鹰嘴豆芽素A对P38αMAPK抑制活性的研究

目的 探讨鹰嘴豆芽素A对靶酶丝裂原激活蛋白激酶P38α亚型(P38αMAPK)的抑制作用。方法 应用软件Autodock Vina将鹰嘴豆芽素A与P38αMAPK晶体三维结构1KV2的活性位点进行分子对接,而后利用脂多糖(LPS)诱导的小鼠RAW 264.7细胞炎症模型验证鹰嘴豆芽素A对P38αMAPK的抑制活性。结果 鹰嘴豆芽素A可结合于靶酶晶体结构1KV2的活性位点以干扰正常底物的进入,从而对P38αMAPK的生物学功能起到抑制作用;细胞炎症模型实验证明,与LPS模型组比较,阳性对照药地塞米松和鹰嘴豆芽素A单体浓度各剂量(25、50、100μmol/L)干预后可明显下调细胞上清液中一氧化氮和肿瘤坏死因子-α水平(P<0.05)。结论 鹰嘴豆芽素A可作用于P38αMAPK活性位点而发挥抗炎的药理活性。

基于网络药理学和分子对接技术探讨鹰嘴豆芽素A治疗神经胶质瘤的作用机制

目的通过网络药理学、分子对接的方法探究鹰嘴豆芽素A治疗神经胶质瘤的作用机制。方法检索中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP)、TargetNet、Swiss Target Prediction等数据库和分析平台,筛选出鹰嘴豆芽素A对应靶点,利用DisGeNET、GeneCards等数据库获得神经胶质瘤的作用靶点。取药物与疾病的交集靶点,借助STRING数据库进行蛋白-蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI)分析,利用Cytoscape 3.9.1软件构建潜在靶点网络关系图。对交集靶点通过DAVID数据库进行本体论富集分析(gene ontology,GO)和京都基因和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析。通过DockThor数据库对鹰嘴豆芽素A和关键靶点进行分子对接,Pymol软件进行可视化处理。结果共筛选出鹰嘴豆芽素A靶点149个,神经胶质瘤相关靶点5654个,药物与疾病交集靶点97个,核心靶点为表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、雌激素受体(estrogen receptor,ESR1)、热休克蛋白(heat shock protein,HSP)90AA1、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)9、PPARG、PTGS2,靶点参与的功能主要与肿瘤细胞增殖、侵袭、凋亡等过程有关。GO富集分析发现鹰嘴豆芽素A在生物过程、细胞组成、分子功能多方面参与神经胶质瘤的治疗。KEGG通路108条,包括肿瘤、化学致癌作用-受体活性、脂质和动脉粥样硬化、PI3K/Akt等信号通路。分子对接结果显示鹰嘴豆芽素A与关键靶点均有较好的结合活性。结论鹰嘴豆芽素A可能通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡、增强化疗敏感性等发挥治疗神经胶质瘤的作用。

鹰嘴豆芽素A对小鼠T淋巴细胞体外活化增殖和细胞周期的影响

目的:研究黄酮类化合物鹰嘴豆芽素A(biochanin A,bioA)对小鼠T淋巴细胞的活化增殖和周期的影响。方法:运用双色荧光抗体染色技术结合流式细胞术分析bioA对小鼠T淋巴细胞在多克隆刺激剂(ConA)刺激下早期活化抗原CD69表达的影响;运用羧基荧光素乙酰乙酸(carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,CFDA-SE)标记技术结合流式细胞术,分析T淋巴细胞增殖相关指数;用碘化丙锭(propidium iodide,PI)染色分析T淋巴细胞细胞周期变化。结果:终浓度为25、50μmol/L的bioA对ConA刺激下的T淋巴细胞早期活化抗原CD69表达具有明显的抑制作用(P<0.05),50μmol/L抑制达到峰值;CFDA-SE染色法显示,25、50μmol/L bioA对ConA诱导的T淋巴细胞增殖作用具有显著的抑制作用(P<0.05);终浓度为5、25、50μmol/L的bioA能够使ConA刺激的T淋巴细胞滞留于G0/G1期,减少处于S期和G2/M期细胞数。结论:BioA对小鼠T淋巴细胞的活化增殖和周期具有明显的抑制作用。

HPLC测定红车轴草中大豆苷元、染料木素、芒柄花素和鹰嘴豆芽素A的含量

目的:建立测定红车轴草中大豆苷元、染料木素、芒柄花素和鹰嘴豆芽素A含量的高效液相色谱方法。方法:KromasilC18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈0.1H3PO4(40∶60),流速:1.0mL·min-1,检测波长:254nm,柱温:25℃。结果:大豆苷元、染料木素、芒柄花素和鹰嘴豆芽素A的线性范围分别为0.0662～0.6620μg,0.0978～0.9780μg,0.0866～0.8660μg和0.0992～0.9920μg。该方法回收率大豆苷元为98.9(RSD=0.46),染料木素为98.8(RSD=1.21),芒柄花素为98.8(RSD=0.71),鹰嘴豆芽素A为97.5(RSD=1.33)。结论:该法简便、快速、准确。

离子液体微波辅助提取降香檀叶中鹰嘴豆芽素A和染料木素

以降香黄檀可再生资源——叶子为原料,利用离子液体微波辅助提取技术对鹰嘴豆芽素A和染料木素进行提取。通过单因素实验,3因素3水平的BBD(Box-Behnken design)实验,对提取条件进行优化,确定了离子液体微波辅助提取降香檀叶中鹰嘴豆芽素A(biochanin A)和染料木素(genistein)的最佳提取工艺条件:1.00 mol·L^(-1)[C_4MIM]Br,提取温度为56℃,液固比18:1,提取时间为11 min,提取功率300 W。在最佳提取条件下,鹰嘴豆芽素A和染料木素平均提取率分别可达1.598和0.939 mg·g^(-1)。

高效液相色谱法-蒸发光散射检测器和二级管阵列检测器测定红车轴草提取物中鹰嘴豆芽素A和芒柄花素的含量

目的 建立以蒸发光散射检测器(EL SD)和二极管阵列检测器(DAD)测定红车轴草提取物中鹰嘴豆芽素A和芒柄花素的高效液相色谱分析方法。方法 色谱柱:Kromasil C1 8柱(2 5 0 m m×4 .6 mm,5 μm) ;流动相:乙腈-水梯度洗脱;检测波长:2 5 4 nm ;柱温:2 5℃;体积流量:1.0 m L /min;检测器:Agilent 110 0二极管阵列检测器,SEDEX5 5型蒸发光散射检测器。结果 鹰嘴豆芽素A和芒柄花素分别在1.2 75～3.315 μg和0 .96 5～2 .5 0 9μg与峰面积线性关系良好。鹰嘴豆芽素A和芒柄花素在以EL SD检测时的加样回收率分别为99.5 4 %、10 0 .84 % ,RSD分别为2 .0 3%、2 .15 % ,在以DAD检测时的加样回收率分别为10 1.2 6 %、10 1.5 9% ,RSD分别为1.84 %、1.91%。结论 本方法准确、快速。

鹰嘴豆芽素色烯类拼接衍生物的合成及其抗白血病活性

以鹰嘴豆芽素与丙二腈芳基烯烃(2),在催化剂Ca(OH)_(2)催化下,在甲醇回流下发生Michael加成环化反应,获得合成了9个新颖的鹰嘴豆芽素色烯类拼接衍生物3a~3i,产率78%~85%,其结构经^(1)H NMR,^(13)C NMR和HR-MS(ESI-TOF)表征。采用MTT法研究了3a~3i对人白血病细胞(K562)的体外抗肿瘤活性。结果表明:化合物3a~3d对K562具有一定的抑制活性,说明鹰嘴豆芽素色烯类骨架可以作为先导化合物,进行进一步的研究。

鹰嘴豆芽素A和大豆苷元对MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响

目的:分析并比较红车轴草2种主要异黄酮成分鹰嘴豆芽素A和大豆苷元对成骨样细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化的影响。方法:分别采用MTT法、碱性磷酸酶活性测定法、茜素红染色测定矿化结节的方法和ELISA法考察鹰嘴豆芽素A和大豆苷元对MC3T3-E1细胞增殖、分化、矿化以及骨钙素分泌的影响。结果:各浓度鹰嘴豆芽素A和大豆苷元均可促进MC3T3-E1细胞的增殖和分化,且最佳浓度均为1×10^(-7)mol/L;鹰嘴豆芽素A(1×10^(-7)mol/L)处理细胞9、12 d,形成矿化结节数显著高于对照组,大豆苷元(1×10~/(-7)mol/L)处理细胞6、9、12d,形成矿化结节数均显著高于对照组;鹰嘴豆芽素A(1×10^(-7)mol/L)在第6天可显著促进骨钙素的分泌,大豆苷元(1×10^(-7)mol/L)在第3、6、9、12天均可以显著性促进骨钙素的分泌。结论:鹰嘴豆芽素A和大豆苷元均具有促进MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的作用,且大豆苷元促进成骨分化成熟的活性高于鹰嘴豆芽素A,具有开发为抗骨质疏松新药的潜力。

木糖苷三氮唑鹰嘴豆芽素A的合成与结构表征

利用"点击化学"将木糖叠氮化物和炔丙基取代鹰嘴豆芽素A引入Cu催化的1,3-偶极环加成反应体系,合成了一种木糖苷三氮唑鹰嘴豆芽素A衍生物;产物结构经核磁共振谱、红外光谱、质谱和元素分析确认.

正交试验法优选鹰嘴豆种子中鹰嘴豆芽素A的提取工艺

目的:优选鹰嘴豆种子中鹰嘴豆芽素A的提取工艺。方法:采用正交试验法,以鹰嘴豆种子中鹰嘴豆芽素A的含量为指标进行试验。结果:优选出从鹰嘴豆种子中提取鹰嘴豆芽素A的最佳工艺:10倍于生药量的95%乙醇溶液热回流提取两次,每次1.5h。结论:该工艺可提高鹰嘴豆种子中鹰嘴豆芽素A的提取率和纯度,而且方便、安全、无毒、成本低、效率高,可在大规模生产鹰嘴豆芽素A时推广应用。另外,本研究还建立了一种新的快速、准确检测鹰嘴豆种子中鹰嘴豆芽素A的RP-HPLC方法。

正交实验优化鹰嘴豆中鹰嘴豆芽素A的超声提取工艺

目的:研究鹰嘴豆中鹰嘴豆芽素A的超声提取工艺。方法:考察提取溶剂、固液比、药材粒径、超声时间、超声功率等因素对鹰嘴豆芽素A含量的影响,并采用正交试验设计优化提取工艺。结果:在本实验条件内,超声提取的最优条件如下:药材粒径为60目,乙醇浓度为50%,超声功率为400 W,工作/间歇15 s/3s,超声时间为20 min,固液比为1∶25,超声次数为2次。结论:按照优化正交试验确定的最佳工艺条件合理、可靠。

鹰嘴豆芽素A糖苷类衍生物的合成及其结构表征

为了改善鹰嘴豆芽素A代谢稳定性,提高其生物利用度,本文以乙酰溴代糖和鹰嘴豆芽素A为原料,采用相转移催化法在鹰嘴豆芽素A 7位羟基处引入糖苷,合成12个鹰嘴豆芽素A糖苷类衍生物,方法简单,条件温和,产率较高。产物结构通过1H NMR、13C NMR、IR和ESI-MS分析确认,为进一步对其进行生物活性研究奠定了基础。

半乳糖苷三氮唑鹰嘴豆芽素A的合成与抗缺氧活性研究

目的设计合成半乳糖苷三氮唑鹰嘴豆芽素A并研究其抗缺氧活性。方法以半乳糖叠氮化物、炔丙基溴和鹰嘴豆芽素A为原料,利用"Click"化学方法将糖基化三氮唑药效基团引入鹰嘴豆芽素A分子结构中得到一种衍生物——半乳糖苷三氮唑鹰嘴豆芽素A,并通过小鼠常压密闭耐缺氧实验和化学物质中毒实验对其抗缺氧活性进行评价。结果产物结构经1H-NMR、IR、EI-MS和元素分析确认,半乳糖苷三氮唑鹰嘴豆芽素A能够显著延长不同缺氧状态下小鼠的存活时间,且活性优于乙酰唑胺(P<0.05,P<0.01)。结论本研究采取的合成半乳糖苷三氮唑鹰嘴豆芽素A的方法操作简便、条件温和、产率较高,而且该化合物表现出较高的抗缺氧活性。

糖基化三氮唑鹰嘴豆芽素A衍生物的合成与抗缺氧活性研究

以叠氮糖、炔丙基溴和鹰嘴豆芽素A为原料,利用"Click chemistry"将糖基化三氮唑药效基团与鹰嘴豆芽素A巧妙结合,得到4种新的标题化合物,产物结构经1HNMR、13CNMR、IR、EI-MS和元素分析确认。通过小鼠常压密闭耐缺氧模型对其药理活性进行评价,结果表明:4个目标化合物均不同程度地延长小鼠的存活时间,其中半乳糖苷三氮唑鹰嘴豆芽素A和木糖苷三氮唑鹰嘴豆芽素A的活性优于乙酰唑胺。

鹰嘴豆芽素A调控生长激素JAK/STAT信号通路发挥神经保护作用

目的鹰嘴豆芽素A是一种天然植物雌激素,因少有副作用而成为雌激素的理想替代品.本研究观察了鹰嘴豆芽素A对H2O2致原代海马神经元损伤的保护作用.已有研究表明,雌激素与生长激素在细胞水平存在相互作用,本研究还试图证实鹰嘴豆芽素A可与生长激素协同发挥神经保护作用,并揭示其调控生长激素发挥协同作用的可能机制.方法原代培养海马神经元细胞,培养至9d左右,给予不同浓度鹰嘴豆芽素A作用24h,300μmol·L^-1的H2O2作用12h后,CCK-8法观察细胞活性,流式细胞仪测定ROS含量和细胞凋亡率.Westernblot观察Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达.单独或联合给予鹰嘴豆芽素A和生长激素60min,RT-PCR测定SOCS-1、SOCS-2、SOCS-3mRNA表达,Westernblot观察JAK、STAT5、SOCS-2蛋白表达,采用基因沉默技术,干扰SOCS-2,观察药物对JAK/STAT5信号通路的影响.结果鹰嘴豆芽素A能提高H2O2诱导海马神经元的活性,降低H2O2诱导的ROS含量,抑制细胞凋亡和坏死.鹰嘴豆芽素A与生长激素协同发挥神经保护作用,能显著提高JAK、STAT5蛋白表达,降低SOCS-2表达.结论鹰嘴豆芽素与生长激素协同发挥神经保护作用,其机制与降低SOCS-2表达,增强生长激素JAK/STAT5信号通路作用有关.

鹰嘴豆芽素A7-O-β-D-吡喃木糖苷的合成与抗缺氧活性研究

以乙酰溴代木糖和鹰嘴豆芽素A为原料,采用相转移催化法在鹰嘴豆芽素A 7位羟基处引入糖苷,合成得到了鹰嘴豆芽素A 7-O-β-D-吡喃木糖苷,方法简单,条件温和,收率较高。产物结构通过1H NMR、IR和ESI-MS分析确认。通过小鼠常压密闭耐缺氧实验和化学物质中毒实验对其抗缺氧活性进行评价,结果表明:鹰嘴豆芽素A 7-O-β-D-吡喃木糖苷表现出了较高的抗缺氧活性。

鹰嘴豆芽素A免疫佐剂作用试验

为了探讨鹰嘴豆芽素A(BioA)的免疫佐剂效果,分别将BioA以及氢氧化铝胶(Alum)作为佐剂和鸡卵清白蛋白(OVA)抗原联合免疫ICR小鼠,二次免疫后2周采血和取脾脏,观察免疫前后血清OVA诱导特异性抗体及亚类含量变化、细胞因子水平,淋巴细胞在抗原刺激下的体外细胞增殖反应以及外周血CD4^+和CD8^+T细胞表达。结果显示,BioA和抗原混合物免疫小鼠后,未见不良反应;100μg BioA组小鼠血清抗体IgG、IgG1和IgG2a水平显著高于OVA组(P<0.05或P<0.01);100μg BioA免疫小鼠受刀豆蛋白A(ConA)、脂多糖(LPS)和OVA刺激产生的淋巴细胞体外增殖能力显著高于OVA组(P<0.05或P<0.01);100μg BioA组小鼠血清细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ和TNF-α浓度显著高于OVA组(P<0.05);BioA显著提高CD4^+T细胞数量和提高CD4^+/CD8^+值(P<0.01)。表明BioA是一种能同时激活Th1和Th2型免疫反应的免疫佐剂。

花梨木叶中鹰嘴豆芽素A的提取工艺研究

以花梨木的可再生资源—叶子为原料,利用微波辅助酶提取技术进行提取,在单因素试验的基础上对提取条件进行了考察,根据BBD(Box-Behnken design)实验设计原理,采用3因素3水平的响应面分析法,以花梨木叶子中主要异黄酮鹰嘴豆芽素A(biochanin A)为指标,对提取过程进行优化,得到最佳工艺参数为:提取时间15 min,微波辐射功率300 W,提取温度34℃,pH值5.2,酶的加入量3.5 mg.g-1。在最佳提取条件下,鹰嘴豆芽素A的提取率可达1.579 mg.g-1。

鹰嘴豆芽素A基础药理作用研究进展

鹰嘴豆芽素A(Biochanin A,BCA)属于异黄酮类化合物,具有多种药理作用;近年来研究证明其具有抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗氧化和调血脂等广泛的药理活性。现就国内外近年来对BCA的药理作用的研究进展进行综述,为其深入研究和开发提供有益的参考。

鹰嘴豆芽素A通过PPARα/γ抑制脂多糖诱导猪外周血单个核细胞炎性细胞因子的分泌

目的:研究鹰嘴豆芽素A对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导猪外周血单个核细胞分泌炎性细胞因子的影响。方法:用鹰嘴豆芽素A(50,100μmol/L)处理猪外周血单个核细胞,采用ELISA方法检测其对LPS刺激后细胞分泌肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素6(Interleukin-6,IL-6)的影响,并用RT-PCR法检测这些细胞因子mRNA的表达,用Western blot法检测核因子κB(Nuclear factorκB,NF-κB)由细胞浆移位至细胞核内情况以判断NF-κB活性变化;同时分别用过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)α的拮抗剂MK886和PPARγ的拮抗剂GW9662与鹰嘴豆芽素A共同处理猪外周血单个核细胞,观察鹰嘴豆芽素A在PPARα或PPARγ的活性被抑制时对NF-κB活性的影响。结果:鹰嘴豆芽素A能显著降低LPS诱导猪外周血单个核细胞的TNF-α、IL-6的分泌和mRNA的表达;同时鹰嘴豆芽素A显著抑制了LPS诱导猪外周血单个核细胞NF-κB的激活,而此抑制作用均被MK886或GW9662减弱。结论:鹰嘴豆芽素A可通过PPARα和PPARγ抑制LPS诱导猪外周血单个核细胞NF-κB的活化,从而下调LPS诱导的TNF-α、IL-6的生成。