抗鸡IgM单克隆抗体的研究──Ⅱ．检测抗鸡IgMμ链单克隆抗体的间接ELISA法

采用饱和硫酸铵盐析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２００柱层析和羊抗鸡ＩｇＭμ链抗血清亲和层析等方法从鸡血清中纯化ＩｇＭ，同时采用硫酸钠盐析及ＤＥＡＥ离子交换层析从鸡蛋黄中纯化ＩｇＧ。以纯化的ＩｇＭ和ＩｇＧ包被酶标反应板，进行双排筛选，建立了检测抗鸡ＩｇＭμ链单克隆抗体的间接ＥＬＩＳＡ法。ＩｇＭ和ＩｇＧ最适包被浓度为１μｇ／ｍｌ，ＨＲＰ－羊抗鼠ＩｇＧ最适工作浓度为１：２０００。从４７８孔杂交瘤细胞中共检出３０孔阳性，阳性检出率约为６．２８％。试验结果表明此方法具有特异性强、重复性好、敏感性高等优点。

抗鸡IgMμ链单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

以原核表达鸡Ig Mμ链蛋白免疫BALB/c小鼠,取3次免疫后的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经ELISA筛选克隆,获得2株分泌抗鸡Ig Mμ链单克隆抗体的杂交瘤细胞株（1H2、1D10）。这2株杂交瘤细胞株连续传代4个月,并经液氮冻存5个月后复苏培养,仍能稳定地分泌特异性Mc Ab。1H2、1D10腹水ELISA效价分别为1：10~6、1：10~7,亚类鉴定均为Ig G1κ型。间接ELISA检测显示,这两株单抗均与鸡血清中的天然Ig M发生特异性反应,可用于鸡血清中Ig M的快速检测,对于各种传染病的早期诊断具有重要意义。