鹅骨胶原蛋白钙螯合肽的分离纯化及结构鉴定

利用碱性蛋白酶酶解鹅骨胶原蛋白制备钙螯合肽,通过SephadexG-25凝胶色谱及反向高效液相色谱对钙螯合肽进行分离纯化,并采用氨基酸自动分析仪、液相色谱-串联质谱、紫外吸收光谱(ultro violet spectroscopy,UV)和傅里叶红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FTIR)进行氨基酸组成和结构鉴定。经鉴定鹅骨胶原蛋白钙螯合肽富含Glu (12.67%)和Asp (7.47%),氨基酸序列为DSYVGDEAQSKR和KLLDEGR,分子质量分别为1 353.62 u和829.47 u。经合成验证,DSYVGDEAQSKR和KLLDEGR的钙螯合能力分别为(70.08±2.20) mg/g和(68.18±1.31) mg/g,UV和FTIR结果表明DSYVGDEAQSKR和KLLDEGR与钙离子螯合后,紫外吸收强度降低、酰胺胺Ⅰ带和酰胺Ⅱ带红移和N-H键蓝移,推测多肽氨基酸残基上的羧基和氨基是螯合钙离子的主要位点。

鹅骨胶原蛋白及肽对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及向成骨分化的影响

本实验通过研究鹅骨胶原蛋白、含钙胶原蛋白、胶原肽、含钙胶原肽对大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖及向成骨细胞(Osteoblast,OB)分化的影响,阐述鹅骨胶原蛋白及多肽对骨质疏松的作用机制。采用MTT(噻唑蓝)法测定鹅骨胶原蛋白及多肽对BMSCs增殖的影响;碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)染色、ALP活性测定、茜素红染色和骨钙素(BGP)分泌量测定分析BMSCs成骨分化能力。结果表明,相较于对照组,试验组可促进BMSCs的增殖,第14d ALP染色试验组ALP染色阳性率显著高于对照组(p<0.05),第7 d和第14 d鹅骨胶原蛋白及肽可显著提高ALP的活性表达(p<0.05),第21 d茜素红染色试验组钙结节个数相较于对照组显著增加(p<0.05),骨钙素分泌量试验组显著高于对照组(p<0.05)。由此表明,大分子胶原蛋白、含钙大分子胶原蛋白、小分子胶原多肽、含钙小分子胶原多肽均可促进BMSCs的增殖及向成骨细胞分化,以含钙小分子胶原多肽作用效果最佳。