鸡血藤提取物对藏鸡精子低温及冷冻保存效果的研究

为探究鸡血藤提取物对藏鸡精液低温及冷冻保存的作用,本实验采集健康的25周龄藏鸡精液,在精液中添加浓度为0.01、0.03、0.05、0.1 mg/mL的鸡血藤提取物进行低温与冷冻保存,对照组用不含鸡血藤提取物的稀释液稀释,检测保存后精子的活率、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活力、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量等指标。结果表明:在4℃保存条件下,与对照组相比,添加终浓度为0.01mg/mL的鸡血藤提取物可显著提高保存24、48h时的精子活率、精液中SOD活力,显著降低精液中MDA含量。在精液冷冻保存中,与对照组相比,添加0.01 mg/mL的鸡血藤提取物可显著提高解冻后精子活率、精液中SOD活力,而显著降低精液MDA含量。本实验结果证明在藏鸡精液低温或冷冻保存时添加0.01 mg/mL的鸡血藤提取物可有效提升精子质量。

鸡血藤提取物改善缺血性脑卒中大鼠免疫抑制的作用及对HMGB1/RAGE信号通路介导AQP-4和GAP-43表达的影响

目的 探究鸡血藤提取物通过高迁移率族蛋白(HMG)B1/晚期糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路介导水通道蛋白(AQP)-4、生长相关蛋白(GAP)-43表达改善缺血性脑卒中大鼠免疫抑制的机制。方法 通过栓线法构建缺血性脑卒中大鼠模型,45只模型大鼠分为模型组、鸡血藤1.5和鸡血藤3.0组(n=15)。另取15只假手术大鼠作为对照组。鸡血藤提取物灌胃剂量为1.5和3.0 g/kg。2 w后比较各组改良大鼠神经功能评分(mNSS)、脑组织损伤、神经元凋亡、HMGB1/RAGE信号通路、AQP-4、GAP-43水平及T细胞亚群水平。结果 模型组mNSS、凋亡率、HMGB1、RAGE、AQP-4、GAP-43 mRNA及蛋白水平明显优于对照组,而CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)比值均显著低于对照组(P<0.05)。鸡血藤1.5组的mNSS评分、凋亡率、HMGB1、RAGE、AQP-4、GAP-43 mRNA和蛋白水平显著低于模型组,CD3^(+)、CD4^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)比值均显著高于模型组(P<0.05)。鸡血藤3.0组mNSS评分、凋亡率、HMGB1、RAGE、AQP-4、GAP-43 mRNA和蛋白水平显著低于鸡血藤1.5组,CD3^(+)、CD4^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)比值均显著高于鸡血藤1.5组(P<0.05)。结论 鸡血藤提取物具有抑制HMGB1/RAGE通路、保护缺血性脑卒中大鼠神经元、解除免疫抑制的作用。

鸡血藤提取物体内抗肿瘤效应及对造血功能的影响

目的通过体内实验研究鸡血藤提取物(SSCE)的抗肿瘤作用及对造血功能的影响。方法采用小鼠移植性Lewis肺癌模型,观察SSCE体内的抑瘤效应并通过检测外周血象,骨髓涂片,观察其对荷瘤小鼠造血功能的影响。结果SSCE抑瘤率达到30.65%。SSCE可促进骨髓增殖,与化疗药合用可减轻化疗的骨髓抑制作用,同时,荷瘤小鼠体质状态不受影响。结论SSCE具有抗癌、刺激造血的双重作用,与化疗药合用可减轻其骨髓抑制作用。

鸡血藤提取物的抗肠道病毒作用

目的揭示鸡血藤提取物(aqueous extracts,AE)抑制肠道病毒的作用,以开发抗肠道病毒新药。方法采用细胞病变CPE和MTT比色法,测定鸡血藤提取物在Vero细胞的抗肠道病毒(EVenterovirus)的活性,其中肠道病毒包括对Coxsackie B3病毒、Coxsackie B5病毒、Echo9病毒、Echo29病毒和Polio I病毒的抑制作用。同时采用BALB/c小鼠经腹腔注射感染Coxsackie B3病毒造成小鼠心肌炎模型,观察心指数、死亡率。最后,通过RT-PCR比较鸡血藤提取物体内外抑制Coxsackie B3病毒的mRNA表达的效果。结果不同质量比鸡血藤提取物对上述5种病毒均呈现不同程度的抗病毒作用。鸡血藤提取物在Vero细胞中抑制Coxsackie B3病毒、Coxsackie B5病毒、Echo9病毒、Echo29病毒和Polio I病毒的半数抑制浓度(IC50)分别为60.8、47.1、14.8、65.5、29.1μg/mL。,鸡血藤提取物的药物治疗指数(Therapeutic index,TI=CC50/IC50)分别为4.1、5.3、16.9、3.8和8.6。鸡血藤提取物对Coxsackie B3病毒的mRNA的表达有抑制作用,同时该提取物对于由Coxsackie B3病毒引发的病毒心肌炎有明显的抑制作用,并可降低小鼠的死亡率。结论鸡血藤提取物对肠道病毒具有抑制作用。

鸡血藤提取物对荷S_(180)小鼠的影响

目的研究鸡血藤水提物的抗肿瘤作用。方法采用鼠源S180肉瘤细胞接种小鼠后,给予鸡血藤水提液0.3 mL/20 g(折合25 g生药/k.g)灌胃,观察鸡血藤水提物在体内的抑瘤作用。结果鸡血藤水提物抑瘤率达到30.08%。结论鸡血藤水提物可抑制小鼠肿瘤细胞的生长,具有抗癌作用。

壮药鸡血藤提取物毒性作用及体外抗肿瘤作用的实验研究

目的：观察鸡血藤提取物（MHD）的毒性及体外抗肿瘤作用。方法：采用常规小鼠急性毒性试验方法、MTT法观察鸡血藤提取物对人胃癌细胞株7901，人肝癌细胞株7404，人宫颈癌细胞株Hela细胞增殖的抑制作用。结果：MHD在大于20μg/ml浓度时对Hela细胞抑制率〉30％，有一定的抑制作用，其结果具有统计学意义。结论：MHD可能具有一定抑制Hela肿瘤细胞增殖及其诱发的移植性肿瘤作用。

鸡血藤提取物对脑缺血再灌注损伤大鼠ATP酶活性影响的实验研究

目的观察鸡血藤提取物对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠Na^+-K^+-ATPase和Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATPase活性的影响,研究其对脑缺血时能量代谢的改善作用。方法运用动物大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,Longa氏评分法行大鼠神经运动功能学判定,TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)染色法测定大鼠损伤后脑梗死范围,酶活性分析检测技术检测Na^+-K^+-ATPase和Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATPase活性。结果 (1)造模后模型组和药物组大鼠均出现不同程度的神经功能损伤。鸡血藤治疗后,低剂量组、高剂量组的神经功能评分均降低,神经功能均有提高(与模型组比较,P<0.01、P<0.05)。(2)缺血再灌注24 h后,鸡血藤低剂量组、高剂量组均可减小脑梗死体积(与模型组比较,P<0.05,P<0.01)。(3)模型组大鼠缺血脑组织ATP酶活性均降低,与假手术组相比,差异有统计学意义(P<0.01);鸡血藤治疗后,大鼠缺血侧脑组织ATP酶活性升高,与模型组相比有统计学意义(P<0.05)。结论鸡血藤提取物对脑缺血再灌注损伤有保护作用。作用机制可能是鸡血藤可以升高大鼠缺血脑组织ATP酶活性,改善脑细胞能量代谢障碍,从而发挥保护作用。

鸡血藤提取物对离体缺血再灌注损伤心肌生化指标的影响

目的研究鸡血藤提取物对豚鼠离体心脏缺血再灌注损伤心肌组织中生化指标的影响。方法制作豚鼠离体心脏缺血再灌注损伤模型,在灌流液中加入不同浓度的鸡血藤提取物,测定灌流后心肌组织中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化。结果鸡血藤提取物能使豚鼠离体心脏缺血再灌注损伤后心肌组织中LDH、CK、SOD的活性升高。结论鸡血藤提取物可通过影响心肌组织中LDH、CK、SOD的活性从而对豚鼠离体心脏缺血再灌注损伤起保护作用。

鸡血藤提取物对酒精性肝病大鼠的保护作用

目的探讨鸡血藤提取物对酒精性肝病大鼠的保护作用。方法将SD大鼠随机分为模型组、鸡血藤提取物低剂量组、中剂量组、高剂量组、阳性药物对照组(益肝灵)和正常对照组。采用梯度浓度酒精、分次少量灌胃的方法建立大鼠慢性酒精性肝病模型,同时给予鸡血藤提取物干预。实验结束时处死大鼠,测定有关指标。结果鸡血藤提取物干预的大鼠血清ALT、AST、TG、CHO水平和肝组织中MDA含量明显低于模型组(P<0.05),同时肝组织中SOD、GSH-Px活性明显升高,与模型组相比差异显著(P<0.05)。结论鸡血藤提取物对酒精性肝病具有一定的保护作用。

鸡血藤提取物对宫内缺氧新生大鼠海马NSE、GFAP表达的影响研究

目的探讨鸡血藤提取物对宫内缺氧新生大鼠海马CA3区神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)、胶质纤维酸性蛋白(Glial Fibrillary Acidic Protein,GFAP)表达的影响研究。方法孕14d SD大鼠30只随机均分为对照组、模型组和实验组。模型组和实验组大鼠在孕14d时缺氧,实验组孕鼠在缺氧前经胃注入鸡血藤提取物,对照组不行缺氧干预。3组新生仔鼠出生时取脑组织进行固定、脱水、包埋、切片、免疫组织化学染色观察NSE和GFAP的积分光密度值(integrated optical density,IOD)。结果与对照组比较,模型组缺氧后新生仔鼠海马区NSE表达明显减少(P<0.05),GFAP表达明显增多(P<0.05);与模型组比较,实验组新生仔鼠海马区NSE表达明显增多(P<0.05),GFAP表达减少(P<0.05)。结论宫内缺氧导致新生鼠海马CA3区神经元数量减少,神经胶质细胞数量增多;鸡血藤提取物能抑制宫内缺氧对新生鼠海马CA3区神经的损伤,其作用可能与其抑制痛阈,清除自由基、稳定细胞膜作用有关。

鸡血藤提取物对大鼠纤维化肝细胞中胶原蛋白表达及TGF-β1/p38MAPK信号通路的影响

目的:探讨鸡血藤提取物对大鼠肝纤维化肝细胞中胶原蛋白表达及转化生长因子β1(TGF-β1)/p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。方法:采用二甲基亚硝胺(DMN)腹腔注射法构建肝纤维化动物模型,分离纤维化肝细胞。用鸡血藤提取物处理纤维化肝细胞,MTT法检测细胞活力,Western blot检测Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、TGF-β1/p38MAPK信号通路相关蛋白(TGF-β1和p38MAPK)、细胞增殖相关蛋白(P21和CyclinD1)的表达水平。结果:与正常肝细胞相比,纤维化肝细胞ColⅠ、TGF-β1和p38MAPK蛋白的表达显著升高。鸡血藤提取物可显著抑制纤维化肝细胞的增殖活力,抑制ColⅠ、TGF-β1和p38MAPK蛋白表达。激活TGF-β1/p38MAPK信号通路能逆转鸡血藤提取物对纤维化肝细胞增殖及ColⅠ表达的影响。结论:鸡血藤提取物可通过抑制TGF-β1/p38MAPK信号通路抑制ColⅠ合成,进而发挥治疗肝纤维化的作用。

鸡血藤提取物改善睡眠剥夺诱导的学习认知功能障碍的作用

目的:探讨鸡血藤提取物(spatholobus sinensis extract,SSE)对睡眠剥夺诱导的学习认知功能障碍的改善作用及其可能机制。方法:改良多平台水环境法制备睡眠剥夺大鼠模型,分别给予不同剂量[45、90、180 mg/(kg·d)]的SSE灌胃30 d。旷场实验检测大鼠焦虑情绪,Morris水迷宫检测各组大鼠学习认知功能,Nissl染色及细胞计数检测各组大鼠神经元数量的改变,ELISA检测各组大鼠血清MT、SOD、MDA与GSH-Px水平,免疫组化及免疫蛋白印迹检测各组大鼠皮质及海马区Bcl-2与Bax表达情况。结果:旷场实验结果显示,模型组大鼠焦虑情绪显著增加,给予大鼠SSE治疗后,焦虑情绪明显减弱(P<0.05);Morris水迷宫检测结果显示,模型组大鼠学习认知功能显著降低,给予大鼠SSE治疗后学习认知功能显著改善(P<0.05);模型组大鼠海马细胞存活率显著降低,SSE治疗后海马细胞存活率显著增加(P<0.05);ELISA检测结果显示,模型组大鼠血清MT、SOD与GSH-Px水平显著降低,MDA的含量显著升高,SSE周期治疗后血清MT、SOD与GSH-Px水平随给药剂量逐渐提高,MDA的含量逐渐降低(P<0.05);Western blot结果显示,模型组大鼠Bcl-2/Bax蛋白表达量比值显著降低,SSE周期治疗Bcl-2/Bax蛋白表达量比值显著升高(P<0.05)。结论:SSE可能通过抑制氧化应激损伤与凋亡机制,进而改善睡眠剥夺诱导的学习认知功能障碍。

雌激素受体阴性/阳性MCF-7细胞增殖速度差异及对鸡血藤提取物敏感性的研究

目的明确雌激素受体(ER)阴性、阳性MCF-7细胞增殖速度差异以及不同MCF-7细胞对鸡血藤黄酮类提取物SSCE抗肿瘤作用的敏感性。方法免疫细胞化学(ICC)方法确定3种MCF-7细胞(MCF-7-a、MCF-7-b、MCF-7-luc)ER表达情况,MTT法检测3种细胞的增殖速度以及对SSCE抑制肿瘤细胞生长作用的敏感性。结果 ER(+)的MCF-7-a、ER(-)的MCF-7-b和MCF-7-luc倍增时间分别为(69.95±9.37)h、(47.17±5.27)h、(44.96±10.33)h,24 h、48 h、72 h各个时间点MCF-7-luc对SSCE的半数抑制浓度均低于另外两株细胞。结论 ER(-)的乳腺癌细胞恶性增殖速度高于ER(+)的乳腺癌细胞;荧光素酶基因标记的ER(-)MCF-7细胞对SSCE抗肿瘤作用更加敏感;提示ER的表达情况与乳腺癌的恶性增殖程度有关,基因重组可能影响了细胞膜表面蛋白的表达,从而增强了细胞对药物的敏感性。

UPLC-Q-TOF-MS/MS法分析鉴定鸡血藤中药复方提取物的化学成分

应用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)技术定性鉴别鸡血藤中药复方提取物的化学成分。采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7µm),以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,电喷雾离子源正、负离子模式扫描。通过质谱数据库、化合物裂解规律,并结合相关文献进行鉴别。共鉴别出82种化合物,以黄酮类、苯丙素类、萜类化合物为主,包括黄酮类22种、苯丙素类24种、萜类25种、酚酸类4种、甾体类6种、氨基酸类1种,各药材组成复方后首次发现的新化学成分有10种。UPLC-Q-TOF-MS/MS技术为鉴别鸡血藤中药复方中化学成分提供了简便、快速、准确的方法,鉴定得到的各个化学成分涵盖了组方中各味药材的主要成分,可为该复方的质量标准及药效物质研究提供实验依据和理论基础。

鸡血藤复方提取物对C57小鼠Lewis肺癌实体瘤抑制作用

目的探讨鸡血藤复方提取物对C57小鼠Lewis肺癌实体瘤的作用及其机制。方法采用小鼠移植性Lewis肺癌模型,动物分为模型组、阳性药组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。观察治疗前后各组小鼠体质量、瘤重并计算抑瘤率,检测血清干扰素(INF)-γ、白细胞介素(IL)-4,比较胸腺、脾脏重量并计算脏器指数,苏木素-伊红(HE)染色并在光学显微镜下观察肿瘤组织的病理改变。结果给药7、14 d后高剂量组、阳性药组体质量减轻,瘤重降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论鸡血藤复方对C57小鼠Lewis肺癌实体瘤有抑制作用,一定程度上提高机体的免疫能力,推测可能在肿瘤治疗中作为生物反应调节剂达到治疗效果。

鸡血藤黄酮类提取物SSCE安全性及抗肿瘤作用的研究

目的:明确鸡血藤黄酮类提取物SSCE的安全性及抗肿瘤作用。方法:利用MTT法检测SSCE对小鼠乳腺癌细胞4T1和正常成纤维细胞L929生长的影响;并以受试物可允许的最大给药浓度(40 mg/mL)、小鼠最大给药容积(0.4mL/10 g),每日单次给药,连续观察14 d内有无毒性反应和死亡。结果:SSCE对4T1和L929细胞均有生长抑制作用,72h半数抑制浓度IC50值分别为19.12μg/mL和120.1μg/mL,对L929细胞的LD5是对4T1细胞IC95的5.1倍;除雌性小鼠在最大给药剂量下出现白细胞数减少、肝脏质量减轻外,雌性和雄性小鼠未出现明显毒性反应和死亡。结论:鸡血藤提取物SSCE安全范围较大,并具有抑制乳腺癌细胞生长的作用。

鸡血藤提取物对环磷酰胺致白细胞低下大鼠的影响

目的利用环磷酰胺(CTX)致白细胞低下大鼠模型研究鸡血藤提取物的升白细胞作用,发现其升白细胞作用的有效部位。方法采用CTX(100 mg/kg)单次sc的方法制备大鼠白细胞低下模型,给药后第7、9、11天采集大鼠的血液,测定白细胞总数及分类,并进行统计分析。结果鸡血藤提取物A(50%乙醇提取,为总提取物)、B(50%乙醇提取-水洗脱)、C(50%乙醇提取-25%乙醇洗脱)组均未见明显升白细胞作用,而鸡血藤提取物D(50%乙醇提取-70%乙醇洗脱,总黄酮量大于55%)和阳性药利可君均具有明显的升白细胞作用,且鸡血藤提取物D的升白细胞作用具有量效关系,优于阳性药利可君。结论鸡血藤提取物D可能是鸡血藤升白细胞作用的有效部位,推测其升白细胞作用的有效物质是总黄酮。

白花油麻藤水提取物补血作用的实验研究

目的:探讨白花油麻藤水提取物的补血作用。方法:将白花油麻藤水提取物分别灌胃给予失血性贫血小鼠、环磷酰胺造模小鼠。结果:白花油麻藤水提取物高、中剂量组在第4 d、第8 d均能明显提高失血性贫血小鼠RBC数量;高、中剂量组在第4 d能明显提高Hb含量;明显对抗环磷酰胺引起的小鼠血红蛋白值、红细胞值降低和白细胞值减少。结论:白花油麻藤水提取物具有一定的补血作用。

鸡血藤对去卵巢豚鼠脂代谢影响的实验研究

目的:建立去卵巢豚鼠脂代谢紊乱模型,探讨鸡血藤提取物对去卵巢豚鼠脂代谢的影响。方法:采用去卵巢方法建立豚鼠脂代谢紊乱模型。30只雌鼠,随机分5组,每组6只:①正常对照组;②模型组;③阳性药物对照组(戊酸雌二醇,80mg/kg·d);④低剂量组(鸡血藤提取物,40mg/kg·d);⑤高剂量组(鸡血藤提取物,80mg/kg·d)。术后1周内所有去除卵巢豚鼠均连续阴道涂片检查。术后1周建模成功后,阳性药物对照组用戊酸雌二醇水溶液灌胃(80 mg/kg·d),鸡血藤提取物低剂量、高剂量组分别按40、80mg/kg·d剂量灌胃,正常对照组、模型组每天等体积生理盐水灌胃。各组均1次/天,连续6周给药。术后每周称体质量,量体长,计算Lee’s指数。实验结束后,检测各组豚鼠血清HDL、LDL、TG、CHO的含量。结果:与模型组相比,鸡血藤提取物可降低去卵巢豚鼠Lee’s指数,从第3周开始明显,其中高剂量效果好。与模型组比较,鸡血藤提取物各组豚鼠血清HDL含量均升高;LDL、TG、CHO含量则均下降,有统计学差异,P<0.05或P<0.01,并呈一定的量效关系,以高剂量效果好。结论:鸡血藤提取物对去卵巢成年动物的脂代谢失衡有调节作用,显示类雌激素样功效,其通过调节血脂水平有预防绝经后妇女因肥胖导致心血管疾病的可能。