品。反相高效液相色谱和原子吸收光谱分析表明鸡胸软骨富含呈味氨基酸和钙、镁和锌等矿物元素。高效凝胶过滤色谱和琼脂糖凝胶电泳证明该纯化后的硫酸软骨素产品均一,纯度达到99%,其分子量为21007D。其红外光谱呈现4-硫酸软骨素的典型特征,没有发现6-硫酸软骨素存在。气相色谱分析发现其中中性单糖主要为葡萄糖、木糖和半乳糖,与猪喉软骨存在明显差异。

鸡胸软骨粉中Ⅱ型胶原的提取及结构分析

以鸡胸软骨为原料制备软骨粉,采用盐酸胍溶解去除非胶原成分后,添加胃蛋白酶酶解提取软骨粉Ⅱ型胶原。SDS-PAGE电泳和RP-HPLC色谱证实了所提取的软骨粉Ⅱ型胶原具有较高的纯度。氨基酸组成分析、紫外吸收光谱、FT-IR谱图、圆二色谱和差示扫描量热分析的测定结果表明软骨粉Ⅱ型胶原保持天然构象,结构没有受到破坏。

鸡胸软骨酶解产物的表征及对类风湿关节炎大鼠的免疫调节作用

目的:探讨鸡软骨酶解产物的理化性质及对类风湿性关节炎(RA)大鼠的免疫调节作用。方法:采用胃蛋白酶水解鸡胸软骨,研究软骨酶解产物的组成及理化性质,并建立大鼠类风湿性关节炎模型,探讨软骨酶解产物对大鼠类风湿性关节炎的免疫调节作用。结果:鸡胸软骨酶解产物的主要成分为Ⅱ型胶原,变性温度为43.843℃,在pH值大于5.8,NaCl浓度大于0.9mol/L时,溶解度较低。口服鸡胸软骨酶解产物显著抑制了RA大鼠的足掌肿胀,并降低了其血清抗Ⅱ型胶原(CII)抗体及滑膜炎性细胞因子的水平。结论:鸡胸软骨酶解产物可能通过调节Th1细胞因子的表达、纠正失衡的Th1/Th2细胞因子网络及降低血清特异性抗CII抗体的水平对RA产生防治作用。

鸡胸软骨多糖组分的分级及自由基清除活性研究

直接用木瓜蛋白酶水解鸡胸软骨,经三氯乙酸除蛋白质、乙醇沉淀、干燥得多糖粗品,采用DEAE-Sepharose FastFlow离子交换柱色谱和Sepharose 6B FastFlow分离纯化粗多糖,并进行光谱学分析和自由基清除活性研究。结果显示:乙醇沉淀多糖的自由基清除活性显著高于初步透析后的粗多糖,纯化后的硫酸软骨素的活性最小。粗多糖经DEAE-Sepharose FastFlow离子交换柱层析和Sepharose 6B FastFlow凝胶柱层析后,得到硫酸软骨素和其他5种非糖胺聚糖类多糖。5种多糖的自由基清除活性均显著大于硫酸软骨素。

鸡胸软骨中Ⅱ型胶原的制备工艺优化

对鸡胸软骨Ⅱ型胶原的制备工艺进行优化。采用盐酸胍和Na Cl 2种抽提方法去除杂蛋白,然后用胃蛋白酶酶解并考察酶解温度、酶解时间和酶添加量对胶原提取率的影响。结果表明:4 mol/L的盐酸胍能有效去除杂蛋白;当酶解温度18℃、胃蛋白酶添加量1.59%、酶解43 h时提取率最高,且此条件下的胶原提取率为56.54%,且保持着完整的二级结构。经过酶解后制备的Ⅱ型胶原电泳图谱出现α、β2条带,无其他杂带,Ⅱ型胶原纯度较高。

鸡胸软骨粉的制备工艺

采用胃蛋白酶处理软骨,去除表面的碎肉和软骨膜,确定最佳酶解条件是:酶浓度为400 mg/L,28℃。反应24 h.料液质量比为1:5。采用V(三氯甲烷):V(甲醇)=2:1对软骨进行脱脂处理9 h后。脂肪残留率为0.05%。采用冷冻干燥法干燥软骨可除去97%以上的水。在液氮低温条件下粉碎软骨,得到平均粒径为73.37μm的软骨粉。经测定,软骨粉中含有丰富的Ⅱ型胶原,并保留了Ⅱ型胶原的生物活性。

超滤法分离提取鸡胸软骨中硫酸软骨素和Ⅱ型胶原蛋白

研究了超滤法分离提取鸡胸软骨中硫酸软骨素和Ⅱ型胶原蛋白的工艺。确定超滤工艺为:鸡胸软骨水解液用截留分子量为10 kDa的超滤膜,在0.3 MPa、10℃截留得到硫酸软骨素,收率达97.1%;超滤透过液用截留分子量为3kDa的超滤膜,在0.6 MPa、10℃脱盐浓缩,得到Ⅱ型胶原蛋白,收率达95.1%。

鸡胸软骨Ⅱ型胶原对大鼠类风湿性关节炎的作用

目的:获得高纯度的Ⅱ型胶原,并考察其对类风湿性关节炎的作用;方法:以鸡胸软骨为原料制备Ⅱ型胶原,在酸性条件下添加胃蛋白酶酶解鸡胸软骨Ⅱ型胶原三股螺旋链的端肽,采用DEAE-Sepharose CL 6B离子交换柱纯化酶解样品制得Ⅱ型胶原;通过SDS-PAGE电泳、氨基酸分析及X-射线衍射表征Ⅱ型胶原的纯度与结构;建立大鼠类风湿性关节炎模型(CIA),研究不同浓度的Ⅱ型胶原对大鼠类风湿性关节炎的影响;结果:经过纯化的Ⅱ型胶原纯度为95.21%,呈典型的三股螺旋结构;口服Ⅱ型胶原能明显降低CIA大鼠的关节炎指数,缓解关节红肿等症状;同时,实验组大鼠的T淋巴细胞增殖及白细胞介素-2(IL-2)的分泌受到抑制,白细胞介素-1(IL-1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平也显著低于阴性对照组。结论:Ⅱ型胶原能作为膳食补充剂防治人类类风湿性关节炎。

以鸡胸软骨为原料提取硫酸软骨素的研究

以鸡胸软骨为原料,在60℃下用木瓜蛋白酶水解除去蛋白质,再用乙醇沉淀获得鸡胸软骨多糖。色谱分析和聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴别显示,鸡胸软骨多糖主要是硫酸软骨素,表明鸡胸软骨是可行的硫酸软骨素新来源。

温度和pH值对鸡胸软骨Ⅱ型胶原蛋白的结构、黏度和热稳定性的影响

考察pH值和温度对鸡胸软骨Ⅱ型胶原蛋白稳定性的影响,用圆二色光谱仪和哈克旋转流变仪测定分析胶原蛋白的三螺旋结构和黏度,并通过二者的变化探究其热稳定性。结果表明:pH 2.0~4.0之间三螺旋结构完整;pH 5.0~9.0范围内三螺旋结构部分解旋(28%~57%);pH 10.0时解旋程度小(约7%)。黏度在pH 2.0~5.0之间先增大后减小,pH 5.0~9.0之间保持不变,pH 10.0时又增大。pH 2.0~4.0时,变性温度在37~39℃之间,热稳定性较低;pH 5.0~7.0时,变性温度在40~43℃之间,热稳定性高。黏度和结构随温度变化具有负相关性(P<0.05),温度越高,黏度越小,三螺旋结构解旋程度越大;与pH值变化也具有相关性(P<0.01),pH 3.0~9.0范围内,pH值升高,分子上的静电作用力减小,黏度减小,三螺旋结构解旋程度增大。因此,为了保持Ⅱ型胶原蛋白完整的三螺旋结构以及良好的加工特性,需要严格控制加工过程中的pH值和温度。

鸡胸软骨胶原的提取及其结构表征

[目的]提取鸡胸软骨中的胶原,并对其进行检测。[方法]以鸡胸软骨为原料,采用酶法提取其中的胶原,并进行紫外光谱检测、傅里叶变换红外光谱检测、SDS-PAGE、氨基酸分析、圆二色谱检测及肽指纹图谱检测。[结果]胶原的提取率是0.11%(以湿重计),紫外最大吸收波长为217 nm;SDS-PAGE显示,胶原含有一条较粗的α带和一条较细的β带;氨基酸分析显示,羟脯氨酸为99残基/1 000氨基酸残基。[结论]该方法提取得到的胶原是典型的Ⅱ型胶原,且很好地保持了其天然结构,具有较高的纯度。

鸡胸软骨Ⅱ型胶原蛋白肽的提取及氨基酸组成分析

以鸡胸软骨为原料,建立一种通过木瓜蛋白酶酶解技术得到Ⅱ型胶原蛋白肽的方法.利用氨基酸组成分分析和水解度测定等方法对酶解液进行分析.结果表明:提取Ⅱ型胶原蛋白肽的最优酶解条件为料液比1:4(m/V)、酶用量0.5%、pH6.4、酶解温度50℃、酶解时间5h;通过氨基酸组成分分析,进一步说明所得酶解产物为Ⅱ型胶原蛋白多肽.提示利用木瓜蛋白酶进行酶解,不仅具有操作简单、节能高效等优点,而且所得产物水溶性高,具有较高的营养价值,在食品、医药及生物材料等领域具有较好的应用前景.

酸酶两步法提取鸡胸软骨胶原蛋白的研究

以鸡胸软骨为原料,首先采用柠檬酸提取鸡胸软骨中蛋白,然后以醋酸为提取介质,用胃蛋白酶对酸提残渣中蛋白质进行进一步提取。通过单因素试验和响应面分析法对其提取工艺进行了优化,结果表明采用酸酶两步法提取鸡胸软骨胶原蛋白的最佳工艺参数为:在温度为36.7℃时,按底物质量浓度10 g/100 mL添加0.3 mol/L柠檬酸提取6.08 h,然后用胃蛋白酶提取残渣中蛋白,以0.5 mol/L醋酸为提取介质,在温度为35℃时,添加1.38%胃蛋白酶提取1.83 h。在此条件下,通过酸酶两步法提取后粗蛋白总含量可达272.82 mg/L。

加工所实现骨健康食品原料的绿色联产制备

近日,中国农业科学院农产品加工研究所从鸡胸软骨中,高效提取分离硫酸软骨素和寡肽,生产过程极大降低了环境污染,实现了骨多糖与肽的绿色高效联产,应用前景广泛。该研究有望降低健骨产品的生产成本,为骨病患者带来福音。

非变性Ⅱ型胶原蛋白提取工艺优化及质量验证

以新鲜鸡胸软骨作为原材料,清洗灭菌后进行破碎处理,经中性盐及碱共作用的方法进行预处理后,使用酸法及酶法相结合的提取方法添加胃蛋白酶提取非变性Ⅱ型胶原蛋白。使用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定不同盐析pH值及浓度条件,和盐碱处理后材料酶解过程不同时间段光条带密度变化以确定最适条件。最后对不同盐析pH值、最佳盐析浓度条件下所获得胶原进行傅里叶红外吸收图谱,圆二色谱,紫外光谱,羟脯氨酸含量,等电点,熔融温度(T_(m)),热分解温度(T_(d)),十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳,氨基酸含量,扫描电子显微镜及原子力显微镜对比分析。结果表明在pH13的混合清洗液,酶解48 h及酸性条件0.75 mol/L盐析浓度条件下所获得的Ⅱ型胶原冻干产品天然纤维结构完整,产率高达68.9%,羟脯氨酸含量可达11.04%。