抗鹅IgG单克隆抗体的研制及其特性研究

为制备抗鹅IgG二抗用于鹅病血清学诊断，以纯化的鹅血清IgG免疫BALB／c小鼠，通过杂交瘤技术获得6株能稳定分泌抗鹅IgG的单克隆抗体（MAb）细胞株，命名为Go-1A6、Go-6A4、Go-3G11、Go-5D1、Go-688以及Go-5G5。抗体效价测定显示，细胞上清的ELISA效价为1：1600—1：4000，腹水ELISA效价为1：51200～1：204800。Westernblot分析发现，Go-5D1和Go-688与鹅IgG轻链反应，而其他4株与鹅IgG重链反应。交叉反应表明，这些MAb除了与鹅以及鸭IgG反应外，与鸡、鹌鹑、羊、牛、猪以及狗IgG不反应。间接免疫荧光试验结果显示Go-3G11和Go-6A4具有良好的反应性。结果表明，研制的MAb能为水禽疫病血清学诊断提供二抗试剂，具有一定的应用价值。

兔抗鹅IgG酶标抗体的制备及初步应用

为了研究兔抗鹅IgG酶标抗体的制备,试验采用水稀释-辛酸-硫酸铵法粗提,透析除盐,DEAEA-50纤维素层析相结合的方法提取鹅卵黄IgG,经核酸蛋白检测仪和SDS-PAGE测定IgG浓度;制备兔抗鹅IgG酶标抗体;利用酶标抗体检测小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因疫苗的免疫效果。结果表明,粗提的IgG浓度为10 mg/mL,抗体纯度可达到94.5%;免疫扩散得出兔抗鹅IgG抗血清效价约1∶32,抗体酶标后效价为1∶3000;酶标抗体可以作为检测疫苗效果一种很好的工具。

鹅卵黄IgG的纯化及兔抗鹅IgG酶标抗体的制备

采用三氯甲烷去脂、无水Na2SO4盐析、DEAE23纤维素层析相结合的方法纯化鹅卵黄IgG,SDS_PAGE检测表明,所得鹅卵黄IgG纯度可达93%;用纯化的IgG免疫家兔,抗血清经双向琼脂扩散,证明兔抗鹅IgG抗血清效价约1∶64,免疫电泳试验检测,证明得到了特异性抗血清,提取兔抗血清的IgG,用辣根过氧化物酶标记,制备了兔抗鹅IgG的酶标抗体,酶标抗体的效价为1∶6400。