鹿茸多肽对人骨髓间充质干细胞BMP-2和Runx2表达的影响

目的:探讨鹿茸多肽(VAP)对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)中骨形态发生蛋白2(BMP-2)和骨特异性转录因子2(Runx2)基因和蛋白表达的影响,阐明其对骨合成及hBMSCs向成骨细胞方向分化的作用机制。方法:体外培养的hBMSCs分为对照组和5、10、15、20g·L-1 VAP组,通过检测各组hBMSCs中碱性磷酸酶(ALP)活性,确定体外用药最佳药物浓度;CCK-8法检测对照组和10g·L-1 VAP组hBMSCs增殖情况;荧光定量PCR法与Western blotting法测定对照组和10g·L-1 VAP组hBMSCs中BMP-2和Runx2基因与蛋白的表达。结果:VAP各组细胞中ALP活性均高于对照组,其中以10g·L-1 VAP组细胞中ALP活性最高(P<0.01);CCK-8法,10g·L-1 VAP组hBMSCs增殖率明显高于对照组(P<0.05),VAP诱导培养第9天hBMSCs增殖率最高,且进入平台期,之后hBMSCs的增殖率开始下降;荧光定量PCR和Western blotting检测,10g·L-1 VAP组hBMSCs中BMP-2和Runx2基因及蛋白表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:VAP能够提高hBMSCs中ALP活性,促进hBMSCs增殖分化,上调hBMSCs中BMP-2及其下游Runx2基因和蛋白的表达,这可能是VAP对hBMSCs骨形成及骨代谢影响的分子调控机制之一。

鹿茸多肽对软骨表型化骨髓间充质干细胞凋亡的影响

目的通过观察鹿茸多肽对白细胞介素1β(interleukin1β,IL-1β)诱导软骨表型化骨髓间充质干细胞(marrowmesenchymalstemcells,MSCs)凋亡的影响,以优化软骨组织工程的种子细胞。方法新西兰大白兔2只,抽取其骨髓;经密度梯度离心得到单核细胞,经体外分离、培养获得兔MSCs。用转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGF-β1)和碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)将其诱导分化软骨表型。将软骨表型化MSCs随机分成A组(空白对照组)5%胎牛血清的α-MEM培养液;B组(IL-1β组)5%胎牛血清的α-MEM培养液加入100ngIL-1β;C组(鹿茸多肽组)5%胎牛血清的α-MEM培养液加入10μg/ml鹿茸多肽作用3d后再加入100ngIL-1β;D组(TGF-β1组)5%胎牛血清的α-MEM培养液加入10ng/mlTGF-β1作用3d后再加入100ngIL-1β。分别于培养24、48和72h后取样,采用透射电镜观察细胞形态,AnnexinV法检测细胞凋亡率,RT-PCR技术分析Caspase-3mRNA表达水平,ELISA法检测Caspase-3蛋白酶活性。结果透射电镜观察B组24h后细胞核内染色质开始呈块状凝集,分布于核膜下,核膜不规则;48h后细胞核内染色质凝集加剧;72h后部分细胞内的核碎片凝集成凋亡小体。各时间点C、D组细胞结构改变相对滞后,且数量较少;A组细胞结构几乎无明显改变。各时间点B组MSCs凋亡率、Caspase-3mRNA表达及蛋白酶活性逐渐增高,与A组比较差异有统计学意义(P<0.01);C、D组与B组比较则逐渐下降,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论Caspase-3参与MSCs凋亡,鹿茸多肽通过减少Caspase-3mRNA表达,并抑制其蛋白酶活性,阻止或逆转软骨表型化MSCs凋亡。

IGF1对不同培养代数梅花鹿鹿茸间充质层细胞增殖的影响

通过细胞培养技术,探讨胰岛素样生长因子1(IGF1)对体外培养不同代数的梅花鹿鹿茸间充质层细胞增殖的影响。分离、培养生长90天的梅花鹿鹿茸间充质层细胞,将传代培养第2代、5代、8代细胞经含有不同浓度的IGF1(0,1,3,和10nM)作用,培养24h后用3H-胸腺嘧啶核苷掺入测定法检测蛋白合成放射性含量。不同浓度IGF1处理组的蛋白合成放射性含量的平均值和最高值都是离体培养2代的细胞最高(分别为32146和35973DPM/mg);培养5代的细胞(分别为2781、3206DPM/mg)已明显下降;第8代时(分别为489和736DPM/mg)又进一步下降,并且与对照组无显著的差异。不同培养时期的梅花鹿鹿茸间充质层细胞对IGF1刺激的敏感度不同,取材于生长90天鹿茸的间充质层细胞在离体培养8代后已失去了对IGF1刺激的敏感性。

梅花鹿鹿茸间充质层细胞的体外培养和冷冻保存

为了研究梅花鹿鹿茸间充质层细胞的生物学特性,取梅花鹿鹿茸生长顶端间充质层组织,分离间充质层细胞进行体外培养及冷冻保存。结果表明:在含10%胎牛血清(FBS)的DMEM培养基中,鹿茸间充质层细胞能进行短期体外培养,培养的细胞呈成纤维细胞样,培养7 d可长至汇合。以含5%二甲基亚砜(DMSO)和10%FBS的DMEM为冻存液,经梯度降温后冻存,间充质层细胞复苏后存活率较高。在4℃条件下,间充质层组织在含10%FBS的DMEM中可保存7 d。

聚丙交酯-乙交酯微球搭载鹿茸多肽联合骨髓间充质干细胞对大鼠坐骨神经损伤的修复作用及其机制

目的:观察聚丙交酯-乙交酯(PLGA)微球搭载的鹿茸多肽(VAP)联合骨髓间充质干细胞(BMMSCs)对大鼠坐骨神经损伤的修复作用,探讨其相关作用机制。方法:横断法复制大鼠外周神经损伤模型。60只大鼠随机分为坐骨神经横断对照组(对照组)、VAP微球组(VAP组)、BMMSCs移植组(BMC组)和VAP微球联合BMMSCs移植组(VAP-BMC组),每组15只。造模7d后,对照组大鼠在横断坐骨神经区域注射PBS溶液,VAP组大鼠在相同位置注射含有载药PLGA微球的PBS溶液,BMC组大鼠注射含有BMMSCs的PBS溶液,VAP-BMC组大鼠注射含有载药PLGA微球和BMMSCs的PBS溶液。3个月后采用Basso、Breattie和Bresnahan (BBB)运动评级量表评估各组大鼠的神经功能,HE染色检测各组大鼠坐骨神经组织形态表现,Western blotting法检测各组大鼠坐骨神经组织中二硫键异构酶(PDI)、葡萄糖调节蛋白78 (GRP-78)和半胱胺酸蛋白酶12 (Caspase-12)蛋白表达水平。结果:BBB运动评级量表评估,与对照组比较,VAP组、BMC组和VAP-BMC组大鼠BBB评分升高(P<0.01),以VAP-BMC组大鼠BBB评分升高最明显。HE染色,与对照组比较,VAP组、BMC组和VAP-BMC组大鼠坐骨神经纤维更粗,轴突直径更长(P<0.01)。Western blotting法检测,与对照组比较,VAP组、BMC组和VAP-BMC组大鼠坐骨神经组织中PDI和Caspase-12蛋白表达水平明显降低(P<0.01),VAP-BMC组大鼠坐骨神经组织中GRP-78蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:PLGA微球搭载VAP联合BMMSCs可促进受损坐骨神经的修复,其作用机制可能与抑制内质网应激有关联。

梅花鹿IGF-1干扰载体的构建及其对鹿茸间充质细胞生长调控作用

IGF-1对鹿茸生长有重要调控作用,为进一步研究该基因对鹿茸间充质细胞生长的调控作用,本研究利用RNAi-Ready p SIREN-Retro QZs Green plasmid构建了IGF-1干扰重组载体,转染鹿茸间充质细胞,应用Western-blot、流式细胞术、MTT等方法,研究了IGF-1对细胞增殖、凋亡和细胞周期的调控作用,结果表明:干扰IGF-1表达会抑制鹿茸间充质细胞增殖,诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期。

马鹿茸间充质干细胞软骨分化过程表面标志物的特征性变化

利用阿利新蓝、甲苯胺蓝、茜素红染色和免疫组化法鉴定鹿茸间充质干细胞(MSCs)不同分化阶段蛋白多糖、Ca^(2+)和Ⅱ型胶原蛋白3种软骨细胞表面标志物的分泌量。结果表明,诱导第14~21天细胞蛋白多糖分泌逐渐增加,阿利新蓝和甲苯胺蓝染色结果逐渐达强阳性,至第28天时蛋白多糖胞外积累量开始下降;茜素红染色与免疫组化结果显示,诱导第14~35天,细胞阳性结果均逐渐上升,第35天茜素红染色与免疫组化检测阳性结果显著高于前3个阶段。表明:体外诱导鹿茸MSCs至第14天软骨细胞开始出现,并分泌蛋白多糖和少量Ⅱ型胶原蛋白,第21天软骨细胞大量出现,开始分泌少量Ca^(2+),至第28天时软骨开始向骨分化,蛋白多糖分泌下降,Ca^(2+)在胞外积累,第35天软骨细胞完成终末分化进入钙化期。

鹿茸多肽对兔骨髓间充质干细胞移植修复关节软骨缺损的影响

为探讨经鹿茸多肽诱导的兔自体骨髓间充质干细胞-胶原膜支架(MCMG)复合物修复兔膝关节软骨缺损的效果,抽取兔骨髓液经体外分离、培养获得兔MSCs。选用健康的新西兰大白兔27只,随机分成A、B、C 3组。A组以未经诱导的自体MSCs-MCMG复合物修复兔膝关节软骨缺损;B组以经TGF-β1诱导后的自体MSCs-MCMG复合物修复兔膝关节软骨缺损;C组以经鹿茸多肽诱导后的自体MSCs-MCMG复合物修复兔膝关节软骨缺损。分别于术后2、4、8周取材,行HE、甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色观察各组兔膝关节软骨缺损修复情况。结果显示术后8周,C组修复软骨缺损的效果无论从大体标本观察或是组织学检查都与B组的修复效果相当,而且C组与B组修复效果明显优于A组。说明经鹿茸多肽诱导的兔自体MSCs-MCMG复合物移植可提高兔膝关节软骨缺损的修复质量。

鹿茸精诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞

目的:探讨鹿茸精体外定向诱导SD大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞。方法:通过贴壁法分离大鼠骨髓间充质干细胞,体外扩增培养。鹿茸精定向诱导分化为类神经元样细胞。光镜下观察细胞形态,免疫细胞化学检测神经细胞特异性抗原标志物神经元烯醇酶(NSE)、巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果:大鼠骨髓间充质干细胞可通过贴壁法成功分离并可在体外大量扩增。鹿茸精诱导3小时后大部分骨髓间充质干细胞转变为神经元样细胞,出现胞体和突起,免疫细胞化学染色NSE及Nestin呈阳性,GFAP阴性。结论:鹿茸精可在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞。

Notch和Wnt信号对鹿茸间充质干细胞自我更新与软骨分化的调控机制研究

鹿茸作为一种贵重中药,对人体有滋补作用,尤其在治疗虚弱、神经衰弱等方面效果更佳。鹿茸角是通过生茸干细胞的快速分裂和繁殖实现的,而这种鹿茸干细胞主要分布于鹿茸周围的骨膜组织中,随着鹿茸的逐渐长大,骨膜组织向间充质组织转化,而此时这之间的间充质细胞也仍然具有干细胞的特点,在体内也可以向软骨组织转化。而干细胞自身不仅具有进行复制、更新的能力,同时还具有在一定条件下"变身",即通过分化成为多功能细胞的能力。结果表明:间充质干细胞(MSC)是成体干细胞的一种,它的自我更新受自身内在基因和其所处微环境信号的共同调控。而其中的Notch、Wnt 2条有关发育调控的信号,则在这两种能力的调控过程中具有至关重要的作用。

3D与平面培养条件下马鹿茸间充质干细胞的生长特性比较

细胞体外3D培养技术更有利于细胞功能的表达和发挥,是细胞组织工程的重要研究内容。马鹿鹿茸间充质干细胞(MSCs)是一种新发现的成体干细胞,具有向软骨分化的能力。【目的】为了深入研究鹿茸MSCs细胞特性及软骨分化机制,【方法】利用水凝胶为支撑材料进行3D培养,与细胞平面培养方式对比,分析鹿茸MSCs的生长特性与变化。【结果】结果表明,3D培养组生长呈团状,形态呈梭型。两种培养法细胞生长曲线相似,培养至48 h后细胞进入对数生长期,平台期即培养144 h之后3D培养组细胞密度显著高于平面培养组(p<0.05);对两种方法培养312 h(13 d)的细胞进行PI染色,3D培养组细胞凋亡率(32.67±11.08%)低于平面培养组(37.18±10.21%),但两组间没有显著差异。

塔里木马鹿茸间充质干细胞体外培养及细胞特性的研究

鹿茸间充质干细胞是一类新发现的干细胞。为获得鹿茸间充质干细胞的生物学特征,建立鹿茸间充质干细胞体外培养模式,通过采用改良组织块细胞培养法对生长30 d的塔里木马鹿茸间充质层细胞体外分离培养,观察细胞形态特征,MTT比色法检测细胞生长特点。结果表明：间充质层样品组织块于1 d完全贴壁,贴壁后培养2 d即可观察到组织块边缘迁出少量细胞,贴壁后培养3 d,大量的间充质干细胞从组织块中迁出,并不断增殖,在组织块贴壁后5 d细胞生长融合。传代培养的2~6代细胞在培养到96 h细胞增殖达到高峰。原代培养细胞呈梭形,细胞核呈椭圆形,细胞呈菊花状排列生长;传代细胞形态呈梭形、不规则形,且排列无规则。本研究结果将为鹿茸间充质干细胞的后续研究奠定基础。

鹿茸Ⅰ型胶原对骨髓间充质干细胞增殖的影响及其与Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖表达的关系

目的:观察鹿茸Ⅰ型胶原(VACTⅠ)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及细胞周期的影响,探讨其与Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖表达的关系。方法:选取健康雄性4周龄SD大鼠,差时贴壁法提取BMSCs并传代培养。实验分为空白对照组、转化生长因子β3(TGF-β3)(10μg·L^-1)组和不同浓度(1.25、2.50、5.00、10.00和20.00 g·L^-1)VACTⅠ组,CCK-8法检测各组BMSCs增殖率,ELISA法检测各组细胞上清液中骨形态生成蛋白4(BMP-4)和转录因子Sox9水平,流式细胞术检测各组不同细胞周期BMSCs百分率,RT-PCR法和Western blotting法分别检测各组细胞中Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖mRNA和蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,2.50~20.00 g·L^-1 VACTⅠ组大鼠BMSCs增殖率明显降低(P<0.05或P<0.01);ELISA法,与空白对照组比较,TGF-β3组和不同浓度VACTⅠ组细胞上清液中BMP-4和Sox9水平明显升高(P<0.05或P<0.01);流式细胞术,与空白对照组比较,TGF-β3组和不同浓度VACTⅠ组不同细胞周期BMSCs百分率差异无统计学意义(P>0.05);RT-PCR法,与空白对照组比较,TGF-β3组和不同浓度VACTⅠ组细胞中Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖mRNA表达水平明显升高(P<0.05);Western blotting法,与空白对照组比较,TGF-β3组和不同浓度VACTⅠ组细胞Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:VACTⅠ可促进BMSCs释放BMP-4和Sox9,提高Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖表达水平,抑制BMSCs增殖,是一种潜在的成软骨分化诱导剂。

梅花鹿鹿茸间充质层与前成软骨层细胞的培养及SB-431542对其增殖的影响

分离培养梅花鹿鹿茸间充质层细胞和前成软骨层细胞,通过研究TGF-β的特异性小分子拮抗剂SB-431542对这两种细胞增殖的影响,探讨TGF-β在鹿茸间充质层细胞和前成软骨层细胞增殖与分化中的调节机制。从生长30天的梅花鹿鹿茸中分离间充质层细胞和前成软骨层细胞,进行体外培养,将传代培养第2代的间充质层细胞和前成软骨层细胞分别在含不同浓度TGF-βⅠ型受体特异性抑制剂SB-431542(0、1、3、5、8、10μmol/L)的培养液中培养,48h后用MTT法测定这两种细胞增殖活性的变化,用SPSS软件对其增殖的差异性进行分析。结果显示,体外培养的鹿茸间充质层细胞呈成纤维细胞样,前成软骨层细胞呈纺锤形或梭形,台盼兰染色显示细胞活性均在90%以上。经SB-431542处理的间充质层细胞的增殖活性低于对照组(P<0.05),而前成软骨层细胞增殖活性高于对照组(P<0.05),且3μmol/L和5μmol/L的SB-431542处理的前成软骨层细胞增殖活性明显高于对照组(P<0.01)。试验表明,TGF-β可能在维持鹿茸间充质层细胞的快速增殖和诱导间充质细胞向软骨细胞分化等过程中起重要的作用。

鹿茸血清调控miR-141影响地塞米松对骨髓间充质干细胞的促增殖作用

背景:骨髓间充质干细胞的增殖与成骨分化可延缓激素性股骨头坏死的进程,miR-141是促进细胞增殖的重要调控因子之一,鹿茸作为传统中药,在骨与组织修复及改善健康方面有显著的作用。目的:探讨鹿茸血清是否具有调控miR-141的作用,从而影响骨髓间充质干细胞的增殖,进而延缓或逆转激素性骨坏死的病程。方法:分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,将第3代骨髓间充质干细胞行miRNA-141 mimic和miRNA-141 inhibitor转染,采用RT-PCR检测miR-141的mRNA表达,MTT比色法检测骨髓间充质干细胞的增殖能力。将第3代骨髓间充质干细胞分为3组:正常组、地塞米松组、鹿茸血清组,正常组用α-MEM培养基培养,地塞米松组在α-MEM培养基中加入终浓度在1μmol/L的地塞米松,鹿茸血清组在α-MEM培养基中加入终浓度在1μmol/L的地塞米松和体积分数为15%的鹿茸血清,干预24 h后采用RT-PCR检测miR-141的mRNA表达,干预24,48,72 h采用MTT比色法检测细胞增殖能力。结果与结论:①转染miR-141 mimic质粒后骨髓间充质干细胞中miR-141 mRNA表达升高,细胞增殖能力下降;转染miR-141 inhibitor质粒后骨髓间充质干细胞中miR-141 mRNA表达降低,细胞增殖能力升高;②地塞米松组miR-141的mRNA表达较正常组显著增加(P<0.01),鹿茸血清组miR-141的mRNA表达较地塞米松组显著下调(P<0.01);③地塞米松组骨髓间充质干细胞吸光度值低于正常组(P<0.01),鹿茸血清组吸光度值均高于地塞米松组(P<0.01);④由此可见,鹿茸血清可以抑制地塞米松引起的miR-141高表达,从而促进骨髓间充质干细胞增殖。

鹿茸间充质细胞全长cDNA文库的构建

解剖梅花鹿鹿茸,取得间充质,经过胰酶消化,体外培养鹿茸间充质细胞。利用TRIZOL提取鹿茸间充质细胞总RNA,利用BD SMART技术构建鹿茸间充质细胞全长cDNA文库,测定该文库初级文库滴度为3.0×105 pfu/mL,扩增文库滴度为6.0×108 pfu/mL。插入片段长度大于500 bp。

鹿茸间充质干细胞条件培养基对乳腺癌细胞系4T1的作用

本试验主要探讨了鹿茸间充质干细胞条件培养基对乳腺癌细胞4T1的作用。分离、培养、鉴定了鹿茸间充质干细胞,采用MTT法检测了鹿茸间充质干细胞条件培养基对4T1细胞的增殖活性的影响,并通过Western blot检测了对4T1细胞凋亡的影响。结果显示,鹿茸间充质干细胞条件培养基可抑制4T1细胞的增殖,并呈浓度依赖性,并伴有4T1细胞内Cleaved-caspase 3蛋白表达上调以及Bcl-xl蛋白表达的下调。这一结果表明,鹿茸间充质干细胞条件培养基可抑制4T1细胞增殖,其机制与细胞内凋亡信号通路有关。

小鼠骨髓和鹿茸来源间充质干细胞基本生物学特征比较

为研究塔里木马鹿茸间充质干细胞(MSCs)的生物学特征,本试验对来源于小鼠骨髓和塔里木马鹿茸的2种MSCs进行了体外培养,检测比较了其生长曲线;同时利用光学显微镜和透射电镜对细胞形态特征、结构、细胞器组成和数量进行观察对比。研究发现鹿茸MSCs体外培养呈“S”形生长趋势,增殖速度极显著高于小鼠BMSCs(P<0.01)。鹿茸MSCs形态呈梭形,排列规律,形态均一;小鼠BMSCs形态不规则,呈三角形,多边形;鹿茸MSCs胞体、胞核面积分别为963.053μm^(2)和134.093μm^(2),极显著高于小鼠BMSCs的551.026μm^(2)和79.938μm^(2)(P<0.01);鹿茸MSCs的核质比为0.167,显著低于小鼠BMSCs的0.206(P<0.05);超微结果显示鹿茸MSCs胞体面积较大,细胞器种类简单,线粒体、内质网等细胞器形态具备早期幼稚细胞发育特征。塔里木马鹿茸MSCs增殖能力高于小鼠BMSCs,在开发利用方面具备更广泛的优势。

甾体类激素对梅花鹿鹿茸间充质干细胞骨保护素表达的影响

骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)表达量的上调可通过抑制骨质流失的作用来改善骨骼的动态平衡,在前期OPG的表达检测过程中,OPG在鹿茸间充质干细胞(Antler mesenchymal stem cells,RMCs)成骨过程中呈上升趋势,但在RMCs成骨后较对照诱导组并没有显著差异。由于梅花鹿外周血甾体类激素水平[雌二醇(Estradiol,E_(2))、甲状旁腺素1-34(Parathyroid hormone 1-34,PTH 1-34)]与鹿茸骨化密切相关,尚不清楚RMCs成骨的分子机制,据此推测,RMCs表达的OPG可能受甾体类激素的调控。本研究旨在探索甾体类激素(E_(2)和PTH 1-34)对OPG表达水平的影响。本研究采用CCK-8细胞增殖实验、qRT-PCR、Western Blot、成骨诱导、茜素红染色等方法探索了甾体类激素对RMCs增殖、OPG表达和成骨的影响。结果表明,RMCs在成骨分化过程中,PTH 1-34对RMCs增殖的影响无显著差异,可显著促进OPG蛋白的表达水平抑制破骨,通过上调成骨转录因子SP7和BGN的mRNA表达来促进成骨;E_(2)显著抑制RMCs的增殖,可通过下调OPG蛋白和SP7基因的表达来抑制RMCs成骨。综上,PTH 1-34可上调OPG蛋白的表达,对RMCs成骨具有促进作用;E_(2)可下调OPG蛋白的表达,对RMCs成骨具有抑制作用。

WNT及TGF-β信号通路对鹿茸间充质干细胞软骨分化的影响

目的 TGF-β和Wnt信号通路在控制某些发育事件和特定靶基因的活化中起主要作用。研究探究了二者是否在鹿茸间充质干细胞软骨分化过程中发生相互作用。方法利用TGF-β1诱导鹿茸间充质干细胞软骨分化,并在此过程中使用逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)、蛋白质印迹和宏阵列分析Wnt信号相关基因和软骨细胞分化基因在鹿茸MSCs软骨分化中表达情况。结果TGF-β1刺激上调鹿茸间充质干细胞中共受体LRP5、兼并Wnt、Wnt2、Wnt4、Wnt5a、Wnt7a和Wnt10a基因表达。Western blot结果表明,TGF-β1能显著增加细胞中β-catenin蛋白表达。TGF-β在鹿茸间充质干细胞中上调Aggrecan基因表达。仅当TGF-β1和LiCl共同处理时,软骨细胞的COLⅡ基因才表达。结论 TGF-β刺激鹿茸间充质干细胞软骨细胞分化,同时激活TGF-β和Wnt信号通路,增加细胞中β-catenin蛋白表达,以及TGF-β和Wnt信号之间的协同作用,支持了Wnt信号传导是TGF-β刺激鹿茸间充质干细胞软骨形成的介质之一。