鸡RIPK2基因启动子核心区域及生物信息学分析

为了对前期高通量测序筛选出的抗禽致病性大肠杆菌鸡中高表达RIPK2基因进行结构和蛋白功能探析,试验通过PCR技术克隆鸡RIPK2起始密码子前3 201 bp的启动子区,构建系列启动子区缺失载体,转染HD11细胞,双荧光素酶试验检测启动子核心区域;5-Azadc、TSA或5-Azadc和TSA联合处理鸡RIPK2启动子;并结合生物信息学技术对鸡RIPK2蛋白的理化性质进行系统分析。结果显示:通过PCR技术成功克隆鸡RIPK2启动子区不同片段,单、双酶切测序结果准确;-2 300~+38 bp区域是鸡RIPK2基因启动子的基本活性区域,-2 300~-1 839 bp之间存在AP-1、CEBPA和NFκB等重要正调控元件。用5-Azadc、TSA以及5-Azadc和TSA联合分别处理鸡RIPK2启动子,均可提高其转录活性。生物信息学分析表明:鸡RIPK2蛋白在细胞核中表达;在生物进化进程中物种间保守性一般,禽类中保守性很高;存在自身磷酸化位点。试验结果为进一步研究鸡RIPK2基因转录调控机制和蛋白功能奠定了基础。