鸦胆子素D对人胰腺癌细胞株Panc-1体外增殖的抑制作用

目的探讨鸦胆子素D对人胰腺癌细胞株Panc-1体外增殖的影响。方法人胰腺癌细胞株Panc-1经不同浓度(0、5、10、20、40、60μmol/L)鸦胆子素D分别作用24、48、72 h后,应用CCK-8法检测鸦胆子素D对Panc-1细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测Panc-1细胞凋亡情况;Western blot检测Panc-1细胞经0、5、10、20、30、60μmol/L的鸦胆子素D处理24h后以及20μmol/L的鸦胆子素D处理24、48、72 h后,细胞中Bax及Bcl-2的表达。结果鸦胆子素D对Panc-1细胞的增殖抑制作用呈明显浓度和时间依赖性,60μmol/L时对Panc-1作用24、48、72 h后细胞存活率分别为54.44%、33.00%、21.63%,凋亡率分别为47.29%、63.80%、72.16%;0、5、10、20、30、60μmol/L的鸦胆子素D作用于Panc-1细胞72h后的细胞存活率是100%、71.60%、60.37%、46.78%、39.98%、21.63%,凋亡率分别为0、26.63%、45.62%、56.18%、62.21%、72.16%;随着鸦胆子素D作用时间的延长或浓度的增加Bax蛋白的表达升高,Bcl-2蛋白的表达降低。结论鸦胆子素D可显著抑制人胰腺癌Panc-1细胞生长,并促进其凋亡,在一定的浓度和时间范围内,其作用呈明显浓度和时间依赖性,其作用机制可能是通过促进Bax的表达,降低Bcl-2的表达实现的。

鸦胆子素D联合紫杉醇对胰腺癌Capan-2细胞增殖的抑制作用及机制研究

目的:探讨鸦胆子素D(BD)联合紫杉醇(Taxol)对人胰腺癌Capan-2细胞增殖的抑制作用及可能机制。方法:以Capan-2细胞为对象,采用磺酰罗丹明B法检测不同剂量BD(5、10、15、20μmol/L)、Taxol(10、20、30、40 nmol/L)、BD+Taxol(5μmol/L+10nmol/L、10μmol/L+20 nmol/L、15μmol/L+30 nmol/L、20μmol/L+40 nmol/L)作用48 h后的细胞增殖情况,并计算细胞存活率和药物合用指数(CI)。采用克隆形成试验检测BD(20μmol/L,下同)、Taxol(40 nmol/L,下同)、BD+Taxol(20μmol/L+40 nmol/L,下同)作用24 h后的细胞克隆集落形成情况,并计算克隆形成率;采用DAPI染色法观察BD、Taxol、BD+Taxol作用24 h后的细胞凋亡情况,采用Western blotting法检测的BD、Taxol、BD+Taxol作用后凋亡相关蛋白[Bcl-2、多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)、切割胱天蛋白酶3(Cleaved-caspase-3);药物作用48 h]以及c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)蛋白(药物作用4、6、12 h)的表达情况。结果:经10、15、20μmol/L BD,20、30、40 nmol/L Taxol以及两药上述剂量联合作用48 h后,细胞的存活率均显著降低,且联用组显著低于BD、Taxol同剂量单药组(P<0.05),各联用组(BD 5μmol/L+Taxol10 nmol/L、BD 10μmol/L+Taxol 20 nmol/L、BD 15μmol/L+Taxol 30 nmol/L、BD 20μmol/L+Taxol 40 nmol/L)的CI值分别为0.63±0.04、0.68±0.08、0.89±0.12、0.84±0.05。经20μmol/L BD、40 nmol/L Taxol以及两药上述剂量联合作用后,细胞的克隆集落形成有所减少,并伴有不同程度的染色质浓聚和细胞核皱缩,细胞的克隆形成率(24 h)以及Bcl-2(48 h)、RAPR(48 h)、Caspase-3(48h)、JNK(4、6 h,Taxol单药组除外)的相对表达量均显著降低,Cleaved-caspase-3(48 h)、p-JNK(4、6、12 h)的相对表达量均显著升高,且BD+Taxol联用组均显著优于同时间点BD、Taxol同剂量单药组[JNK(4、6、12 h)、p-JNK(4 h)除外](P<0.05或P<0.01)。结论:BD、Taxol均可抑制人胰腺癌Capan-2细胞的增殖并促进其凋亡,且两者联合具有一定的协同作用,效果优于任一药物单用。上述作用可能与激活Caspase通路以及JNK磷酸化等途径有关。

异牡荆素调节miR-107/CCND1轴对胰腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的:探讨异牡荆素(IVX)对胰腺癌(PCa)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法:体外培养人PCa细胞系(PANC-1、AsPC-1、BxPC-3、Capan-1和SW 1990)和人正常胰腺导管上皮细胞(HPDE),实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测细胞中微小RNA-107(miR-107)和细胞周期蛋白D1(CCND1)的表达。采用MTT法检测IVX对PANC-1细胞的毒性作用;将PANC-1细胞分为正常对照(NC)组、5μmol/L IVX组、10μmol/L IVX组、20μmol/L IVX组、20μmol/L IVX+anti-NC组、20μmol/L IVX+anti-miR-107组。细胞克隆形成实验检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;划痕愈合实验和Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭;双荧光素酶报告基因检测和RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验验证PANC-1细胞中miR-107和CCND1的靶向关系;裸鼠成瘤实验、免疫组织化学(IHC)染色和qRT-PCR探究IVX对PCa细胞体内肿瘤生长和Ki-67、CCND1、miR-107表达的影响。结果:在PCa细胞系中miR-107呈低表达,CCND1呈高表达。IVX以浓度依赖性方式抑制PANC-1细胞增殖;5、10、20μmol/L IVX以浓度依赖性方式抑制细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞周期停滞和细胞凋亡,上调miR-107表达,降低CCND1 mRNA和蛋白水平(均P<0.05);且下调miR-107的表达可显著减弱IVX对PCa细胞恶性生物学行为的抑制作用;双荧光素酶报告基因检测和RIP实验证实CCND1是miR-107的靶标。裸鼠移植瘤实验结果显示,IVX可显著抑制体内移植瘤生长和Ki-67、CCND1表达,并上调miR-107表达(均P<0.05)。结论:IVX可能通过上调miR-107,抑制CCND1表达,进而抑制PCa细胞的增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。