特异抗内毒素鸡蛋黄免疫球蛋白效价测定及理化性质研究

目的 研究特异性抗内毒素鸡蛋黄免疫球蛋白理化性质 ,探索一种防治肠源性感染 ,治疗内毒素血症的新途径。方法 用大肠杆菌J5株 (菌体表面类脂A裸露 )作抗原免疫 2 5周龄Roman鸡 ,制备特异性抗内毒素IgY ,用酶联免疫吸附技术检测其效价及对热、酸、碱和酶的稳定性。结果 IgY抗体效价为 1∶2 5 6 0 0 ,能耐受巴氏消毒 ,对酸、碱、酶有很好的稳定性。结论 用大肠杆菌J5株免疫鸡制备的IgY效价高 ,理化性质稳定 。

鸡蛋黄免疫球蛋白IgY的特性与用途

1969年Leslic与Clem指出鸟类、爬行类和两栖类动物的蛋黄中仅含有免疫球蛋白IgG一种成分。因为只有免疫球蛋白IgG分子能通过卵黄囊转输至蛋黄中,因此用抗原免疫的母鸡所生的鸡蛋黄中含有丰富的免疫球蛋白IgG。由于鸡蛋黄的英文名称为“Yolk”,特取它的第一个字母“Y”为代表,将鸡蛋黄中的免疫球蛋白IgG称为IgY(Immunoglobulin-Yolk)。

提高鸡蛋黄中免疫蛋白含量的免疫方法

提高鸡蛋黄中免疫蛋白含量的免疫方法刘文（上海乳品培训研究中心２０００７２）免疫蛋白是指具有抗体活性，能与相应抗原发生特异性结合的球蛋白，它是构成体液免疫的重要物质。动物的初乳、血液、胃肠液、胆汁和鸡蛋黄中都富含免疫球蛋白。但是在常乳中含量却是极微的（...

蛋黄免疫球蛋白在食品上的应用

对IgY的性质、制备及其在食品工业上的应用作了较详细的论述。

鸡蛋黄中4种生物活性成分联合提取工艺

为研究从蛋黄中依次提取卵黄免疫球蛋白、卵黄高磷蛋白、蛋黄油、卵磷脂4种活性物质的最佳工艺条件,对4种活性物质的提取量测定。结果表明:5 g蛋黄液用8倍蒸馏水稀释,调pH值为5.0,4500×g离心35 min,上清液分别用70%、30%硫酸铵两次盐析,为提取卵黄免疫球蛋白的最佳工艺条件,可得到33.3 mg的卵黄免疫球蛋白,回收率91.44%,活性70.44%;沉淀物加入6倍体积的95%乙醇和正己烷(体积比1∶1)混合有机溶剂3000×g离心20 min,下层胶状物加1.75 mol/L的NaCl溶液,加热、过滤、透析、冻干,为提取卵黄高磷蛋白的最佳工艺条件,可得49.95 mg卵黄高磷蛋白,回收率为83%;上层油状物旋转蒸发,收集产物加入丙酮,3000×g离心20 min,其上层液体再旋转蒸发去除丙酮,可得蛋黄油0.97 g;下层沉淀用丙酮纯化后,真空干燥,得卵磷脂0.53 g。

特异性抗内毒素鸡蛋黄抗体的制备

目的 制备特异抗内毒素鸡蛋黄免疫球蛋白 (Eggyolkimmunoglobulin ,IgY) ,探索防治内毒素血症的新途径。方法 用大肠杆菌J5株、内毒素 (Lipopolysaccharide,LPS)及类脂A(LipidA)作抗原免疫 2 5周龄Roman鸡 ,改良水溶法提取抗体 ,进行紫外分光光度计检测、SDS PAGE及Westernblot免疫印迹分析 ,通过酶联染色反应检测其免疫学活性。结果 大肠杆菌J5株、LPS及LipidA抗体含量分别为 11.4、9.2、9.3mg mL蛋黄液 ,质量分数分别为 92 .3%、87.13%、90 .4 % ,分子质量为180 0 0 0u ,初步鉴定其对内毒素具有特异性结合作用。结论 用大肠杆菌J5株、LPS及LipidA免疫鸡制备的IgY效价高、特异性强、产量大 。

低温乙醇除脂法纯化鸡卵黄中免疫球蛋白

采用低温乙醇除脂法提取鸡卵黄免疫球蛋白 (immunoglobulinyolk,IgY)。通过低温乙醇沉淀、透析和葡聚糖凝胶等不同方法逐步纯化免疫球蛋白。研究了卵黄稀释倍数、乙醇浓度、NaCl浓度以及离心转速对纯化效果的影响。分离纯化后所得的冷冻干燥制品 ,经SDS PAGE和抑菌试验检测可知 :可溶性蛋白质得率为每毫升蛋黄 1 2 6mg ,可溶性蛋白质含量占总蛋白质量的 97% 。

用离子交换层析法纯化鸡蛋黄IgG

为解决鸡蛋黄IgG粗提物不纯的问题,作者试用DEAE离子交换层析法对其进行纯化。结果显示:鸡蛋黄IgG既可用0.1～0.6mol/L NaCl线性连续梯度从DEAE柱上首先洗脱出来,又可用含0.15mol/L NaCl的0.015mol/L Tris-HCl缓冲液(pH8.0)从DEAE离子交换剂上选择性地洗脱下来。采用该法制得的鸡蛋黄IgG抗体制品,具有均一、纯度高和没有明显的抗体丢失等特点,而且本法简便、可靠、实用,有益于鸡蛋黄抗体系统的开发和利用。本法在所查国内外资料中,尚未见报道。

测定鸡蛋黄中抗体效价的ELISA方法的建立

建立了测定鸡蛋黄中特异性抗体的间接ＥＬＩｓＡ方法，将鼠抗鸡蛋黄ｌｇＹ的单克隆抗体ＩＧｌｌ纯化后标记辣根过氧化物酶，做为二抗。用以测定经乙型肝炎疫苗免疫的鸡所产鸡蛋黄中抗ＨＢｓ抗体的效价。用乙型肝炎疫苗免疫２５周龄蚤鸡，经４次免应后，蛋黄中抗ＨＢｓ抗体效价可达１×１０￣(－５)。

免疫球蛋白IgY的分子结构与功能

应用鸡作为免疫宿主产生抗体,大约在100年前已有过报道,鸡的抗体是从血清转输至蛋黄中,使鸡胚胎或雏鸡获得被动免疫性,因此从蛋黄(egg yolk)中提取抗体免疫球蛋白产物称之为IgY(Immunoglobulin yolk,IgY),它的优点是促进了免疫原性,比哺乳动物的抗体易保存,此外IgY能识别一些哺乳动物的相同蛋白质,使得它能得到广泛的应用。通过常规方法免疫而获得的IgY和IgG抗体进行比较。

用鸡蛋黄抗体防治奶牛乳房炎

邵阳市双清区高崇山镇章方在一个偏僻的山上养有61头黑白花奶牛。鉴于口蹄疫的潜在风险,章家从来不买猪、牛、羊肉吃,山上没有鱼塘,吃鱼难。于是在奶牛场里养20多只产蛋鸡,作为全家人的动物蛋白质来源。蛋鸡不喂专门的商品蛋鸡饲料,只喂些玉米、小麦粒,利用牛舍里的牛虻、跳蚤、苍蝇、蚊子和饲料碎屑,也利用牛粪堆积场的蚯蚓、蝇蛆,青饲料地的蝗虫、菜青虫、蟋蟀、地蚕、青草等,养殖成本很低。患乳房炎的牛所产牛奶必须废弃。其原因有三:一是其中含有大量的金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌、绿脓杆菌。

抗内毒素Fab’体外对LPS的拮抗作用

目的探索防治烧伤内毒素血症的新措施。方法通过改良水溶法(water dissolve,WD)从蛋黄中提取、纯化特异性抗内毒素免疫球蛋白IgY,再用胃蛋白酶将IgY酶切为Fab’,采用中和试验检测抗LPS-Fab’对不同细菌来源的LPS的拮抗作用,测定LPS对人体外周单核细胞攻击时TNF-a,IL-6的含量。结果抗LPS-Fab’对铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、普通变形杆菌四种临床常见致病菌来源的LPS,均有拮抗作用,通过测定TNF-a,IL-6的变化证实抗内毒素Fab’可以保护LPS对人体外周单核细胞的攻击。结论抗内毒素Fab’体外有明显的拮抗LPS的作用。

抗LPS-IgY防治烧伤小鼠肠源性内毒素血症的实验研究

目的实验研究抗LPS-IgY对烧伤肠源性内毒素血症的作用。方法标准LPS免疫鸡,采用改良水溶法(WD)从蛋黄中提取特异性抗内毒素IgY。将纯系昆明种小鼠制成30%体表面积(TBSA)Ⅲ°烧伤合并内毒素血症的动物模型,喂服抗LPS-IgY并定期检测血中LPS、二胺氧化酶(DAO)、肿瘤坏死因子(TNF-α)等相关指标。结果喂服抗LPS-IgY后,能明显降低烧伤小鼠的死亡率;明显降低血浆中LPS、DAO和TNF-α的含量;回肠黏膜的损伤程度明显减轻。结论抗LPS-IgY有效拮抗LPS,减少其移位入血,减轻回肠黏膜的损害,对烧伤小鼠肠源性内毒素血症疗效较好。

抗内毒素IgY的制备及稳定性研究

目的 用大肠杆菌J5制备特异抗内毒素IgY ,探索防治内毒素血症的新途径。方法 用大肠杆菌J5作抗原免疫 2 5周龄Roman鸡 ,水溶法提取抗体 ,进行SDS PAGE及Westernblot分析 ,通过酶联染色反应检测其免疫学活性 ,ELISA检测其对酸、碱和酶的稳定性。结果 抗体含量为 1 1 .4mg/ml蛋黄液 ,纯度为 92 .3% ,分子量为 1 80KD ,初步鉴定其对内毒素具有特异性结合作用 ,并且对酸、碱、酶有很好的稳定性。结论 用大肠杆菌J5株免疫鸡可制备出特异性抗内毒素的IgY ,且具有良好的稳定性 。

抗内毒素IgY-F(ab)2鉴定

目的研究抗内毒素IgY用胃蛋白酶切后提取的F(ab)2片段,对其理化特性进行研究。方法将抗内毒素IgY用胃蛋白酶切后提取IgY-F(ab)2段,光密度法测抗内毒素IgY-F(ab)2浓度和含量、ELISA检测抗内毒素IgY-F(ab)2效价,SDS-聚内烯酰胺凝胶电泳检测其分子量及纯度,免疫印迹法(Western-blotting)测定其特异性。结果抗内毒素IgY-F(ab)2含量为1.04mg/mL蛋黄液,效价为1∶25600,纯度为90%,分子量为24KD,与鸡血清中的IgG有相同的抗原性。结论抗内毒素IgY-F(ab)2产量大、效价高、特异性强。

IgY治疗烧伤后肠源性白色念珠菌感染的实验研究

目的 为治疗严重烧伤后肠源性白色念珠菌感染寻求新的治疗措施。方法 选用标准白色念珠菌菌株免疫纯系Leghorn鸡 ;采用改良水溶法 (WD)从蛋黄中提取抗体IgY ,双紫外光测定抗体含量 ,通过SDS PAGE电泳检测抗体纯度 ,Wes tern blotting免疫印迹法测定该抗体来源 ,ELISA法检测热处理后IgY的活性 ,采用纯系SPF小鼠烧伤 (2 5 %Ⅲ度烧伤面积 )肠源性白色念珠菌感染的模型 ,特异IgY治疗并与对照组比较。结果 IgY的效价高 (1∶12 80 0 )、特异性强和理化性质稳定 ;喂服IgY治疗烧伤小鼠后 ,明显抑制小鼠肠道内白色念珠菌的黏附、生长 ;明显降低了烧伤小鼠血浆中二胺氧化酶 (DAO)和肿瘤坏死因子 (TNF α)的释放 ,维护肠黏膜上皮的完整 ,减轻了白色念珠菌对小肠上皮细胞的损害 ;促进肠淋巴细胞分泌IgA ;恢复肠道局部免疫功能。结论 特异IgY效价高、特异性强、理化性质稳定 。

抗咽喉细菌复合抗原的IgY抗体活性研究

目的 :应用咽喉分离的细菌混合抗原免疫母鸡 ,提取鸡蛋黄中IgY ,通过ELISA方法证实IgY抗体的特异活性。方法 :采取咽喉炎相关的多种细菌作抗原免疫产蛋母鸡 ,收集鸡蛋 ,从蛋黄中提取IgY ,经纯化后进行SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳和抗体活性的ELIAS测定。结果 :电泳呈现 1 2条带 ,证明IgY抗体中至少有 1 2种抗体成分 ,ELISA结果表明IgY抗体效价为1∶5 1 2。热稳定性试验结果显示 ,在 37℃温度下 ,IgY抗体活性无改变。结论 :应用多种混合的细菌抗原免疫母鸡 ,其鸡蛋黄中含有相应的IgY抗体成分 。

卵黄粉保健饲料 有效替代抗生素和化学药品

饲用含有免疫球蛋白的特殊“鸡蛋黄”，使畜禽获得抗病能力，有效遏制抗生素滥用，推动绿色健康养殖。这一全新构想，历经10年攻关，终于突破关键技术，实现卵黄粉保健饲料产业化．