抗鸽IgG单克隆抗体的制备及鉴定

鸽卵黄经硫酸铵盐析、酒精沉淀及凝胶 ( Sephadex G- 1 0 0 )柱层析后 ,得到较纯的鸽Ig G。以其免疫 BAL B/C小鼠 ,取其脾细胞与骨髓瘤细胞 ( SP2 /0 )进行细胞融合 ,经过酶联免疫吸附试验 ( ELISA)筛选 ,得到两株能稳定分泌抗鸽 Ig G的单克隆抗体 (以下称单抗 ) ,分别命名为 1 E5和 4C2。经亚类鉴定 ,该单抗均为 Ig G1亚类。在鸽 Ig G包被的 96孔板上用间接 ELISA方法测定单抗腹水的 ELISA效价 ,结果表明 ,单抗 1 E5和 4C2的 ELISA效价分别为 1∶ 1 60 0和 1∶ 640 0。免疫印迹试验结果表明 ,两株单抗均识别 Ig G重链 (分子量约为 66KD)。将单抗分别与鸡、鸭、鹅、鹌鹑和鸽等禽类血清包被的酶标板作间接 ELISA,结果表明单抗只与鸽血清的蛋白发生特异性反应 ,而不与其它禽类血清的蛋白反应。这说明抗鸽 Ig

鸽毛滴虫感染Dot-ELISA检测方法的建立

为了制备兔抗鸽IgG抗体-HRP,建立斑点酶联免疫吸附试验定性检测鸽毛滴虫抗原的检测方法,将纯化的鸽IgG加入佐剂免疫兔子,获取纯化的兔抗鸽IgG抗体;采用简易过碘酸钠法标记兔抗鸽IgG,获取兔抗鸽IgG抗体-HRP;同时将鸽毛滴虫用超声波粉碎加入佐剂后多次免疫健康鸽获取鸽抗鸽毛滴虫高免血清(一抗);然后在2×106个/mL的鸽毛滴虫抗原量下,用不同浓度的一抗抗体、兔抗鸽IgG抗体-HRP进行试验;并对70个临床样品进行检测。结果显示,在2×106个/mL的鸽毛滴虫抗原量下,一抗与兔抗鸽IgG-HRP最佳工作浓度分别为1∶100和1∶500;70个样品中,48个镜检为阳性的样品用Dot-ELISA检测有44个呈阳性,阳性符合率为91.7%;22个镜检为阴性的样品用Dot-ELISA检测有12个呈阴性,阴性符合率为54.5%;Dot-ELISA检测与镜检结果的总符合率为80%。结果表明,本试验成功地建立了鸽毛滴虫感染的Dot-ELISA检测方法。