鸭胚肾细胞用于鸭肝炎弱毒增殖的研究

为分析鸭胚肾细胞用于鸭肝炎病毒增殖的可能性,从鸭胚肾细胞的制备、体外培养、鸭肝炎弱毒在鸭胚肾细胞中的增殖等方面入手,初步分析了鸭胚肾细胞体外培养和用于鸭肝炎病毒增殖的可行性。结果表明,鸭胚肾细胞能够体外培养并形成良好的细胞单层,形态多为多边形或梭形;原代鸭胚肾细胞可以用于增殖鸭肝炎弱毒A66株,毒价(ELD50)达10-4.2/0.2 m L。说明鸭胚肾细胞适合用于鸭肝炎病毒的增殖,有望用于鸭肝炎病毒疫苗的生产。

雏鸭人工接种鸭肝炎鸡胚化弱毒株MY后组织结构动态变化的比较研究

对鸭肝炎鸡胚化弱毒株MY接种4日龄雏鸭后的组织变化进行了动态观察比较研究。结果显示:雏鸭接毒12 h肝、肾呈现轻度细胞变性;48 h后组织变性程度减轻,汇管区周围细胞增生;144 h细胞核、浆染色加深,组织修复迹象明显;14 d结构正常。接毒12 h脾脏白髓、法氏囊滤泡中淋巴细胞减少,72 h脾、24 h法氏囊中淋巴细胞有所增多。心脏、肺、脑组织在接毒各期皆有轻度的充血、出血。鸭肝炎鸡胚化弱毒株MY与标准毒导致的多组织变性、坏死相比,其变性轻而可逆;与疫苗HY所致的组织变化相似,但结构恢复时间早。结果表明:鸭肝炎鸡胚化弱毒株MY接种4日龄雏鸭,虽可造成雏鸭肝、肾等实质器官轻微的组织病变,但损伤的组织结构可在短期内修复,并恢复至正常;脾脏、法氏囊中的淋巴细胞在接毒后,也由减少到增多。本研究为鸭肝炎鸡胚化弱毒株MY用作鸭肝炎疫苗株的安全性从病理组织学角度提供了依据。

鸭α-干扰素真核表达质粒的构建及其对DVH弱毒苗免疫鸭细胞免疫调节作用研究

为检测鸭α-干扰素对鸭细胞免疫的调节作用，本文按常规方法构建了鸭α-干扰素真核表达质粒（pcDNA-DuIFN-α），并以50、100、200μg分别肌注28日龄樱桃谷鸭，15d后免疫鸭病毒性肝炎（DVH）弱毒疫苗，设空载体＋DVH弱毒疫苗、生理盐水、DVH弱毒疫苗以及pcDNA—DuIFN-α对照组，采用流式细胞仪（FACS）和淋巴细胞增殖试验（MTT法）分别对免疫鸭外周血的CD3^＋淋巴细胞总数和T淋巴细胞转化能力进行动态检测。结果：①CD3^＋淋巴细胞数量：7～56d实验组极显著（P≤0．01）高于生理盐水和显著高于（P≤0．05）DVH弱毒苗、空载体＋DVH弱毒疫苗和pcDNA-DuIFN—α对照组，14～28d 100μg组显著（P≤0．05）高于50和200μg组；②T淋巴细胞对ConA的反应能力（OD值）：21～56d实验组极显著（P≤0．01）高于生理盐水和显著高于（P≤0．05）DVH弱毒苗、空载体＋DVH弱毒疫苗和pcDNA-DuIFN—α对照组，50和100μg组差异不显著，28～56d均略高于200μg组。研究表明pcDNA—DuIFN—α是一种优秀的鸭细胞免疫的分子增强剂和DVH弱毒疫苗的分子佐剂，肌注100μg／只的效果最佳。

鸭病毒性肝炎活疫苗（CH60株）规模化生产工艺改进试验

在鸭病毒性肝炎活疫苗（CH60株）生产时，用10日龄和11日龄进行病毒增值，同时把病毒稀释倍数由100倍改为5000倍，将鸡胚死亡高峰期、最终死亡率、单胚平均收获单产、病毒含量ELD50进行对比分析，结果表明将病毒进行100倍稀释后，用11日龄鸡胚增值鸭病毒性肝炎目日毒（CH60株）与10日龄鸡胚相比死亡高峰期时间、最终死亡率、病毒含量ELD50、单胚平均收获单产等基本相同；将病毒进行5000倍稀释后，用11日龄鸡胚增值鸭病毒性肝炎弱毒（CH60株）与10日龄鸡胚相比死亡高峰期时间推迟12～24h，最终死亡率基本相同、单胚平均收获单产可提高30％左右、病毒含量ELD50略有上升；采用5000倍稀释病毒，接种l1日龄鸡胚的生产工艺可以提高收获单产，降低生产成本，提高产品效价。