响应面分析法优化鹰嘴豆多肽的酶法提取工艺

利用2709碱性蛋白酶对鹰嘴豆分离蛋白进行水解制备鹰嘴豆多肽,以多肽得率和水解度为评价指标,采用单因素试验及响应面分析设计法优化鹰嘴豆多肽的最佳酶法提取工艺为:底物浓度4.15%,温度55.98℃,加酶量2013.5U/g,pH 8.7,酶解时间6h。在此条件下水解度和多肽得率分别为16.18%和75.25%。

鹰嘴豆多肽的免疫活性研究

【目的】探究鹰嘴豆多肽对机体免疫功能的调节作用。【方法】用复合酶解方法制备鹰嘴豆多肽,对其分子质量分布及氨基酸组成进行分析。给小鼠腹腔注射环磷酰胺建立免疫功能低下的动物模型,建模成功后将小鼠随机均分为模型组(灌胃生理盐水)、阳性对照组(灌胃匹多莫德25 mg/kg)和鹰嘴豆多肽低、中、高剂量组(分别灌胃鹰嘴豆多肽50,100和200 mg/kg),另取10只健康小鼠作为空白组(灌胃生理盐水)。各组小鼠每日灌胃1次相应物质,连续灌胃21 d后采样,研究鹰嘴豆多肽对小鼠体质量、脾脏和胸腺指数及形态变化、脾淋巴细胞增殖率、血清细胞因子(IFN-γ、IL-6、IL-2)及免疫球蛋白(IgG、IgA和IgM)质量浓度的影响。研究不同质量浓度(50,100,200和400μg/mL)鹰嘴豆多肽对RAW264.7细胞功能的免疫调节作用,以MTT法、中性红法和酶联免疫吸附检测试剂盒来检测细胞增殖率、吞噬活性以及分泌的细胞因子(NO、TNF-α、IL-6、IL-1β)水平。【结果】制得分子质量在1000 u左右、纯度为97.12%的鹰嘴豆多肽,其中富含谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸等氨基酸。与空白组相比,模型组小鼠脾脏和胸腺受损严重,多项检测指标显著降低;而鹰嘴豆多肽各剂量组小鼠的各项检测指标均较模型组小鼠显著增加,且呈剂量效应关系。鹰嘴豆多肽可促进RAW264.7细胞的增殖率和吞噬能力,并提升其产生的NO、IL-6、IL-1β和TNF-α的水平。【结论】鹰嘴豆多肽可以显著改善环磷酰胺导致的小鼠多项免疫相关指标的下降情况,同时可刺激巨噬细胞,增强其吞噬能力,促进其分泌白介素等细胞因子,表明鹰嘴豆多肽具有良好的免疫增强作用。

鹰嘴豆抗氧化多肽与其它抗氧化剂的协同作用

【研究目的】以还原能力和超氧阴离子抑制率为抗氧化指标,确定鹰嘴豆抗氧化多肽与其它抗氧化剂(VE、VC及BHT)的协同抗氧化作用。【方法】以酶解法制备鹰嘴豆抗氧化多肽,用邻苯三酚自氧化法测定鹰嘴豆抗氧化多肽及其它抗氧化剂清除超氧阴离子自由基的协同效应。【结果】VE、VC在低浓度时与鹰嘴豆抗氧化多肽具有协同的还原能力,BHT与鹰嘴豆抗氧化多肽未表现出协同还原能力;VC、VE与鹰嘴豆抗氧化多肽未显示出显著抑制超氧阴离子的协同效应,但BHT与鹰嘴豆抗氧化多肽表现出明显的抑制超氧阴离子的协同效应;且所有的协同作用随添加量和作用时间的增加而增强。【结论】VE和VC对鹰嘴豆抗氧化多肽的还原能力有显著的增效作用,且VC与鹰嘴豆抗氧化多肽的协同作用较VE与之更强;BHT与鹰嘴豆抗氧化多肽表现出明显的抑制超氧阴离子的协同效应。

鹰嘴豆抗氧化肽与其他抗氧化剂的协同效应

分析了鹰嘴豆多肽与其他抗氧化剂(VE、VC、BHT)的协同效应.VE和VC对鹰嘴豆抗氧化多肽的还原能力有显著的增效作用,且VC与鹰嘴豆抗氧化多肽协同作用较VE与之更强.BHT与鹰嘴豆抗氧化多肽未表现出协同作用.研究多肽在DPPH体系中协同效应,鹰嘴豆抗氧化多肽与BHT及VC均未显示协同效应.用邻苯三酚自氧化法测鹰嘴豆抗氧化多肽对超氧阴离子抑制的协同效应,VC及VE与多肽未显示出显著抑制超氧阴离子的协同效应,而鹰嘴豆抗氧化多肽与BHT表现出明显的抑制超氧阴离子的协同效应.