龟鹿二仙膏对糖皮质激素性骨质疏松大鼠骨细胞凋亡影响的实验研究

目的 通过建立糖皮质激素性骨质疏松(glucocorticoid-induced osteoporosis, GIOP)大鼠模型,探讨龟鹿二仙膏是否通过调控凋亡相关蛋白Cyt-c、Caspase-9、Bcl-2、Bax,抑制骨细胞凋亡,发挥防治大鼠GIOP的作用。方法 60只3月龄Wistar大鼠(雌雄各半)按照随机数字表法将大鼠分为5组,每组12只。分别为:空白组(CON)、模型组(DEX)、龟鹿二仙膏高剂量组(HD)、龟鹿二仙膏中剂量组(MD)、龟鹿二仙膏低剂量组(LD),除CON组外,其余各组采用地塞米松肌肉注射(2.5 mg/kg, 2次/周)复制GIOP大鼠模型,正常组给予等量生理盐水注射,连续注射9周。在建立GIOP模型的同时,开始灌胃给药,连续灌胃9周。灌胃结束后,各组大鼠腹腔麻醉,腹主动脉采血处死,双能X线检测腰椎骨密度(BMD);HE染色观察腰椎骨小梁形态;ELISA法测定血清骨碱性磷酸酶(BALP)含量;蛋白质印迹法(Western blot)检测Cyt-c、Caspase-9、Bcl-2和Bax等4个目标蛋白表达情况;Tunel法检测腰椎骨细胞凋亡情况,实验结果进行统计学分析。结果 9周后,DEX组大鼠BMD、骨微结构状况、血清BALP水平均显著降低(P<0.05),GLEXG各组上述指标均有所增加(P<0.05)。DEX组Caspase-9、Bax、Cyt-c蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达下降(P<0.05),而GLEXG组Caspase-9、Bax、Cyt-c表达蛋白下降,Bcl-2蛋白表达增加(P<0.05)。DEX组TUNEL染色显示腰椎骨细胞凋亡数量增加(P<0.05),而GLEXG组较DEX组相比骨细胞凋亡数量有所减少(P<0.05)。结论 龟鹿二仙膏可以提高GIOP大鼠腰椎BMD,改善骨小梁结构,增加血清BALP含量,减少地塞米松引起的骨细胞凋亡数量,从而防治GIOP,其作用机制可能与提高抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,抑制促凋亡蛋白Cyt-c、Caspase-9、Bax表达相关。