鹤蟾片诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的实验研究

目的研究鹤蟾片对A549人肺腺癌细胞凋亡的影响。方法制备大鼠含药血清,MTT法检测鹤蟾片含药血清对A549细胞的生长抑制率。利用PI染色观察和流式细胞术研究该含药血清对A549细胞凋亡的影响。RT-PCR检测含药血清对细胞表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)mRNA表达的调节作用。结果鹤蟾片含药血清明显抑制A549细胞生长,并使该细胞呈凋亡形态学改变。10%、20%含药血清组的细胞凋亡率为20.5%、33.2%,与对照组(6.1%)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。含药血清组的细胞EGFR表达明显低于对照组(P<0.05)。结论鹤蟾片具有诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的作用,分子机制可能与抑制EGFR基因的转录有关。

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定鹤蟾片中贝母素甲和贝母素乙的含量

目的:建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法同时测定鹤蟾片中贝母素甲和贝母素乙的含量。方法:采用 HiQsil C_(18)(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,柱温为25℃,以乙腈-甲醇-二乙胺(60:40:0.05)为流动相,流速为0.8 mL·min^(-1);蒸发光散射检测器检测,漂移管温度为80℃,气体流速为2.0 L·min^(-1)。结果:在选定的色谱条件下,以峰面积的常用对数(Y)对进样量的常用对数(X)进行线性回归,贝母甲素和贝母乙素的回归方程分别为 Y=1.557X+1.666和 Y=1.700X+1.571,线性范围分别为0.29～2.80μg(r=0.9996)和0.34～3.40μg(r=0.9999);加样回收率(n=5)分别为99.2%和99.4%,RSD 分别为2.7%和3.1%。结论:本法简便、准确,重复性好,可用于该制剂的质量控制分析。

鹤蟾片合盖诺、顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的研究

目的 观察鹤蟾片联合盖诺、顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的近期临床效果及其毒性反应。方法 治疗组应用鹤蟾片联合盖诺＋顺铂，对照组单用盖诺＋顺铂。站果治疗组有效率为40％，对照组有效率为32％，但无显著性差异（P〉0．05）。治疗组治疗后患者症状改善情况好于对照组，2组间有显著性差异（P〈O．05）。对照组的Ⅲ～Ⅳ级白细胞减少明显高于治疗组，而倦怠发生率及食欲下降发生率治疗组均明显少于时照组（P均〈0．05）。结论 鹤蟾片联合盖诺、顺铂治疗晚期非小细胞肺癌能改善症状，减轻化疗的毒性反应，提高生存质量。

参芪固本方破壁饮片与传统汤剂联合鹤蟾片治疗ⅢB、Ⅳ期非小细胞肺癌的疗效及安全性研究

目的观察参芪固本方传统汤剂或参芪固本方破壁饮片联合鹤蟾片治疗ⅢB、Ⅳ期非小细胞肺癌的疗效及安全性。方法将受试患者分为试验组(参芪固本方破壁饮片联合鹤蟾片组)和对照组(参芪固本方传统汤剂联合鹤蟾片组),疗程共90天,评测分析患者体力状况评分(Performance Status,PS)、中医症状积分、肝肾功能、骨髓抑制发生率,并随访观察生存期。结果试验组与对照组在治疗期V2(30天±3天)、V3(90天±3天)中医症状积分、体力状况、相关肿瘤标志物等方面差异均没有统计学意义(P>0.05)。治疗前后自身对照比较,传统汤剂组与破壁饮片组均能改善痰湿证积分,破壁饮片组略优,而传统汤剂组能更好地改善阴虚证积分。两组中位生存时间比较,差异没有统计学意义(P>0.05)。在安全性方面,两组均未见明显的肝肾功能损害,均未见骨髓抑制的发生。结论参芪固本方破壁饮片或参芪固本方传统汤剂联合鹤蟾片在晚期肺癌的治疗中具有一定的疗效,且疗效及副作用方面两组均无差异,破壁饮片可作为传统汤剂的替代用药。

鹤蟾片含药血清对人肺腺癌细胞株增殖和凋亡的影响

【目的】探讨中药复方鹤蟾片含药血清对人肺腺癌细胞株(LAC)增殖和凋亡的影响。【方法】制备中药复方鹤蟾片含药血清,按常规进行人肺腺癌LAC细胞培养。加入体积分数为30%浓度的含药血清培养液5 mL(含药血清组),另设相同浓度的无含药血清组(空白血清组)和RPMI-1640培养液组(空白对照组)。于倒置相差显微镜下观察细胞生长状态,荧光显微镜下观察细胞核凋亡的形态学改变,并分别采用DNA含量分析法和TUNEL法进行细胞凋亡的流式细胞仪检测。【结果】LAC细胞经鹤蟾片含药血清处理后发生了凋亡特征改变;流式细胞仪DNA含量分析法分析含药血清组凋亡率为5.6%,空白血清组和空白对照组分别为0.9%和0.1%;细胞周期分析结果显示,经体积分数为30%含药血清作用72 h后,LAC细胞S期和G2-M期细胞数减少,低于空白血清组和空白对照组,含药血清组细胞增殖指数低于其他2组;进一步采用TUNEL法检测细胞凋亡的发生情况,发现含药血清作用72 h后,细胞凋亡发生率为12.3%,空白血清组为5.7%,空白对照组为1.2%。【结论】鹤蟾片含药血清对LAC肿瘤细胞增殖具有一定的抑制作用,其机理可能与抑制LAC细胞DNA的合成和分裂,将细胞周期阻滞于G0-G1期,促进LAC肿瘤细胞的凋亡有关。

鹤蟾片维持治疗中晚期非小细胞肺癌的临床观察

目的观察中药鹤蟾片维持治疗中晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的临床疗效和对无进展生存期的影响。方法选一线化疗后的中晚期非小细胞肺癌患者78例,随机分为治疗组44和对照组34例。治疗组给予鹤蟾片维持治疗,对照组随访观察。统计分析无进展生存期,并观察对生活质量的影响及身体的不良反应。结果入组78例,1例出组,77例可评价疗效,治疗前两组基线资料比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗组和对照组中位无进展生存期分别为5.67月和4.12月,两者差异具有统计学意义(P=0.048)。两组患者生活质量改善比较差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论中药鹤蟾片维持治疗中晚期NSCLC安全有效,可延长患者的无进展生存期,改善患者症状,且不良反应小。

鹤蟾片HPLC指纹图谱及化学模式识别研究

目的:建立鹤蟾片HPLC指纹图谱,并结合化学模式识别法进行质量评价。方法:采用Agilent ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速为1.0 mL/min;检测波长为270 nm;柱温为30℃;进样量为10μL。建立鹤蟾片HPLC指纹图谱,并进行相似度评价,结合化学模式识别法对鹤蟾片进行质量评价。结果:鹤蟾片HPLC指纹图谱共确定46个共有峰,指认出22种成分,并进行色谱峰归属;10批样品相似度均在0.950以上,表明不同厂家的样品质量相对稳定;聚类分析及主成分分析均将样品分为2类;偏最小二乘法判别分析发现16个成分为样品质量差异的标志性成分。结论:该研究建立的方法简便、准确,可对鹤蟾片进行整体性质量评价。

基于网络药理学探讨鹤蟾片治疗非小细胞肺癌的作用机制研究

目的通过网络药理学方法探索鹤蟾片治疗非小细胞肺癌的潜在靶点与作用机制。方法通过中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)以及文献报道检索鹤蟾片的活性成分,导入PubChem数据库获取活性成分的结构,将结构导入SwissTargetPrediction数据库进行靶点预测;通过GeneCards数据库获取非小细胞肺癌的疾病靶点,采用Cytoscape 3.8.2软件构建“鹤蟾片-活性成分-靶点-非小细胞肺癌”网络;通过STRING11.0数据库构建蛋白互作网络图,采用Cytoscape 3.8.2软件对核心靶点进行可视化;利用R软件进行基因本体功能富集分析、京都基因与基因组百科全书通路富集分析。结果收集并筛选出活性成分72个(其中仙鹤草4个,干蟾皮8个,半夏12个,天冬6个,浙贝母6个,猫爪草8个,葶苈子9个,鱼腥草5个,人参14个),潜在靶点772个,非小细胞肺癌靶点1204个,交集基因228个。鹤蟾片治疗非小细胞肺癌主要核心靶点为PIK3CA、PIK3R1、MAPK1、AKT1、SRC等。KEGG富集分析结果显示主要涉及通路为PI3K-AKT信号通路、癌症中的蛋白多糖等。结论本研究初步揭示了鹤蟾片治疗非小细胞肺癌的多成分、多靶点、多通路的作用机制,为后续研究提供了理论依据。

鹤蟾片联合化疗对非小细胞肺癌的疗效观察

目的:针对非小细胞肺癌患者使用鹤蟾片的治疗效果进行观察分析。方法:研究对象为2014年1月份到2016年12月份在我院收治的非小细胞肺癌患者126例,实验设置观察组和对照组,每组患者63例,对照组的患者只采用多西他赛+卡铂,治疗组患者在对照组基础上加之鹤蟾片进行治疗,对比治疗效果。结果:结合观察可知,观察组在本次治疗中治疗有效率明显优于对照组,且观察组在本次治疗中在不良反应方面同样存在有优势,P<0.05具备统计学意义。结论:鹤蟾片对非小细胞肺癌有着明显的疗效,提高了治疗安全性同时,患者在接受治疗后的症状有着明显的改善,并且患者不存在明显不良发应。

鹤蟾片对多发性骨髓瘤患者免疫调节水平的影响

目的观察鹤蟾片辅助化疗对多发性骨髓瘤患者免疫功能的影响。方法 56例多发性骨髓瘤患者随机分为实验组与对照组各28例,两组均予化疗及支持治疗,实验组同时给予鹤蟾片口服。两组均治疗4疗程。流式细胞术检测治疗前后CD4+T细胞,CD4+CD25+Treg/CD4+细胞等调节性T水平。结果实验组治疗后调节性T细胞水平较治疗前降低(P<0.01);治疗前后实验组调节性T细胞水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);CD4+CD25+Treg/CD4+细胞表达水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论鹤蟾片能通过改善调节性T细胞水平,显著改善多发性骨髓瘤患者的免疫调节功能。

UPLC-MS/MS法同时测定鹤蟾片中5种成分的含量

目的建立同时测定鹤蟾片中贝母辛、贝母素甲、贝母素乙、华蟾酥毒基和酯蟾毒配基含量的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法。方法采用液质联用法,应用ACQUITY UPLC BEH C_(18)柱,以乙腈-0.02 mol·L^(-1)乙酸铵水溶液为流动相,梯度洗脱,质谱采用正离子模式,多反应监测扫描。结果贝母辛、贝母素甲、贝母素乙线性范围为0.01~0.10 mg·L^(-1),华蟾酥毒基和酯蟾毒配基线性范围为0.05~0.50 mg·L^(-1),平均回收率分别为90.1%(RSD=3.6%)、102.3%(RSD=2.6%)、94.3%(RSD=3.0%)、90.7%(RSD=3.5%)、96.4%(RSD=2.5%)。结论该法操作简便、快捷、灵敏度高、能准确可靠地测定鹤蟾片中贝母辛、贝母素甲、贝母素乙、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基5种成分的含量,可用于中成药鹤蟾片的质量控制。

鹤蟾片联合DP方案治疗非小细胞肺癌的临床研究

目的探究鹤蟾片联合DP方案治疗非小细胞肺癌的临床疗效。方法选取2015年5月—2017年2月西安市胸科医院收治的非小细胞肺癌患者80例为研究对象,按随机数字表法分为对照组(41例)和治疗组(39例)。对照组第1天静脉滴注多西他赛注射剂,60 mg/m2;第1～3天静脉滴注注射用顺铂,25 mg/m2,21 d为1个周期,治疗2个周期。治疗组在对照组基础上口服鹤蟾片,6片/次,3次/d,直至放化疗结束。观察两组的临床疗效,比较两组的肿瘤标志物、生活质量、T细胞亚群、生存情况、毒副反应。结果治疗后,对照组和治疗组的客观有效率分别为39.02%、61.54%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组血清细胞角蛋白21片段(Cyfra21-1)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)水平均明显下降,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组肿瘤标志物水平明显低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,对照组生理状态(PWB)评分、肺癌附加的关注(LCS)评分、肺癌生存质量评价量表(FACT-L)总分和Karnofsky(KPS)评分明显升高,治疗组PWB评分、功能状态(FWB)评分、情感状态(EWB)评分、LCS评分、FACT-L总分和KPS评分明显升高,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组这些评分明显高于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,对照组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平明显下降,CD8+水平明显升高,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组T细胞亚群水平明显优于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。随访后,对照组和治疗组中位无进展生存期分别为5.3、7.5个月,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,治疗组白细胞计数减少、肾功能损害、肝功能损害、腹泻的发生率明显低于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论鹤蟾片联合DP方案治疗非小细胞肺癌具有较好的临床疗效,能降低肿瘤标志物水平,提高患者免疫力,减轻毒副反应,改善生活质量,具有一定的临床推广应用价值。

益气除痰法延长非小细胞肺癌中位生存期的作用

目的:观察益气化痰法延长Ⅲ、Ⅳ期非小细胞肺癌(NSCLC)生存期的作用。方法:采用前瞻性、多中心、随机、对照的临床流行病学方法,将符合标准的病例按肺郁痰瘀型、脾虚痰湿型、阴虚痰热型及气阴两虚型四型辨证施治,辨病治疗以益气化痰法为主,辩证治疗分别以宣肺除痰、益气除痰、滋阴化痰、益气养阴法为主。用乘积极限(K-M)法分析不同证型的中位生存期及中位疾病进展时间。结果:肺郁痰瘀型、脾虚痰湿型、阴虚痰热型及气阴两虚型肿瘤总缓解率分别为9.1%、23.6%、11.5%、13.2%(P<0.05);瘤体总稳定率分别为69.7%、77.8%、69.2%、78.9%(P>0.05);中位生存期分别为308天、401天、300天和326天(P>0.05);1年累积生存率分别为45.63%、51.53%、41.95%、46.01%(P>0.05)。结论:益气化痰法可使Ⅲ、Ⅳ期 NSCLC 的中位生存期达到9个月,与化疗配合应用可达到12个月,是晚期非小细胞肺癌的一种有效治法。其中,脾虚痰湿型患者中位生存期达到13个月,有可能进一步提高疗效。

挖掘祖国医药宝藏的人——记全国医药系统劳动模范高级工程师张荣

步入80年代,广州中药三厂喜讯频传,1983年该厂产品障眼明片、珍黛散、骨仙片三项同时被国家经委评为优秀新产品金龙奖;前列通片、乳核散结片、莲花片、鹤蟾片、五灵止痛散、胆乐片、和胃片等都分别荣获省、市科委的科技成果奖和经委的优秀新产品奖.从1981-1985年张荣给该厂完成了56个中成药新产品的研究和试制任务。