光谱法研究鸡蛋溶菌酶热变性与免疫原性的关系

利用圆二色性光谱和荧光光谱对鸡蛋溶菌酶的热变性过程进行了系统的光谱学研究,得到了鸡蛋溶菌酶热变性过程的光谱学特征;通过酶联免疫吸附实验测定鸡蛋溶菌酶热变性过程的免疫原性变化;结合生物信息学方法,分析了热变性过程中鸡蛋溶菌酶蛋白结构改变与其免疫原性变化之间的关系,建立研究食品过敏原蛋白热变性的光谱学方法。

鸡蛋溶菌酶在婴幼儿配方奶粉中的应用

利用鸡蛋溶菌酶对枯草杆菌、耐辐射微球菌、大肠杆菌、普通变球菌和副溶血性弧菌等革兰氏阴性菌的溶解特性,将鸡蛋溶菌酶添加到婴幼儿配方奶粉中,研究了富含鸡蛋溶菌酶的婴幼儿配方奶粉的抑菌效果,确定了最佳的添加工艺。结果表明,婴幼儿配方奶粉在喷雾干燥之后添加10～50 mg/100mL的鸡蛋溶菌酶效果最好(P<0.05)。

鸡蛋清溶菌酶对头孢他啶诱导铜绿假单孢菌内毒素释放的抑制作用

目的 研究鸡蛋清溶菌酶 (lysozyme,LZM)对头孢他啶 (ceftazidime ,CFT)诱导的铜绿假单孢菌内毒素释放的影响。方法 在肉汤或稀释血液培养的铜绿假单孢菌液中加入LZM、CFT或LZM CFT ,作用一定时间后 ,测定培养上清液中的内毒素浓度 ;将细菌培养上清液加入到巨噬细胞RAW 2 6 4 7中或注射入小鼠体内 ,测定其炎性因子 (NO和TNF α)诱生能力。结果 在肉汤培养和血液培养中 ,CFT引起铜绿假单孢菌迅速溶解和释放大量内毒素到培养上清液中 ,其上清液在体外培养的巨噬细胞上和小鼠体内可诱导大量NO和TNF α产生。而LZM与CFT联合使用能阻止细菌溶解 ,降低细菌内毒素释放 ,减少炎性因子NO和TNF α的产生。结论 LZM与CFT联合使用能抑制内毒素大量释放 。

鸡蛋清溶菌酶对头孢他啶诱导的绿脓杆菌溶解和致炎活性物质释放的抑制作用

目的 :观察鸡蛋清溶菌酶 (L ZM)与头孢他啶 (CFT)联合应用对绿脓杆菌生长、形态及其致炎活性物质释放的影响。方法 :在肉汤或稀释血液培养的绿脓杆菌液中加入 L ZM或 CFT作用 ,采用营养琼脂平板接种 ,计数各培养管中存活细菌数。将细菌悬液离心 ,将培养上清液加到培养的巨噬细胞中 ,测定其对巨噬细胞肿瘤坏死因子α(TNFα)的诱生能力 ,同时用光学显微镜观察各培养管中细菌的形态。结果 :对 CFT敏感的绿脓杆菌在 CFT2 5和 5 0 m g/ L 作用下 ,可使细菌迅速溶解 ,同时伴大量致炎活性物质 (主要包括内毒素 )释放 ,其培养上清液在体外培养的巨噬细胞上可诱导大量的 TNFα产生 ;L ZM与 CFT联合使用能阻止细菌溶解 ,但仍保持与 CFT单独用药相当的杀菌作用 ,死亡的细菌相互粘连 ,形成聚集体 ,并可降低对巨噬细胞的激活 ,减少TNFα等炎性因子的产生。对 CFT耐药的绿脓杆菌在 CFT的作用下 ,虽然细菌溶解不明显 ,但致炎活性物质的释放也增高 ;L ZM与 CFT联合用药也可降低致炎活性物质的释放。在采用血液培养系统进行的实验中 ,也得到类似结果。结论 :L ZM与 CFT联合使用能阻止细菌溶解 ,降低细菌致炎活性物质 (主要包括内毒素 )的释放 ,从而可能减轻内毒素血症。

电喷雾离子化飞行时间质谱研究鸡蛋清溶菌酶与β—环糊精的新型复合物

运用电喷雾离子化飞行时间质谱分析鸡蛋清溶菌酶与β-环糊精的复合物.通过减少β-环糊精的配制浓度至原来的1/5,发现形成1∶2和1∶3复合比的溶菌酶-β-环糊精复合物的离子丰度减弱,但化学计量比为1:1的复合物变化不大,证明该新型复合物为非特异性非共价复合物.此外还对质谱参数、分析条件对复合物离子化的影响作了详尽的考察,得出在nozzle电压为200 V时复合物信号最强,在不影响生物分子高级结构的前提下添加少量的有机溶剂如甲醇、乙腈等能较明显地改善质谱信号.

鸡蛋清溶菌酶对头孢他啶诱导的痢疾杆菌溶解和致炎活性物质释放的抑制作用

目的 :研究鸡蛋清溶菌酶 (L ZM)与头孢他啶 (CFT)联合应用对痢疾杆菌的生长、形态及其致炎活性物质释放的影响。方法 :在营养肉汤或稀释血液培养的痢疾杆菌液中加入 L ZM或 CFT作用一定时间后 ,采用营养琼脂平板接种 ,计数各培养管中存活细菌数。将细菌悬液离心 ,收集培养上清液 ,将上清液加入到培养的巨噬细胞中 ,测定其对巨噬细胞炎性因子如肿瘤坏死因子 α(TNFα)、一氧化氮 (NO)的诱生能力 ;同时用光学显微镜观察各培养管中细菌的形态。结果 :营养肉汤培养中的痢疾杆菌在 CFT(16× MIC、32× MIC)作用下 ,可造成细菌迅速溶解 ,同时伴有大量致炎活性物质释放 ,其培养上清在体外培养的巨噬细胞上可诱导大量的TNFα、NO产生 ;L ZM与 CFT联合使用既能阻止细菌溶解 ,又能保持与 CFT单独用药相当的杀菌作用 ;镜下观察 ,死亡的细菌相互粘连 ,形成聚集体 ;联合用药后可降低巨噬细胞的激活 ,减少 TNFα、NO的产生。在血液培养系统中 ,CFT(16× MIC、32× MIC)对痢疾杆菌有较强的杀菌作用 ,但较在肉汤培养体系中弱 ;L ZM与 CFT联合用药较 CFT(16× MIC、32× MIC)单独用药有更强的杀菌作用 ,并能显著降低 NO的释放。结论 :L ZM与 CFT联合应用能阻止痢疾杆菌溶解 ,降低细菌致炎活性物质 (主要为内毒素 )

鸡蛋清溶菌酶与β-内酰胺类抗生素联合应用对大肠埃希氏菌生物特性的影响

考察在不同温度下鸡蛋清溶菌酶与 β-内酰胺类抗生素联合应用对大肠埃希氏菌的生长及内毒素释放的影响。在不同温度下培养的大肠埃希氏菌液中加入鸡蛋清溶菌酶和β-内酰胺类抗生素氨苄西林(ampicillin)或头孢噻肟 (cefotaxime) ,收集培养上清液 ,测定其内毒素浓度 ;将上清液加入到培养的巨噬细胞中 ,测定其对巨噬细胞炎性因子的诱生能力。结果 :在不同的培养温度下 ,氨苄西林或头孢噻肟 5 0 μg/ ml均可导致细菌溶解 ,并诱导 Escherichia coli O111:B4释放大量的内毒素到培养上清液中 ,这些培养上清液在体外培养的巨噬细胞上可诱导大量的肿瘤坏死因子 (TNFα)和白细胞介素 6 (IL- 6 )产生。而鸡蛋清溶菌酶与 β-内酰胺类抗生素联合使用能阻止细菌溶解 ,降低细菌内毒素的释放 ,并减少巨噬细胞 TNFα和 IL - 6的产生。结论 :鸡蛋清溶菌酶与β-内酰胺类抗生素联合使用能降低细菌内毒素的释放 。

溶菌酶与顺铂联合应用对肝癌SMMC-7721细胞的协同抑制效应

目的:探讨溶菌酶(lysozyme,Ly)和顺铂(cisplatin,Cis)对肝癌细胞SMMC-7721生长的协同抑制效应及其抑制机制,并分析Ly对正常肝细胞LO2的毒性作用。方法:分别用MTT比色法和RT-PCR观察Ly与Cis联合应用对SMMC-7721细胞生长的抑制作用以及对PCNA、bcl-2的mRNA表达水平的影响,同时测定Ly对LO2细胞生长的毒性作用。流式细胞仪观察Ly与Cis联合应用对SMMC-7721细胞诱导凋亡的作用。结果:Ly能有效地协同Cis抑制SMMC-7721细胞生长,抑制率最低36%,最高82%,呈时间、剂量依赖性关系,但在同样浓度下对LO2细胞几乎没有抑制作用。联合用药组的PCNA、bcl-2的mRNA的表达水平均比对照组明显降低。流式细胞仪分析显示,Ly协同Cis作用可诱导SMMC-7721细胞凋亡,最高凋亡率为32.5%。结论:溶菌酶(Ly)能有效地协同Cis抑制SMMC-7721细胞增生并促进其凋亡,其机制可能与Ly协同Cis降低PCNA和bcl-2的mRNA表达有关。

基因重组毕赤酵母产蛋清溶菌酶发酵工艺及表达条件的优化

以甲醇诱导型蛋清溶菌酶基因重组毕赤酵母(Pichia pastoris)NCY-2为研究菌株,选用麦芽汁为培养基,首先通过单因素试验,对培养基锥形瓶种类、原麦芽汁稀释度及外加氮源进行了优化,在此基础上,采用均匀设计试验,得到菌株NCY-2的最佳发酵工艺条件为发酵温度31℃、pH 5.5,转速220 r/min,接种量4%;蛋清溶菌酶最佳表达条件为诱导温度18℃、诱导pH 4.4、转速190 r/min、甲醇初始添加量为0.3%(之后每隔24 h分别添加体积分数1.0%、1.5%、2.0%,诱导72 h结束)。在此优化条件下,摇床水平发酵液中蛋清溶菌酶酶活力可达到962.4 U/m L。

利用光谱技术定量研究蛋清溶菌酶结构与功能关系

通过对蛋清溶菌酶(hen egg white lysozyme,HEWL)热处理过程中圆二色谱(CD)和紫外差谱(UV diff.)信号测定,利用蛋白质去折叠二态转变模型,对CD和UV diff.信号进行最小二乘法非线性拟合,定量获取蛋白质稳定性热力学数据.实验结果表明:随pH下降,蛋白质构象稳定性降低.功能性质分析发现:随pH下降,HEWL的酶活性降低,但表面活性(乳化性和乳化稳定性)升高.进一步,将蛋白质构象稳定性(ΔG_(25℃,water))数据和酶活性、乳化性和乳化稳定性数据进行相关性分析发现:蛋白构象稳定性与酶活性、乳化活性和乳化稳定性呈较好的相关性.这些结果说明:蛋白质构象稳定性降低引起蛋白质柔性增加,使其铺展到油水两相界面能力提高.该研究为从分子水平定量研究食品蛋白结构和功能关系奠定了基础.

溶菌酶及其在畜牧生产上的应用

近年来,随着畜牧产业的高度集约化生产,畜禽疾病的发生也日趋上升,由于疾病造成的死淘率逐年增加,给畜牧业造成重大的经济损失。目前,国内外在对畜禽的防治型添加剂仍以抗生素为主,抗生素添加剂虽有疗效,但由于大剂量的长期使用,不仅效果下降,同时存在多种不利因素。

Preliminary Study on the Separation of Lysozyme,Ovotransferrin and Ovalbumin from Egg White

[Objective] A study on separation process of lysozyme, ovotransferrin and ovalbumin from egg white. [Method] The proteins were separated by ammonium sul-fates and ion-exchange chromatography. Purity of the proteins was assayed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis （SDS-PAGE）. [Result] The results showed that the proteins were electrophoresis-pure. The specific activity of lysozyme was increased from 144.13 to 2 235 U/mg, and purification factor was 15-fold. Lysozyme recovery rate was estimated to be 15.76%. Bacteriostasis rate of ovotransferrin was 48.84%. [Conclusion] The procedure for separating lysozyme, ovotransferrin and ovalbumin from egg white was simple, fast, low-cost and suitable for industrilization.

技术园地

溶菌酶(Lysozyme)又称胞壁质酶(muramidase)或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶(N-acetyl-muramyl glycanhydrolase)。广泛存在于哺乳动物乳汁、体液、禽类的蛋白及部分植物、微生物体内。具有杀菌、抗病毒、抗肿瘤细胞的作用,因此在食品工业、医疗、生物学领域有着广泛的应用,如应用在食品的防腐保鲜、微生物发酵。