鸭肝组织中DHBcAg表达水平定量免疫组织化学方法的建立

目的：建立鸭肝组织中鸭乙肝病毒核心抗原（DHBcAg）表达水平定量的免疫组织化学方法。方法比较热修复、微波修复、胃蛋白酶修复和不修复四种不同抗原修复方法的免疫组化检测技术，建立 DHBcAg抗原修复的最佳方案。采用Image-Pro Plus 6.0软件，设置优化图像采集参数，通过扣除空白区域的面积计算二氨基联苯胺（DAB）黄染的平均光密度（MD），客观评价不同切片中阳性表达的程度。采用该方法对 DHBV感染的鸭肝组织中 DHBcAg表达水平进行定量，评价DHBcMAb-TAT PTD穿膜抗体的抗病毒作用。结果抗原不修复的方式进行 DHBcAg免疫组化染色优于其他三种抗原修复的方法。建立优化的图像采集参数，进行DHBcAg抗原表达的 MD值计算。比较受试麻鸭治疗前后肝组织中DHBcAg的 MD差值，结果显示随着DHBcMAb-TAT PTD穿膜抗体给药剂量的增加，鸭肝细胞内 DHBcAg的表达逐渐降低，存在明显剂量依赖关系。表明该方法可有效评价药物对DHBcAg的影响。结论建立DHBcAg抗原不修复的定量免疫组织化学方法可以更加客观、准确的评价DHBcAg表达水平。