鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒间接免疫荧光检测方法的建立与比较

为建立鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒(MDV HVT)的间接免疫荧光方法,将MDV HVT病毒接种96孔细胞板培养(CEF),72 h后用鸡抗马立克氏病病毒阳性血清作为一抗和兔抗鸡荧光抗体作为二抗,对反应条件进行优化,建立了间接免疫荧光方法(IFA)。并与经典的马立克蚀斑计数方法进行病毒滴度的测定比较,运用统计学方法分析,P小于0.05,相关系数为0.995,说明两种方法相关性很好,两种方法均可用于马立克氏病病毒的滴度测定。IFA方法较蚀斑计数方法操作简便快捷,可代替蚀斑计数方法用于马立克氏病活疫苗的病毒含量的初步测定,同时为2025年版《中国兽药典》马立克氏病活疫苗增加IFA鉴别检验方法积累实验数据。

鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒(耐热保护剂)活疫苗的研究

通过对不同保护剂基质与鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒（HVT）相溶性的研究及冻干曲线的优化，成功研制出一种适宜HVT的耐热冻干保护剂，用其与相匹配的48h自然回温冻干曲线冻干的HVT耐热活疫苗，其病毒冻干损失比SPGA常规疫苗减少约50%，在2-8℃条件下可保存24个月，37℃保存10d病毒存活率达50.5%，而SPGA规程苗仅为31.6%，经约50万羽份的田间试验，证明安全有效并显示出良好的耐热性能，达到国外同类产品水平。

鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒(HVT Fc—126株)毒种特性鉴定

当前在世界范围内主要使用火鸡疱疹病毒(HVT)制苗预防鸡马立克氏病(MD)。由于该毒株对鸡不致病,抗原性与 MD 病毒相关,并能有效地预防由 MD 诱发的肿瘤病。另外与 MDI 血清Ⅰ型致弱毒疫苗和血清Ⅱ型自然弱毒株疫苗相比,HVT 可以冻干保存,便于运输及使用,同时它也是 MD

鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗毒价检测方法的建立

为了提高鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗毒价检测效率,本试验尝试建立了一种不添加琼脂的蚀斑计数法。分析了影响蚀斑测定的因素,确定了细胞最佳接种密度为1.0×106个/m L,病毒液的稀释倍数为1×104和5×104,蚀斑计数时间为接毒后4 d。该方法操作简单,测定条件均一,可控性强,批间误差小,缩短了鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒毒价的测定周期。

鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒(耐热保护剂)活疫苗的中试生产及区域试验

按照拟定的《鸡马立克氏病HVT（耐热保护剂）活疫苗制造及检测规程》（草案）在辽宁益康生物制品厂进行了5批该疫苗的中试生产，计3542万羽，检验全部合格；耐老化试验及保存期测定结果表明：该产品在2－8℃可保存24个月。在北京，河北，辽宁，广西，广东等地选择几个大型孵化厂进行区域试验，共免疫鸡700万羽，均未出现任何不良反应，跟踪观察，免疫鸡也未发生马立克氏病，表明该疫苗安全有效。

病毒保护剂在鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗生产中的应用

2种不同的病毒保护剂A和B,应用于鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗生产中,3批试验结果表明:裂解后SPGA4万倍稀释,保护剂B的蚀斑数比对照平均增加121%,保护剂A最低使减少14%。保护剂B的最佳添加浓度筛选试验结果表明:1次添加浓度为1%或2%,2次添加浓度为2%。3批病毒保护剂B扩大中试试验结果表明:裂解后SPGA4万倍稀释,试验组比对照组蚀斑数平均增加66.5%。HVT活疫苗(病毒保护剂B)特异性试验结果表明,马立克氏病标准阳性血清对其特异性识别;平行冻干后,试验组比对照组蚀斑数高200%;经37℃10d耐热试验表明,试验组比对照组蚀斑数高242%;试验苗免疫攻毒保护率为75%,对照苗为33.4%。

部分国内外鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒疫苗的检验结果

马立克氏病(MD)是危害养禽业的主要传染病之一。目前全世界普遍使用火鸡疱疹病毒(HVT)冻干疫苗,在 MD 的预防和控制中起着重要的作用。我国目前使用的 MDHVT 冻干疫苗大部分为国产的,而大中型养鸡场,尤其是种鸡场几乎全部使用进口疫苗,国内外同类产品质量差距究竟有多大?

三氮唑核苷对鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒在细胞上繁殖的抑制作用

三氮唑核苷是医用抗病毒药物,临床上用于治疗急性流行性结膜炎、流行性感冒、口腔疱疹等多种病毒性疾病。其作用机制是抑制病毒合成酶,从而抑制多种 RNA 和 DNA 病毒复制。目前兽医临床上尚无广泛应用的抗病毒类药物治疗病毒性疾病,为此笔者进行了三氮唑核苷对鸡马立克火鸡疱疹病毒的抑制作用试验,现将结果报告如下。

中英美关于鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗成品检验规定中的几个主要不同点

中国、英国、美国关于鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗成品检验的不同点,主要集中在安全检验、外源病毒检验、蚀斑计数和效力检验四个方面,现参考《中国兽药典》

犊牛睾丸细胞复制鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒的初步试验

犊牛睾丸细胞已用来生产猪瘟、狂犬病等家畜疫苗 ,此种细胞来源广泛 ,生产性能良好 ,且不受禽源致病微生物的污染 ,能否替代禽源 CEF细胞 ,所以我们进行了异源细胞的复制试验。结果表明 ,犊牛睾丸细胞可以复制鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒 ,但数量甚微。

浅谈如何提高鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒疫苗免疫效果

火鸡疱疹病毒(HVT)疫苗是一种异源疫苗,免疫只是一种干扰现象,因为在接种疫苗后,还会发现自然病毒在鸡体同时存在,但不引起发病和死亡;如果疫苗进入鸡体内的时间晚于自然病毒,那么就不能免疫。经火鸡疱疹病毒疫苗免疫的鸡,在受到MDV强毒的攻击后,可以从50～70％的鸡体内回收到MDV。说明即使经过免疫的雏鸡,MDV仍可在体内繁殖。

无特定病原鸡蛋用于鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒疫苗检验对比试验

从我广应用无特定病原(SPF)鸡蛋生产鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒疫苗(下称鸡马立克疫苗)以来,它能否提高产量?它的鸡胚成纤维细胞(简称 SPF—CEF)和普通蛋的鸡胚成纤维细胞(简称 Common—CEF)用于马立克疫苗的蚀斑单位(PFU)测定。

马立克氏病病毒和火鸡疱疹病毒在鸡胚细胞培养上生长特性的比较

比较了马立克氏病病毒(MDV)不同毒株(GA、Md5、Md11/75c、SB1)和火鸡疱疹病毒(HVT)Fc126株在鸡胚成纤维细胞(CEF)上的空斑形态,测定了MDV-GA和HVT-Fc126的生长速度,并观察了它们的超微结构。发现不同毒株的空斑形态不同,毒株的毒力越强,其空斑越小。生长速度测定表明,毒力越强的毒株,CPE出现越晚;接毒量愈多,CPE出现愈早。还发现HVT-Fc126可能存在病毒的第二次释放,而MDV-GA未见此种现象。超微结构动态观察表明,MDV-GA的感染形式可能主要是通过合胞体从一个细胞核进入另一个细胞核,而HVT-Fc126除了此种形式外,还可能通过细胞膜上的微绒毛释放到细胞外而形成第二次感染。超微结构观察还表明,MDV-GA和HVT-Fc126均在感染细胞内形成;MDV-GA主要存在于胞核内,胞质中很少见,而HVT-Fc126在胞核和胞质中均可看到。这两株病毒大小相似,核衣壳直径均为90～100nm。

表达鸡马立克氏病病毒gB基因的重组鸡痘病毒与火鸡疱疹病毒二价冻干疫苗的免疫效力

对高效表达鸡马立克氏病(MD)血清型疫苗毒株CVI998/Rispens gB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)和火鸡疱疹病毒(HVT)组成MD二价冻干疫苗时2种病毒的最适剂量配比进行了研究。试验表明,以对MD易感、MD和鸡痘病毒(FPV)抗体阴性SPF鸡为试验动物进行的试验中,不同免疫剂量的rFPV-gB/R(1×106、1×105、1×104PFU)同HVT组成的二价苗产生的免疫效力相当;以对MD易感、MD和FPV抗体阳性的狼山鸡进行的试验中,不同免疫剂量的rFPV-gB/R同HVT组成的二价苗产生的免疫力随rFPV-gB/R免疫剂量的降低而降低;所有的rFPV-gB/R+HVT的二价苗组均有一定的免疫保护作用。

马立克氏病病毒单克隆抗体研究 Ⅰ.马立克氏病病毒和火鸡疱疹病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和鉴定

采用马立克氏病病毒(MDV)和火鸡疱疹病毒(HVT)感染细胞匀浆抗原免疫 BALB/C 小鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术获得了13件分泌 MDV 特异性单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。其中9株 McAb 对三个血清型毒株均呈阳性反应;BC_3对血清Ⅰ、Ⅲ型毒株反应阳性:CE_(11)和 CB_3对血清Ⅰ型毒株呈阳性反应;EE_(12)对血清Ⅲ型发生反应.13株 McAb 既具有 ELISA 特性(最高效价1:100000),

鸡马立克氏病二价苗与火鸡疱疹病毒苗免疫效力比较试验

用马立克氏病病毒血清Ⅱ型和Ⅲ型组成的二价苗、荷兰HVT细胞结合苗、国产HVT冻干苗分别免疫一日龄小鸡。免疫后21天用马立克氏病强毒攻击,攻毒后八周扑杀。观察其肉眼和显微病理变化,比较其免疫效力。结果表明,实验室试验二价苗,荷兰HVT细胞结合苗、国产HVT冻干苗MD减少率分别为100％、92.5％、77.6％。田间试验MD减少率分别为100％、87.5％和87.5％。二价苗的免疫效力明显优于火鸡疱疹病毒冻干苗。

鸡马立克氏病疫苗免疫增强剂的研究 Ⅰ、免疫增强剂对火鸡疱疹病毒(HVT)疫苗蚀斑保护试验

将自行研制的免疫增强剂与鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒(HVT,Fc—126株)活疫苗联合使用。结果表明该免疫增强剂能显著提高HVT疫苗的保护率和HVT苗的活力,同时能提高机体T、B淋巴细胞免疫功能。联合使用的结果,经实践证明能更有效地控制鸡马立克氏病的发生。