鸡豆黄素A对围绝经期抑郁症大鼠的神经保护作用及机制研究

目的探讨鸡豆黄素A(Bioch A)对围绝经期抑郁症(PDD)模型大鼠行为学影响及神经保护机制。方法采用大鼠双侧卵巢摘除(OVX)与慢性不可预知性温和应激(CUMS)两步法制备PDD动物模型。采用旷场实验、强迫游泳实验观察大鼠行为学变化;高效液相色谱-电化学检测法测定大鼠海马组织多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NA)及五羟色胺(5-HT)的含量; Western blot检测海马白细胞介素-1β(IL-1β)、半胱氨酸天门冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、蛋白激酶A(PKA)、磷酸化蛋白激酶A(p-PKA)、cAMP反应元件结合蛋白(CREB)、磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(pCREB)、脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸蛋白激酶B(TrkB)的表达。结果与模型组相比,给予Bioch A和氟西汀治疗后,抑郁症大鼠水平和竖直运动得分均明显增加,强迫游泳不动时间显著降低(P <0. 05,P <0. 01),海马IL-1β、Caspase-1表达水平均不同程度降低(P <0. 05,P <0. 01),5-HT的含量明显升高,PKA及CREB磷酸化水平及BDNF、TrkB mRNA表达水平均不同程度升高(P <0. 05,P <0. 01)。结论 Bioch A对PDD有一定的对抗作用,其机制主要与增加海马5-HT含量及上调海马cAMP-CREB-BDNF信号通路蛋白表达有关。

鸡豆黄素A抑制小胶质细胞活化保护多巴胺能神经元

目的:探讨鸡豆黄素A(Bioch A)对脂多糖(LPS)诱导的多巴胺(DA)能神经元损伤的保护作用。方法:利用LPS建立DA能神经元损伤的细胞模型,利用液闪测定法测[3H]DA摄取力评价DA能神经元的功能,利用免疫组织化学技术进行酪氨酸羟化酶(TH)染色观测DA能神经元的形态和数目,利用免疫细胞化学技术进行OX-42染色观测小胶质细胞(MGC)的形态和数目。NO测定依据Griess反应,TNF-α测定采用酶联免疫法,超氧自由基测定采用细胞色素C还原法。结果:Bioch A以剂量依赖方式减轻大鼠中脑原代混合培养体系中LPS诱导的DA摄取力的下降和DA能神经元数目的下降。Bioch A还抑制中脑混合培养体系和MGC纯化体系中LPS诱导的MGC的活化和TNF-α、NO和超氧自由基的生成。结论:鸡豆黄素A对LPS诱导的多巴胺能神经元的损伤具有保护作用,抑制小胶质细胞的活化是其作用机制之一。

鸡豆黄素A对狗体外冠状动脉血管的舒张作用及其机制

目的以血管张力变化为指标,对鸡豆黄素A的心血管保护作用及相关机制进行探讨。方法制备狗的冠状动脉血管环,固定于恒温浴槽内,待平衡后,加入各种药物观察血管张力的变化。结果 (1)5-羟色胺(5-HT)(10-7～10-5mol.L-1)使冠状动脉血管环产生明显的剂量依赖性收缩,分别用40 nmol.L-1、1μmol.L-1鸡豆黄素A温育预处理后,5-HT量效收缩明显被抑制,量效收缩曲线明显右移。(2)鸡豆黄素A可使60 mmol.L-1KCl预收缩冠状动脉血管环产生明显剂量依赖的舒张作用,缺失内皮细胞或分别加入一氧化氮合酶抑制剂Nω-L-硝基精氨酸1×10-4mol.L-1,吲哚美辛1×10-5mol.L-1,甲烯蓝1×10-5mol.L-1温育预处理,鸡豆黄素A对60 mmol.L-1KCl预收缩冠状动脉血管环产生的量效舒张作用无明显改变(P>0.05)。结论 (1)鸡豆黄素A使血管环对5-HT的敏感性和最大收缩明显降低。(2)鸡豆黄素A对冠状动脉血管的舒张作用与内皮细胞及其释放的一氧化氮无关,与前列腺素类物质亦无关。

鸡豆黄素A对MPP^+诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的观察鸡豆黄素A(Bioch A)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP^+)诱导的PC12细胞的凋亡是否有保护作用。方法用MTT法检测MPP^+对PC12细胞的毒性作用和Bioch A的最适药物浓度,为后续实验筛出诱导细胞凋亡的MPP^+剂量和恰当的Bioch A剂量。常规培养的PC12细胞被分为:Control组、MPP^+(1μmol/L)组、Bioch A(1.25μmol/L)+MPP^+组、Bioch A(2.5μmol/L)+MPP^+组、Bioch A(5μmol/L)+MPP^+组、雌二醇(E2)(0.1μmol/L)+MPP^+组。DCFH-DA探针被用于活性氧(ROS)的检测;Annexin V-FITC/PI双染法被用作细胞凋亡百分比的测定;cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9的表达水平采用Western blot法检测。结果MPP^+模型组较Control组其ROS含量有所升高,Bioch A(2.5、5μmol/L)组的ROS的含量有所下降。MPP^+模型组与Control组比较,其细胞凋亡百分率和活化的cleaved Caspase-3以及cleaved Caspase-9蛋白表达量增多,Bioch A(2.5、5μmol/L)组与MPP^+模型组比较,细胞凋亡百分率下降,cleaved Caspase-3和cleaved Caspase 9蛋白的表达量减少。结论Bioch A对MPP^+诱导的PC12细胞凋亡具有一定的保护作用。

鸡豆黄素A通过雌激素受体抑制LPS诱导的小胶质细胞活化及其机制

目的探讨鸡豆黄素A(biochanin,Bioch A)能否通过雌激素受体抑制LPS诱导的小胶质细胞活化及其机制的研究。方法BV2细胞分为:Control组、LPS(10 mg·L-1)组、Bioch A(5μmol·L-1)组、Bioch A(5μmol·L-1)+ICI(0.1μmol·L-1)组、ER(0.1μmol·L-1)组、ER(0.1μmol·L-1)+ICI(0.1μmol·L-1)组、ICI(0.1μmol·L-1)组、Rosup(0.1μmol·L-1)组、MAPK通路特异性抑制剂组。加入上述相应药物后,进行2 h预处理,除control组外,其余各组加LPS(10 mg·L-1)进行36 h孵育。测定NO的含量通过Griess法;检测ROS通过DCFH-DA探针法;ELISA法测定IL-1β、TNF-α、PGE2含量;Western blot法测定P47phox、gp91phox、iNOS、NF-κB、p-NF-κB以及p-ERK、p-JNK、p-p38表达水平。结果与LPS组相比,Bioch A组ROS、NO、IL-1β、TNF-α和PGE2含量下降,iNOS、p-ERK、P47phox、p-p38、p-JNK、p-NF-κB和gp91phox蛋白表达减少;Bioch A+ICI组上述指标未出现明显变化。结论通过雌激素受体,LPS诱导小胶质细胞的活化受到Bioch A抑制,其机制可能与抑制促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路有关。

鸡豆黄素A抑制血管紧张素Ⅱ诱导的小胶质细胞活化及其机制的研究

目的探讨鸡豆黄素A(biochaninA,Bioch A)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导小胶质细胞活化的影响及其机制的研究。方法MTT法检测AngⅡ各剂量组BV2细胞活性,筛选出AngⅡ诱导细胞活化最适剂量。将BV2细胞分成7组:Control组、AngⅡ(100 nmol·L^-1)组、Losartan(1μmol·L^-1)组、AngⅡ(100 nmol·L^-1)+Losartan(1μmol·L^-1)组、AngⅡ(100 nmol·L^-1)+Bioch A(1.25μmol·L^-1)组、AngⅡ(100 nmol·L^-1)+Bioch A(2.5μmol·L^-1)组、AngⅡ(100 nmol·L^-1)+Bioch A(5.0μmol·L^-1)组。采用DCFH-DA探针法,检测活性氧(reactive oxygen species,ROS);采用ELISA法检测细胞上清液中TNF-α、IL^-1β的含量;Western blot法检测AT1R,P47phox、gp91phox,ASC、Caspase-1和NLRP3,TNF-α、IL^-1β表达水平。结果与Control组比较,AngⅡ组ROS水平升高;AT1R蛋白表达量增多。与AngⅡ组比较,Bioch A降低了细胞内ROS含量,减少小胶质细胞中gp91phox、P47phox蛋白表达,抑制ASC、Caspase-1、NLRP3、TNF-α、IL^-1β、IL-6蛋白的表达。结论Bioch A抑制AngⅡ诱导小胶质细胞活化,其机制可能与抑制NADPH氧化酶和NLRP3炎症小体的活性有关。

葛根素和鸡豆黄素A对17β-雌二醇诱发的子宫内膜渗出的干预作用研究

目的:研究植物雌激素葛根素和鸡豆黄素A对17β-雌二醇诱发去卵巢大鼠子宫内膜渗出和血管通透性的影响。方法:将36只健康雌性SD大鼠随机分为6组(n=6):假手术组、卵巢切除组、17β-雌二醇组、17β-雌二醇+他莫昔芬组、17β-雌二醇+葛根素组、17β-雌二醇+鸡豆黄素A组,除假手术组外,其他各组大鼠摘除双侧卵巢后,分别皮下注射芝麻油、17β-雌二醇、17β-雌二醇+葛根素、17β-雌二醇+鸡豆黄素A、17β-雌二醇+他莫昔芬21天后取组织,比较不同处理组子宫内膜渗出变化和血清VEGF的浓度。结果:给予植物雌激素葛根素、鸡豆黄素A和他莫昔芬后,子宫内膜嗜酸性粒细胞的渗出减少,血清VEGF浓度降低。结论:植物雌激素葛根素和鸡豆黄素A可发挥雌激素拮抗作用,使血清VEGF浓度减小,可抑制外源性雌激素诱导的子宫内膜的渗出。

去甲基化法制备黄豆苷元和染料木黄酮及抗氧化性分析

以KBr-H_3PO_4或KI-H_3PO_4为反应介质,对芒柄花黄素和鸡豆黄素进行去甲基化反应转化成黄豆苷元和染料木黄酮,并对产物的抗氧化性进行分析。结果表明:以KBr-H_3PO_4为反应介质,制备黄豆苷元最佳条件为反应时间5 h、反应温度120℃、料液比1∶45(g/mL)、最佳饱和度75%,产率为89.42%;制备染料木黄酮最佳条件为反应时间5 h、反应温度120℃、料液比1∶45(g/mL)、最佳饱和度100%,产率为85.98%;以KI-H3PO4为反应介质,制备黄豆苷元最佳条件为反应时间4 h、反应温度100℃、料液比1∶15(g/mL)、最佳饱和度75%,产率可达87.03%;制备染料木黄酮最佳条件分别为反应时间5 h、反应温度100℃和料液比1∶45(g/mL)、最佳饱和度75%,产率可达88.51%。与已有合成方法相比,本实验方法具有反应过程简单、反应条件温和、反应时间较短、产率较高等优点。所制备黄豆苷元和染料木黄酮具有一定的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基和羟自由基清除能力,以及较强的抗亚油酸氧化能力,表现出较好的抗氧化性。

等吸光点紫外分光光度法测定红三叶草中总异黄酮含量的研究

目的应用等吸光点紫外分光光度法测定红三叶草中总异黄酮含量。方法本文以芒柄花黄素(formononetin)和鸡豆黄素(biochanin A)为混合标准品,应用紫外分光光度法在等吸光收点处(253.5nm)测定红三叶草中总异黄酮含量。结果研究表明等吸光点处的总吸光度与总异黄酮含量相关,而与二者的相对比例无关。测定的线性范围为2~8μg/m L,加样回收率为97.3%,相对标准偏差为1.08%。结论与已有的单标准品测试方法相比,以芒柄花黄素(formononetin)和鸡豆黄素(biochanin A)为混合标准品的实验方法更加稳定、准确,并且综合等吸光点紫外分光光度法快速、重复性好的优点,使得此方法适用于红三叶草中异黄酮含量检测,可为一般的红三叶草异黄酮的提取纯化研究和生产厂家提供参考。

相转移催化法合成黄酮糖苷的研究

以[(CH3OCH2CH2OCH2CH2)3N]为相转移催化剂,白杨素和鸡豆黄素为苷元,研究了黄酮和异黄酮类化合物分别与1-溴-2,3,4,6-O-四乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖进行缩合反应制备糖苷的合成工艺.其合成收率分别为60%和54%.