鸭FST基因编码区克隆、序列分析及其在大肠杆菌中的表达

本研究旨在获取鸭卵泡抑素(FST)外源蛋白以及进一步深入了解其在肌肉发育和繁殖上的作用,采用RT-PCR方法从鸭卵巢中克隆鸭FST基因CDS序列,并将编码FST成熟蛋白的核酸片段连入原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠杆菌(Escherichiacoli)并采用IPTG进行诱导,诱导后的蛋白经SDS-PAGE分析后用蛋白免疫技术鉴定。序列分析表明,FST基因编码区序列为1 032 bp,编码343个氨基酸,其中信号肽由28个氨基酸组成,成熟蛋白具有4个保守结构域:N-domain、DomainⅠ、DomainⅡ和DomainⅢ,其中DomainⅠ与鼠DomainⅠ结构较相似,DomainⅡ和DomainⅢ差异很大。SDS-PAGE电泳结果显示表达出的融合蛋白为52 ku,免疫鉴定结果呈阳性。结果表明,FST基因在3个功能结构域上存在差异,推测DomainⅠ主要与其肌肉发育有关,而DomainⅡ、DomainⅢ与鸭繁殖关系密切。本研究成功获取了鸭卵泡抑素蛋白,为进一步研究卵泡抑素在鸭肌肉发育以及繁殖中的功能奠定了基础。