鹿茸药材中14种氨基酸的含量测定

目的建立用于测定鹿茸药材中14种氨基酸的柱前衍生化-高效液相色谱方法。方法采用异硫氰酸苯酯-乙腈对鹿茸药材中的氨基酸进行衍生化,色谱条件为:Venusil ASB C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相A:乙腈-水(体积比为7∶3),流动相B:0.1 mol·L^-1醋酸钠缓冲溶液-乙腈(体积比为93∶7,pH=6.5),柱温:45℃,流速:0.8 mL·min^-1,检测波长:254 nm,进样量:5μL。结果14种氨基酸包括丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、苏氨酸、精氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸在4.052~64.832、20.030~320.482、2.222~35.525、4.683~74.881、8.119~129.924、7.482~119.679、10.985~175.760、2.521~40.336、4.228~67.648、0.702~11.232、1.922~30.752、6.012~96.191、4.523~72.368、7.352~117.632 mg·L^-1质量浓度内与峰面积具良好的线性关系,r≥0.9990,加样回收率在99.1%~101.6%内,实验方法的精密度、重复性和稳定性的RSD均小于2.0%。结论经方法学验证显示,所建立的实验方法适用于鹿茸药材中14种氨基酸的含量测定。

不同规格鹿茸药材的HPLC指纹图谱研究

目的建立了一种鹿茸药材的HPLC指纹图谱检测方法。方法以SinoChrom ODS-BP C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱为固定相,以乙腈-水(体积比4∶1)为流动相A,0.1 mol·L^(-1)醋酸钠-乙腈(体积比97∶3)为流动相B进行梯度洗脱,检测波长为254 nm,流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为36℃,进样量为10μL,以甘氨酸为内参照峰,进行方法学验证。结果建立的鹿茸药材的HPLC指纹图谱具有良好的精密度,且重复性和稳定性均符合要求;10批鹿茸药材的指纹图谱的相似度为0.997~0.999;共标定了20个共有峰,并指认了15种氨基酸。结论建立的鹿茸药材的指纹图谱研究方法可为鹿茸药材的质量控制提供参考。

基于熔解曲线分析技术的鹿茸药材分子鉴别

高分辨率熔解曲线（high resolution melting,HRM）是一种主要用于基因分型和突变扫描的分子诊断技术,在中药真伪鉴定中有着广泛应用前景.文章将高分辨率熔解曲线技术应用于鹿茸真伪鉴别,利用COⅠ序列,在退火温度为60 ℃,45个循环数的条件下,建立正品鹿茸药材熔解曲线模型,并筛选确定其DNA模板浓度、引物浓度、Mg2＋浓度的适宜范围.结果表明,鹿茸药材在模板DNA质量浓度为 10~100 mgL-1、引物浓度0.2 μmolL-1,Mg2＋浓度2.0 mmolL-1的条件下,梅花鹿熔解曲线为双峰,其Tm分别为（81.960.07）,（84.510.03） ℃;马鹿熔解曲线为双峰,其Tm为（82.580.13）,（85.950.05） ℃.该方法可以实现简单、快速、高通量、可视化的鹿茸药材真伪鉴定.

位点特异性PCR方法的建立及对近源种鹿茸药材的鉴别研究

目的:针对正品鹿茸与近源种鹿茸药材饮片鉴别的难点,建立一种简便、快速、准确的近源种鹿茸药材分子鉴别方法。方法:根据鹿科鹿属种动物Cytb全序列比对分析,设计1对能准确鉴别正品鹿茸(包括梅花鹿和马鹿)和其他近源种鹿茸的引物,在此基础上建立鹿茸药材位点特异性PCR鉴别方法,并对影响PCR结果的主要因素退火温度、Taq用量、循环次数以及模板用量和重复性等进行方法学考察和优化。结果:在方法学考察的基础上,在25μL PCR反应体系,退火温度为65℃的条件下,能准确扩增出约323 bp大小的阳性DNA条带,经测序验证结果表明,系正品鹿茸原动物的Cytb基因序列片段,而伪品鹿茸未扩增出条带。结论:所建立的位点特异性PCR方法,能将正品鹿茸与其他近源种鹿茸药材鉴别开来,具有较高的特异性、重复性,可广泛应用于鹿类药材的鉴别。