38株鸭源大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验

本研究通过对山东某大型养殖场的病料采集,分离鉴定了38株鸭大肠杆菌。利用玻片凝集试验和试管凝集试验对分离菌进行了O血清型鉴定,用菌液涂布法对分离菌进行了药敏试验,结果表明,该养殖场存在较为严重的大肠杆菌感染,分离的38株大肠杆菌均有致病性,分属7种血清型,分别是O2、O21、O83、O119、O139、O73和O78,占分离菌株的86.84%;另有5株未能定型。药敏试验结果表明,38株鸭大肠杆菌对21种抗生素均有不同程度的耐药,并以多重耐药为主,耐药性差异较大,最为敏感的抗生素是磷霉素和阿米卡星2种药物。

鸭源大肠杆菌氨基糖苷类耐药基因的检测与传播扩散机制

目的探索鸭源大肠杆菌对氨基糖苷类耐药及耐药传播的分子机制。方法用微量稀释法测定鸭源大肠杆菌对氨基糖苷类药物的耐药表型,用PCR和DNA测序方法检测多种氨基糖苷修饰酶基因和质粒介导的16S甲基化酶基因,通过质粒接合试验分析有关耐药基因和耐药性的质粒接合传递特点,并采用基因克隆方法研究rmtB的基因环境。结果 27株分离菌中,有23株、19株、19株和18株分别对安普霉素、庆大霉素、阿米卡星和新霉素耐药,耐药率分别为85.2%、70.4%、70.4%和66.7%。27株中的13株检测到rmtB基因,6株同时检测到rmtB和aac(3)-IV基因。质粒接合试验获得5株接合子,接合子对安普霉素、庆大霉素、阿米卡星和新霉素均高水平耐药(MIC≥128μg/ml),rmtB基因检测呈阳性反应。结论鸭源大肠杆菌氨基糖苷类药物耐药和交叉耐药十分严重,质粒介导的rmtB基因和质粒接合传递是其耐药及其传播扩散的重要机制。

舒巴坦、利血平、乙二胺四乙酸二钠对鸭源大肠杆菌抗菌药物敏感性的影响

本试验旨在研究β-内酰胺酶抑制剂舒巴坦、外排泵抑制剂利血平及膜通透促进剂乙二胺四乙酸二钠(EDTA)对鸭源大肠杆菌抗菌药物敏感性的影响。采用微量肉汤稀释法测定8株多重耐药鸭源大肠杆菌对头孢噻呋钠、恩诺沙星、阿米卡星、氟苯尼考、多西环素及其与舒巴坦、利血平和EDTA联用的最小抑菌浓度(MIC)。结果表明,舒巴坦能使5株鸭源大肠杆菌对头孢噻呋钠的MIC值下降4倍以上;利血平仅能使3株菌株对头孢噻呋钠的MIC值下降4倍以上;而EDTA能使7、5、3、6、8株菌对以上5种药物的MIC下降4倍以上;舒巴坦+利血平使4株菌株对头孢噻呋钠的MIC下降4倍以上,使5株菌株对氟苯尼考的MIC下降4倍以上;舒巴坦+EDTA使鸭源大肠杆菌对以上5类药物的MIC大幅度下降,分别使8、5、2、8、8株菌MIC下降4倍以上;利血平+EDTA使7株菌株对恩诺沙星MIC下降4倍以上,使所有分离株对其余4种药物的MIC显著下降;舒巴坦+利血平+EDTA和5类药物联用后,所用分离株的MIC下降4倍以上。由此可见,引起鸭源大肠杆菌对以上抗菌药物的耐药原因主要包括细胞膜通透性的下降、药物的主动外排作用和产生β-内酰胺酶的破坏作用,三者相协同提高了鸭源大肠杆菌的耐药水平。

鸭源大肠杆菌的分离鉴定及致病性分析

【目的】了解江苏、江西、安徽地区鸭源大肠杆菌的分布以及致病性情况。【方法】本研究对江苏、江西、安徽地区的病死鸭进行了鸭源大肠杆菌的分离鉴定,运用PCR结合玻片凝集法测定鸭源大肠杆菌分离株的血清型,并进行了18种毒力基因的PCR检测,随后进行雏鸭致病性试验,并对毒力较强和毒力较弱的菌株进行生长曲线以及半数致死量(LD_(50))测定。【结果】本研究共分离鉴定获得鸭源大肠杆菌74株,鉴定为O1、O2、O18、O78血清型的分别有1、2、2和4株,其余均未定型;18种毒力基因鉴定结果表明,ibeB、yijp、OmpA和mat基因检出率分别为97.3%、97.3%、95.95%和90.54%。动物致病性试验结果表明,经10^(7) CFU/只攻毒后,74株分离株均引起雏鸭不同程度发病,但仅有2株对雏鸭致死率≥50%。生长曲线测定结果表明,2株强毒株与2株弱毒株的生长速度无显著差异(P>0.05),2株强毒株的LD_(50)分别为10^(4.75)和10^(7.375) CFU。【结论】本研究分离的74株鸭源大肠杆菌O1、O2、O18和O78型仅占12.16%,毒力基因谱分布广泛,但仅有2株毒力较强,该研究为鸭源大肠杆菌病的预防控制以及研究血清型、毒力基因与致病性之间的相互关系奠定基础。

盐城滨海鸭源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

本研究采集盐城滨海地区临床疑似大肠杆菌病的病死鸭病料,通过分离培养、革兰氏染色镜检、PCR实验,分离鉴定出3株鸭大肠杆菌。对分离菌进行药敏试验发现,3株大肠杆菌对氯霉素、红霉素、青霉素均耐受;对氨苄西林、环丙沙星和复方新诺明为2株耐受,1株敏感;诺氟沙星最为敏感,2株高敏,1株中敏;其次为丁胺卡那和庆大霉素,1株高敏,2株中敏;复方新诺明2株耐药,1株高度敏感。

邹平县鸭源大肠杆菌分离鉴定及耐药性检测

近年来,山东省邹平县养鸭业发展迅速,大肠杆菌病呈明显上升趋势,已成为养殖业主要细菌性疾病之一。2009-2011年从本县规模化鸭场采集临床疑似大肠杆菌病的病死鸭病理组织样品并进行大肠杆菌的分离鉴定和O抗原血清型鉴定。结果共分离到12株鸭源大肠杆菌,有O78、O35、O15和O18四种血清型致病性大肠杆菌,其中O78和O35为山东省邹平县主要流行血清型,分别占分离菌株的58.35%和25%。对分离的12株鸭源大肠杆菌进行了药敏试验,结果显示山东省邹平县鸭源大肠杆菌对17种药物已普遍产生耐药性,其中对青霉素、四环素和利福平三种药物耐药性最强,多数菌株表现为0抑菌环;其次对近年来在养殖业中普遍应用的喹诺酮类药物的耐药性也很强,而对阿米卡星、庆大霉素和呋喃妥因等三种药物普遍敏感。对12株菌株的多重耐药性统计结果显示,83.33%的菌株对9种以上的药物产生耐药性。

一株鸭源大肠杆菌致病性及毒力因子检测

从新疆某鸭场的病鸭中分离到1株大肠杆菌,"O"抗原血清学鉴定为O78,药敏试验结果显示该分离株已产生较高程度的耐药性。对鼠疫菌素受体基因fyuA、铁调节蛋白基因irp2、LEE致病岛转录活化因子ler、紧密粘附素eaeA、Ⅰ型菌毛必须蛋白基因fimC、P型菌毛结构基因papA和血清耐受基因iss进行基因测序分析,结果表明该株细菌存在强毒力基因(high-pathogenicity island,HPI)。动物实验表明,该菌可引起雏鸭发生急性全身败血症;10日龄雏鸭半数致死量为2.0×105CFU/ml,表明该菌具有高致病性。

鸡抗鸭源大肠杆菌卵黄抗体的研制

用鸭源大肠杆菌125号菌株制成的灭活油佐剂苗、蜂胶苗及无佐剂菌苗作为免疫原,免疫经产蛋鸡,定期收集鸡蛋,用氯仿提取卵黄抗体,采用试管凝集法检测抗体效价。结果表明:油佐剂灭活苗的抗体维持时间较长,在免疫后60d还能保持较高水平,其峰值达到1∶24。蜂胶灭活疫苗的抗体产生速度比较快,消失也较快,其峰值达到1∶12,40d后抗体基本上消失。不加佐剂的灭活菌苗抗体产生速度较快,10d达到峰值1∶16,然后呈逐渐下降趋势,免疫40d后波动较小。结果,油佐剂灭活菌苗免疫后产生的抗体效价及持续时间高于无佐剂灭活苗和蜂胶苗的抗体效价。

一株鸭源大肠杆菌的分离、鉴定和耐药性分析

以嘉兴海宁地区鸭场送检的4份病料(脑组织、肝脏、脾脏等)为材料,通过增菌及分离培养获得疑似大肠杆菌1株;进一步通过革兰氏染色镜检及PCR检测,鉴定阳性1株;对分离得到的菌株进行药敏试验,结果显示,分离菌株对庆大霉素、丁胺卡那2种药物高度敏感.

鸭源致病性大肠杆菌O抗原与毒力基因检测及药敏试验

【目的】探究荣昌、大足和隆昌三地鸭大肠杆菌分离株的O抗原、毒力基因及耐药性。【方法】将2014年—2021年鸭病料中分离得到的107株细菌在无菌条件下接种于麦康凯培养基中划线进行培养纯化,通过16S rDNA基因扩增测序和生化试验进行细菌鉴定,采用PCR技术对O抗原和16种毒力基因进行检测,采用Kirby-Bauer纸片扩散法进行药敏试验。【结果】107株分离株鉴定为大肠杆菌;O抗原鉴定试验鉴定出9种O抗原,其中优势抗原为O78(37.00%)、O7(25.00%),O121和O145(均为15.00%),并检测到5株O78+O145和O7+O145融合株;共检测出11种毒力因子,其中强致病性毒力基因有Tsh基因(检出率为25.23%)、fyuA基因(检出率为31.78%)、estB基因(检出率为31.78%)、Vat基因(检出率为2.80%)、iucA基因(检出率为44.56%)。3种毒力基因ompA、yijP和ibeB的携带率最高,分别为100.00%、96.26%和85.98%;药敏试验结果表明分离株对氨基糖苷类药物、米诺环素和多黏菌素最为敏感,对大环内酯类药物和克林霉素耐药,分离株均为多重耐药菌,30.00%的分离株表现为7重耐药。【结论】本研究鉴定到107株鸭源致病性大肠杆菌,其致病性和耐药性较强,毒力基因携带情况和耐药性检测发现大肠杆菌的致病力与其耐药性存在一定关系;O抗原检测发现了5株新型O抗原融合株,优势O抗原不断变化,说明西南地区大肠杆菌遗传结构正发生变化,可能存在新的菌体抗原。本研究结果为中国西南地区鸭大肠杆菌病防控及疫苗制备提供依据。

鸭源大肠杆菌ZYD_2与多杀性巴氏杆菌YB_2原生质体融合菌株的鉴定分析

以新霉素标记的ZYD2(NEOs)和YB2(NEOr)作为亲本菌株,培育具有双亲本菌株免疫原性的融合菌株。在溶菌酶作用下,制备两亲本菌株原生质体,聚乙二醇4000诱导原生质体发生融合,利用NEO标记及亲本菌株培养条件不同筛选阳性融合子。ZYD2和YB2可分别得到95.32%和95.25%的原生质体制备率以及32.19%和33.52%的再生率。在含新霉素的麦康凯平板上传代培养获得5株稳定遗传的融合菌株。5株融合菌株可同时凝集双亲本菌株的鸭抗阳性血清。染色镜检观察融合菌株为革兰氏阴性中等大小杆菌。利用双重PCR检测,2株检测到双亲本菌株部分外膜蛋白A(OmpA)基因和部分外膜蛋白H(OmpH)基因,2株只检测到部分OmpA基因,另1株检测不到任何条带。测序结果表明检测到的部分基因片段与亲本菌株的相关基因片段同源性为100%。微量凝集反应显示,外周血可以检测到双亲本菌株抗体,抗体效价在二次免疫后可以维持较稳定水平。结果表明获得5株具有双亲本菌株免疫原性且可稳定遗传的融合菌株。

多重PCR方法检测鸭源产志贺氏毒素大肠杆菌

为了检测产志贺毒素大肠杆菌(STEC)在鸭源大肠杆菌中的分布情况,本研究建立检测STEC的多重PCR方法,针对STEC特有的毒力基因stx1、stx2、hlyA和eaeA筛选了4对引物,通过对PCR反应条件的优化、特异性和灵敏度的检测,建立检测STEC的多重PCR,并应用该方法调查254株鸭源致病性E.coli和115株外表健康鸭的泄殖腔分离的E.coli中STEC的分布情况。在254株鸭源致病性E.coli中检测出6株STEC,从外表健康鸭的泄殖腔分离的115株E.coli中未检测到STEC。检出的STEC的血清型分别为O36、O60、O77、O78、O158和O7&O92。本实验建立的检测STEC的多重PCR方法特异性好、灵敏度高;对鸭源E.coli的检测结果证实鸭致病性大肠杆菌中存在STEC菌株,分布频率较低,但其血清型具有广泛的宿主源,存在引起人类疾病的可能性。

鸭源致病性大肠杆菌的分离鉴定及辣木叶水提物抑菌效果分析

大肠杆菌病是严重危害养鸭业的一类细菌性疾病,临床上多使用抗生素治疗,但耐药菌株的增多使抗生素的治疗效果大大下降,同时带来食品安全隐患。因此,筛选安全、天然抑菌药物成为研究热点。本试验从疑患大肠杆菌病死鸭无菌采集病料,分离出1株细菌,并对分离的细菌进行形态特征、生化试验、药敏试验、16S rDNA遗传分析,最终判定该分离菌为大肠杆菌。随后,选用本实验室提取的辣木叶水提物(MLHE)进行体外试验验证抑菌活性,利用微量肉汤稀释法检测MLHE最小抑菌浓度(MIC)、分光光度计测定OD;细菌生长曲线以及半固体培养基测定MLHE对分离大肠杆菌丛动能力的影响。结果表明,0.25g/mL的MLHE可显著抑制大肠杆菌的增殖及丛动能力。该研究结果为指导鸭大肠杆菌临床用药及防控提供了理论依据。

48株大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶基因型检测

为了解重庆地区部分鸭场大肠杆菌中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因分布情况及抗生素的应用对鸭场环境菌的影响。本试验采用PCR技术,对48株大肠杆菌(包括20株病料分离株和28株鸭场土壤分离株)的ESBLs基因TEM、SHV、CTX-M进行检测。结果表明,TEM、SHV、CTX-M型基因在病料分离株中的检出率分别为100%、30%、25%,鸭场土壤中的检出率分别为57.1%、21.4%、28.6%。不同来源的菌株均能检测出耐药基因,且部分细菌携带两种以上耐药基因;病料分离株和鸭场土壤分离株中携带的ESBLs基因均以TEM型为主。

广饶地区鸭源致病性大肠杆菌流行病学调查与耐药性分析

鸭源致病性大肠杆菌主要以大肠杆菌肉芽肿,气囊炎以及蜂窝织炎为主要病症,由于大肠杆菌病自身具有极为复杂的抗原性,因此临床中表现多样。以山东省广饶地区作为调查样本,针对当地肉鸭开展了为期一年的大肠杆菌调查,并结合调查结果数据和分析,推论出广饶地区大肠杆菌发病时间和发病特征,同时结合试验策略,对当地鸭源性大肠杆菌的耐药性进行分析。

64株鸭致病性大肠杆菌氨基糖苷类药物耐药表型及aaC2耐药基因的调查

为调查鸭源致病性大肠杆菌氨基糖苷类药物aaC2耐药基因的携带情况,探讨aaC2基因与氨基糖苷类抗生素耐药表型的相关性,对64株鸭源致病性大肠杆菌采用了K-B法,选用氨基糖苷类药物链霉素、新霉素、庆大霉素、阿米卡星、观壮霉素和卡那霉素进行了药敏试验,同时用PCR技术对鸭源致病性大肠杆菌aaC2基因进行检测,并对药敏试验结果和aaC2耐药基因检测结果进行比较分析。结果显示,在6种药物中大肠杆菌对链霉素的耐药率最高为60%,对庆大霉素的耐药率为34.5%,对阿米卡星的耐药率为4.2%;64株鸭源致病性大肠杆菌耐药基因aacC2的检出率为25%,获得的基因片段与预期大小一致,长度为384bp,序列分析表明,3株鸭源致病性大肠杆菌扩增的产物与GenBank中的相应的序列有很高的同源性(达99.7%)。药敏试验耐药性和分子水平检测耐药基因的结果比较发现,aaC2基因对大肠杆菌的链霉素,卡那霉素的耐药性有重大的影响,而对阿米卡星耐药性无影响。