超声波辅助复合酶提取鸡软骨中硫酸软骨素

以鸡软骨为原料,采用超声波辅助碱-双酶法提取硫酸软骨素,以硫酸软骨素得率为考察指标,选取最优提取方法,并对最优方法进行单因素试验和响应曲面优化.试验结果表明,最佳工艺参数为超声波功率500 W,超声时间120 min,碱性蛋白酶添加量为1%,木瓜蛋白酶添加量为2%,硫酸软骨素得率可达到36.08%.超声波辅助碱-双酶法耗时短,操作简单且得到的产品纯度高.

鸡软骨中硫酸软骨素的分离纯化

以鸡软骨为原料,对酶法提取硫酸软骨素进行纯化工艺的研究,采用阴离子交换树脂和凝胶层析法对提取的硫酸软骨素粗品进行纯化。结果表明:D218型阴离子交换树脂纯化硫酸软骨素最佳工艺条件为,吸附液用量与树脂体积比为1∶1;吸附流速为1.0m L/min;吸附时间为60 min;洗脱剂Na Cl溶液的浓度为3.0mol/L;洗脱剂用量与树脂体积比为5∶1,最佳解析时间为75 min,硫酸软骨素纯度为72.03%。通过葡聚糖凝胶G-75纯化后得到的硫酸软骨素的纯度为99.30%,较第一次纯化提高了27.27%。通过高效液相色谱法对纯化后的物质进行检测,进一步证明从鸡软骨中提取的物质为CS。

杜仲黄酮与鸡软骨肽的相互作用对抗氧化活性及荧光特性的影响

本文对杜仲黄酮与鸡软骨多肽的相互作用进行研究,以为其在相关食品和保健食品中的应用提供一定的参考。通过DPPH·清除活性检测以及荧光光谱法,研究杜仲黄酮与鸡软骨肽相互作用后其抗氧化活性以及荧光特性的变化。5 mg/mL鸡软骨肽分别与9、12、15、18、21μg/mL杜仲黄酮相互作用后,其DPPH·清除活性均呈现出显著的协同增强效果;高温杀菌(121℃,20 min)及pH6.0的酸性体系有利于提高相互作用产物的DPPH·清除活性。杜仲黄酮对鸡软骨肽的内源荧光有明显的猝灭作用,且随黄酮浓度的增加,荧光猝灭效果越明显,同时荧光最大发射峰出现了明显的红移。说明,杜仲黄酮可与鸡软骨肽发生相互作用,使其抗氧化活性及荧光特性等发生了相应的改变。

鸡软骨肽化学结构特征及抗氧化、抗炎活性成分研究

目的:明确鸡软骨肽的主要化学结构特征,及其抗氧化、抗炎的物质基础。方法:对鸡软骨肽进行水解,采用异硫氰酸苯酯(PITC)-柱前衍生高效液相色谱法检测鸡软骨肽水解后所得氨基酸的组成;借助LC-MS/MS以及物种蛋白质数据库,确定鸡软骨肽中主要水解多肽的氨基酸序列;利用固相合成方法制备已知氨基酸序列的多肽,采用DPPH法、水杨酸法、FRAP方法测定合成肽段的抗氧化作用,采用H2O2致C518大鼠膝关节软骨细胞损伤模型测定合成肽段对氧化损伤的保护作用,采用LPS诱导的C518大鼠膝关节软骨细胞炎症模型测定合成肽段的抗炎作用。结果:确定18种氨基酸在鸡软骨肽中的占比情况,其中占比最高的是甘氨酸(G)29.5%,其次为脯氨酸(P)11.63%、丙氨酸(A)10.61%、谷氨酸(E)9.2%;从水解鸡软骨肽中鉴定出的11条分子量为794~1860 Da的肽段,并筛选出多条抗氧化、抗炎作用显著的活性肽段,其中综合功效最佳的肽段为G4(MEGNAEESTLFCFAVRG)。结论:LC-MS/MS结合物种蛋白质数据库是一种快速、有效研究鸡软骨肽化学结构特征的新方法,本实验借助该方法初步确定了鸡软骨肽的化学结构特征以及抗氧化、抗炎活性成分,将为深入开展鸡软骨肽的应用研究提供基础。

鸡软骨病的预防与治疗

归纳总结规模化养鸡防治软骨病的方法,从症状特点诊断方法和预防措施等方面进行介绍。

鸡软骨可治关节痛

一种试验性的疗法看来可以有效地为病人减轻因风湿性关节炎所引起的疼痛和肿胀。

鸡软骨病的预防与治疗

鸡在生长发育的过程中因受到先天性因素或后天性因素的影响,容易出现鸡软骨病,进而严重影响鸡的机体健康,不利于养殖户扩大自身经济效益规模。因此本文将通过从简单阐明鸡软骨病病症入手,结合相关研究资料,重点针对鸡软骨病的预防与治疗进行简要分析研究,以期能够为相关研究人员提供必要理论参考。

IHH 过表达对鸡原代软骨细胞增殖和分化的影响

为探究印度刺猬因子(IHH)基因对鸡原代软骨细胞增殖和分化的调控作用,本研究根据IHH基因序列信息,构建真核过表达载体(OV-IHH);采用双酶切和测序进行鉴定,并将其转染鸡原代软骨细胞;采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,对软骨细胞进行成骨诱导分化至21 d,采用ALP试剂盒检测细胞ALP活性。结果表明,IHH真核过表达载体构建成功,与对照组和空载体组(OV-NC)相比,过表达组IHH基因的mRNA表达显著增加(P<0.01),过表达效率扩大2700倍左右。过表达IHH促进细胞周期从G1期到S期的转换,从而促进增殖,抑制细胞凋亡,且ALP活性升高,促进细胞分化。综上,IHH基因显著影响鸡软骨细胞的生长发育,研究结果为进一步解析IHH基因调控鸡匍匐性状的作用机制提供理论依据。

鸡关节软骨Ⅱ型胶原蛋白结构及性能表征

从鸡关节软骨中得到的高纯度Ⅱ型胶原蛋白进行结构和性能的表征。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示仅有1条α带和1条β带,无其他杂蛋白带和I型胶原的条带,表明得到的Ⅱ型胶原纯度较高。紫外、红外和圆二色谱结果表明,该Ⅱ型胶原蛋白保持了完整的二级结构,即三股螺旋结构。氨基酸测定结果表明,Ⅱ型胶原含有较多的亚氨基酸,采用差示扫描量热法测得其变性温度高达40.2℃;Zeta电位法测得Ⅱ型胶原等电点偏弱酸性为5.06。

鸡关节软骨Ⅱ型胶原的制备

本文以鸡关节软骨为原料制备Ⅱ型胶原。在酸性条件下添加不同浓度的胃蛋白酶酶解鸡关节软骨Ⅱ型胶原三股螺旋链的端肽,使Ⅱ型胶原由不溶性转变为可溶性,研究底物粘度随酶解时间的变化,确定最佳的酶浓度及酶解时间。采用DEAE-Sephalose CL 6B离子交换柱和去离子水重复洗涤两种方法对酶解样品进行纯化制得Ⅱ型胶原,研究表明,胃蛋白酶最适添加浓度1%(W/W),最佳酶解时间24h。两种纯化方法的Ⅱ型胶原提取率分别为67%和81%。SDS-PAGE电泳、高效液相色谱、氨基酸成分分析及紫外吸收光谱测定结果证实了由鸡关节软骨所制备的Ⅱ型胶原具有较高纯度。

鸡膝软骨胶原蛋白肽的超声辅助酶提工艺优化及抗氧化性

研究超声波辅助酶提取鸡膝软骨胶原蛋白肽的工艺,确定最佳实验用酶为碱性蛋白酶。以料液比、超声功率和酶提时间为试验因素,胶原蛋白肽得率为响应值,利用Box-Behnken试验和响应面法分析试验,确定最佳提取工艺条件。结果表明:最佳提取工艺参数为料液比1∶26(m/V)、超声功率253 W、酶提时间4 h,此时鸡膝软骨胶原蛋白肽得率可达到42.83%,与模型理论预测值(43.32%)较为接近,相对误差仅为0.49%;对经过优化工艺得到的鸡膝软骨胶原蛋白肽成品进行抗氧化性能测定,其2,2’-联氮-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基清除能力和羟自由基清除能力的半抑制质量浓度分别为8 mg/mL和8.5 mg/mL,还原能力低于VC,但具有较好的金属离子螯合能力。

硫酸软骨素提取工艺优化及抑菌活性研究

实验以硫酸软骨素得率为指标选择超声波提取时间、碱质量浓度、碱性蛋白酶添加量和胰蛋白酶添加量4个因素结合响应曲面优化设计最佳提取方案,并选取大肠杆菌、枯草芽孢杆菌进行抑菌实验,采用平板计数法,确定其抑菌效果以及最低抑菌浓度.研究结果显示,超声波辅助碱-双酶法提取硫酸软骨素的最佳工艺条件为:料液比为1∶15(g/mL),碱添加量为30g/L,提取温度50℃,超声时间为40.6min、碱性蛋白酶添加量为3.01‰、胰蛋白酶添加量为3.53‰,硫酸软骨素得率为18.88%.抑菌实验表明硫酸软骨素对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌有抑制作用,最低抑菌浓度均为200mg/mL.

鸡胚原代软骨细胞的分离培养及表型鉴定

选取不同日龄的SPF鸡胚进行骨架染色,确定软骨最佳取材日龄为15日龄,分离关节软骨,采用胰蛋白酶和Ⅳ型胶原酶两步消化法获取软骨细胞。CCK-8法检测细胞增殖率,阿利新蓝染色及实时荧光定量PCR技术检测软骨细胞标志性基因表达来鉴定分离培养的软骨细胞。结果显示,分离培养的软骨细胞3~5 d时增殖较快,阿利新蓝染色阳性,能够表达sox9、colⅡ、acan、vegfA和mmp13等不同分化阶段标志性基因,且随着体外培养时间的增加,晚期表达基因vegfA和mmp13 mRNA表达上调。结果表明,分离培养的鸡胚软骨细胞具有软骨细胞表型,可作为家禽骨骼及钙磷代谢紊乱性疾病研究模型。本试验旨在建立鸡胚原代软骨细胞的体外培养体系,以期为家禽骨骼及钙磷代谢紊乱性疾病研究提供理论依据。