鸭新城疫研究进展

鸭新城疫是由禽新城疫病毒(NDV)引起的一种急性、高度传染性的疾病。主要特征为呼吸急促、神经紊乱和浮肿,感染后可导致鸭子的大规模死亡,给养殖业带来严重影响,进而损害农民的收入和生计。因此,预防控制鸭新城疫至关重要。笔者对发病机理、临床症状、防控措施进行介绍,以期为规模化鸭场防控鸭新城疫提供良好的参考,实现预防为主的目标,遏制病毒传播。

鸭新城疫病毒和流感病毒多重RT-PCR鉴别诊断技术的建立和应用

对同样以引起鸭产蛋下降为主要特征的鸭流感病毒(AIV)分离株和鸭新城疫病毒(NDV)YH99V分离株,通过设计特异性引物和优化体系反应条件,建立了一种早期快速鉴别诊断鸭AIV和鸭NDV的单项RT-PCR方法和多重RT-PCR方法,AIV的扩增片段大小为483bp,NDV的扩增片段为310bp,电泳快速,易于区分。敏感性试验表明,该方法比HA敏感100倍以上;对AIV、YH99V、IBV、IBDV及正常鸡胚尿囊液的混合液检测显示,多重RT-PCR法具有很强的特异性。对鸭病毒性产蛋下降征侯群送检病料的检测证明,该方法能有效鉴别AIV和/或NDV单独感染或混合感染,阳性检出率明显高于HA方法。

鸭新城疫病毒M基因的原核表达与多抗制备

为制备鸭源新城疫病毒M蛋白的多克隆抗体,根据鸭新城疫病毒M基因序列设计1对特异性引物,RT-PCR方法扩增出M基因,克隆入原核表达载体p ET-30a,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下成功表达重组蛋白,SDS-PAGE结果显示,表达的重组蛋白分子质量约为39 ku。将目的蛋白切胶免疫ICR小鼠,制备重组蛋白的多抗血清,Western blot分析显示,制备的多抗血清能与鸭新城疫病毒感染的SPF鸡胚尿囊液总蛋白发生特异反应。以上结果表明,M基因在大肠杆菌中获得了成功表达,且制备的鼠多抗血清可以用于M蛋白的检测。

鸭新城疫病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的初步建立

为了对目前流行的鸭新城疫进行快速诊断,应用蔗糖密度梯度离心纯化后的鸭新城疫病毒免疫6周龄雌性Balb/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。采用ELISA方法筛选阳性细胞克隆,经3次亚克隆后获得一株能稳定分泌鸭新城疫病毒特异性单克隆抗体的细胞株2C1。以PEG纯化后的2C1腹水为捕获抗体,辛酸-硫酸铵纯化的兔抗鸭新城疫病毒多克隆抗体为第二抗体,HRP标记的羊抗兔抗体作为酶标抗体,建立了检测鸭新城疫病毒抗原的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,当2C1包被量为4μg/孔,鸭新城疫病毒1∶10稀释,兔抗鸭新城疫病毒多抗作用量为0.1μg/孔,HRP标记的羊抗兔二抗1∶10 000倍稀释,每次作用时间为1h时,P/N比值最高,且阳性OD值最接近1.0。试验表明,该方法特异性好,不与IBV、ARV、GPV、DPV、DHV尿囊液及H5、H9标准阳性抗原发生反应;可以检测出0.2μg纯化病毒,比传统的HA试验的敏感性至少高64倍;批间和批内变异系数均小于10%。本研究建立的双抗体夹心ELISA方法为鸭新城疫病毒的快速诊断奠定了基础。

鸭新城疫病毒和鸭圆环病毒二重PCR检测方法的建立

本研究根据GenBank中鸭新城疫病毒(NDV)的F基因和鸭圆环病毒(DuCV)的V1/rep基因的保守序列,各设计一对特异性引物,并对二重PCR的扩增条件进行优化,建立了鸭NDV和DuCV的二重PCR检测方法。对混合样品进行扩增,得到2条大小为493bp(鸭NDV)和218bp(DuCV)的特异性条带,与预扩增片段相符。而对番鸭细小病毒、鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、鸭源小鹅瘟病毒、鸭H9亚型流感病毒、鸭疫里氏杆菌、大肠杆菌、禽多杀性巴氏杆菌等病原检测,结果为阴性。该方法的敏感性试验表明,鸭NDV的核酸最小量为40fg,DuCV为20fg。

鸭新城疫病毒NP基因的原核表达与多抗的制备

根据鸭新城疫病毒NP基因序列设计1对特异性引物,RT-PCR方法扩增出NP基因,克隆入原核表达载体pET-30a,转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3),在IPTG的诱导下融合蛋白获得了成功表达,SDSPAGE结果显示表达的融合蛋白分子量约为59kD,Western blotting分析表明该重组融合蛋白能与His组氨酸单抗发生特异性反应。将目的蛋白切胶免疫ICR小鼠,制备了针对重组蛋白的多抗血清,Western-blotting分析显示制备的多抗血清能够与鸭新城疫病毒感染的SPF鸡胚尿囊液总蛋白发生特异反应。以上结果表明,NP基因在大肠杆菌中获得了成功表达,且制备的多抗血清可以用于NP蛋白的检测。

检测板法与HI法测定鸭新城疫抗体比较研究

用新城疫病毒抗体快速检测卡法和血凝抑制试验(HI)同时测定40份鸭血清样品,研究检测板法检测鸭血清的相关关系。结果表明:检测板法和HI法2种方法的阳性符合率为92.59%,阴性符合率为84.62%,阴阳性总体符合率为90%。可见,检测板方法特异、敏感、快速,适用于临床筛查大规模的鸭场新城疫抗体。

一例鸭新城疫与传染性浆膜炎混合感染的诊断与治疗

鸭副黏病毒病又叫鸭新城疫,是由鸭Ⅰ型副黏病毒引起的导致鸭发生消化道和呼吸道症状的传染病。病原是鸭副黏病毒,以侵害消化道和呼吸道为特征的传染病。2019年12月,一鸭场陆续出现鸭只死亡,使用多种药物治疗效果不佳,根据流行病学调查、临床症状、病理变化及实验室诊断结果,确诊为鸭新城疫病与传染性浆膜炎混合感染,采取相应治疗措施后,病鸭痊愈。

鸭坦布苏病毒与新城疫混合感染的分离鉴定

鉴于上海某鸭场成年种鸭出现产蛋率下降、死亡率升高的现象,为有效解决此问题,通过鸭/鸡胚接种,进行了血凝及血凝抑制实验,对分离的病毒进行了鉴定,最终基本确诊为鸭新城疫和鸭坦布苏病毒混合感染,其发病原因是由于新城疫病毒引起鸭群抵抗力下降,导致并发坦布苏病毒感染。

一株鸭源新城疫病毒的分离鉴定及F基因序列分析

从山东潍坊某发病鸭场分离到1株病毒,经分离、鉴定为鸭新城疫。对该分离病毒进行了毒力和致病性等生物学特性分析。结果,该分离病毒连续传3代后,HA效价稳定在9log2以上,MDT为124.5h,ICPI为0.292,F基因核苷酸和转译氨基酸与传统Lasota株的同源性最高,与Kuwait256株最低。而F基因裂解位点的氨基酸组成与NDV强毒株的特征性结构一致("112R-R-Q-K-R-F117")。结论:(1)该病例为鸭Ⅰ型新城疫弱毒株感染;(2)F基因的裂解位点的特征性结构不完全决定鸽新城疫的毒力。