北京鸭源鹅出血性多瘤病毒的分子检测

鹅出血性多瘤病毒(Goose hemorrhagic polyomavirus,GHPyV)是鹅出血性肾炎肠炎的致病病原,迄今为止,国际上已从鹅、番鸭和半番鸭中检测到GHPyV。为了解北京鸭是否存在GHPyV的感染,本研究从北京、山东、河北、河南等地的北京鸭种鸭场采集肝脾组织样品68份,并用GHPyV特异性PCR进行了检测。结果显示,从5份肝脾组织样品中检出GHPyV的VP1基因。选一株北京鸭源GHPyV(106株)测定了基因组序列。测序结果显示,北京鸭源GHPyV基因组长度为5 254bp,相对于德国鹅源GHPyV毒株Germany 2001,106株基因组在其编码区共有10个碱基位发生突变,但只有2个碱基位的突变引起氨基酸的置换;此外,106株基因组的非编码区存在2个核苷酸的缺失。对不同水禽来源的GHPyV基因组序列进行比较的结果表明,GHPyV的基因组序列具有高度保守性。由于GHPyV可感染鹅、番鸭、半番鸭和北京鸭,表明该病毒具有较广泛的宿主范围。

樱桃谷鸭源鹅出血性多瘤病毒VP3基因的克隆与序列分析

为明确福建地区是否存在鹅出血性多瘤病毒(goose hemorrhagic polyomavirus,GHPV)感染,本研究对2016年福建省临床送检测19份鸭组织样品进行GHPV检测,结果从1例樱桃谷鸭中检测到GHPV感染阳性(记为GHPV-FJ201601株)。随后根据GenBank中GHPV参考株序列特征,设计针对GHPV的VP3基因特异性引物,利用PCR技术扩增获得GHPV的VP3基因片段。结果显示,GHPV-FJ201601株的VP3基因全长为654bp,编码217个氨基酸。对编码的VP3蛋白分析发现其理论等电点为9.37,带负电荷氨基酸为23个(Asp+Glu),带正电荷氨基酸为28个(Arg+Lys);不稳定指数为38.43,是一个稳定蛋白;脂肪系数64.33,总平均疏水性指数为-0.744;该蛋白无典型的信号肽切割位点;其亚细胞定位类型为核定位;对其进行磷酸化分析发现,该蛋白存在14个氨基酸磷酸化位点。核苷酸同源性分析显示,不同来源GHPV代表株VP3基因相互之间核苷酸同源性均较高,均不低于99.7%。VP3基因遗传进化结果显示,GHPV-FJ201601株和鹅源GHPV分离株(匈牙利14234株与法国Toulouse Goose 2000株)处于同一遗传进化分支,与鸭源分离株(法国Toulouse Muscovy Duck 2008株、法国Toulouse Mule Duck 2008和中国106株)却处于不同的遗传进化分支,但所有GHPV分离株VP3基因遗传进化均较近。本研究首次证实福建地区樱桃谷鸭群中存在GHPV感染,为丰富不同地区与宿主的GHPV分子流行病学数据提供参考。

一种新出现的雏鹅病——鹅出血性坏死性肝炎的研究

鹅出血性坏死性肝炎是由呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属，禽呼肠孤病毒、鹅呼肠孤病毒所致的一种新出现的小鹅疫病。肝、脾、肾、胰等器官坏死灶为本病特征性病变，该病毒能在发育鹅胚等禽胚复制并致死胚胎。

鹅出血性肾炎肠炎的诊治

鹅出血性肾炎肠炎（Hemorrhagic nephritis enteritis of geese，HNEG）又称鹅缓发性疾病．是危害4-10周龄鹅的一种病毒性疾病，以高发病率和高死亡率为特征。临床上主要病变为出血性肠炎、肾炎或出血性肾炎、腹水等。该病的发生和流行对养鹅业产生了重大影响。本文对雏鹅新型病毒性肠炎的病原、流行病学、临床症状、病理变化、诊断、防治等方面的最新进展进行了综述，以期为我国该病的诊断与防治提供科学参考。

鹅出血性肾炎肠炎的流行、诊断与防控

鹅出血性肾炎肠炎（HNEG）也被称为“幼鹅病”或“迟发型小鹅瘟”,根据病原学,其确切名称应该是“鹅多瘤病毒病”,可引起家禽全身性高度致死性的多瘤病毒感染.

鹅出血性坏死性肝炎的病原及病理特征研究

鹅出血性坏死性肝炎是发生于雏鹅的一种急性病毒性传染病，病原为鹅呼肠孤病毒，常发生于1～10周龄的雏鹅和仔鹅，最早发生于约日龄雏鹅，最晚发生于10周龄仔鹅，2～4周龄雏鹅多发。患鹅以肝脾脏出血性坏死为特征性病变，其发病率为20-90％，死亡率差异大，最高可达70％。该病流行趋势日趋严重，且死亡率高，已经给养鹅业造成了严重损失。

鹅出血性多瘤病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立

为了建立一种能快速、灵敏且准确检测鹅出血性多瘤病毒(goose hemorrhagic polyomavirus,GHPV)的诊断方法,将GHPV的VP1基因构建到载体pClone007 Blunt Simple Vector上,将获得的重组质粒作为标准阳性模板,以建立GHPV VP1基因的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性和在临床检测中的应用进行验证。结果显示,所建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的标准曲线呈良好的线性关系,其线性相关系数R^(2)=0.975,其扩增效率E=86.731%,熔解曲线呈现单峰;检测鹅细小病毒、鹅圆环病毒、鹅副黏病毒、鸭坦布苏病毒、鹅星状病毒时呈阴性,具有较好的特异性;最低检出浓度为(1.16×10^(1)copies/μL),比普通PCR方法灵敏100倍;其中组内变异系数在0.10%~1.48%之间,组间变异系数在1.07%~2.24%之间,具有较好的重复性和稳定性;对20份临床组织样品检测结果进行分析发现,与普通PCR检测结果相比阳性率高出20%,其中阳性符合率为100%,总符合率为80%。上述结果表明,本研究建立的检测GHPV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,对GHPV的快速诊断和监测具有重要意义。