疏肝补肾毓麟汤通过Keap1/Nrf2/GPX4通路抑制睾丸细胞铁死亡改善肝郁肾虚型少弱精子症小鼠的精子质量

目的探讨疏肝补肾毓麟汤改善肝郁肾虚型少弱精子症小鼠生精功能和精子质量的作用及其可能机制。方法60只雄性KM小鼠,随机分为空白组、模型组、疏肝补肾毓麟汤高、中、低剂量组和司他丁-1(Ferrostatin-1,Fer-1)组(Fer-1是铁死亡抑制剂)。除空白组外,其余组以1.25 g·kg^(-1)腺嘌呤灌胃(Intragastrical administration,ig.)+慢性束缚刺激构建肝郁肾虚型少弱精子症小鼠模型。给予相应药物干预后:精密天平称取小鼠体质量、睾丸质量、附睾质量计算睾丸指数、附睾指数;苏木素-伊红(Hematoxylin-eosin staining,HE)染色观察睾丸组织病理变化并对睾丸生精功能进行评分;全自动精子分析仪检测精子密度和活动率;苯胺蓝染色法观察精子成熟度;布鲁斯蓝染色法观察睾丸组织铁沉积;免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)检测睾丸组织谷胱甘肽过氧化物酶4(Glutathione peroxidase 4,GPX4)、溶质载体家族7成员11(Recombinant Solute Carrier Family 7 Member 11,SLC7A11)蛋白表达;生化法检测睾丸组织超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量;蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)检测睾丸组织Kelch-样ECH相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein-1,Keap1)、核因子E2相关因子2(Nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、GPX4、SLC7A11蛋白表达。结果与空白组比较,模型组小鼠睾丸指数、附睾指数、睾丸生精功能、精子密度及活动率、精子成熟度均显著下降(P<0.05,P<0.01);经疏肝补肾毓麟汤及Fer-1干预后,上述指标均有显著改善(P<0.05,P<0.01),且睾丸组织铁沉积显著降低,Keap1表达显著降低,Nrf2、SLC7A11、GPX4表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论疏肝补肾毓麟汤能明显改善肝郁肾虚型少弱精子症,其机制可能与调控Keap1/Nrf2/GPX4信号通路抑制睾丸细胞铁死亡有关。

疏肝补肾毓麟汤通过PINK1/Parkin通路调控自噬流提高精子活力的研究

目的 明确疏肝补肾毓麟汤畅通自噬流,通过PTEN诱导假定激酶1(PTEN-induced putative kinase 1,PINK1)/帕金蛋白(Parkin)通路,调节线粒体功能,提高精子活力的作用机制。方法 通过随机数字表法将SD大鼠分为正常组、模型组、疏肝补肾毓麟汤高剂量组、疏肝补肾毓麟汤低剂量组、五子衍宗丸对照组。采用腺嘌呤(0.05 g·kg^(-1))灌胃14 d,复制少弱精症大鼠模型。正常组与模型组给予等容0.9%氯化钠溶液,疏肝补肾毓麟汤高、低剂量组给药32.4 g/(kg·d)、8.1 g/(kg·d),五子衍宗丸对照组给药2.6 g/(kg·d)。全自动精子分析仪检测精子活力,透射电镜观察睾丸组织中线粒体自噬的超微结构变化、JC-1线粒体膜电位检测试剂盒与流式细胞仪检测线粒体膜电位水平变化、免疫荧光标记线粒体外膜易位酶20(Translocase of the outer membrane ofmitochondrion 20,TOMM20)与微管相关蛋白1轻链3II(Microtubule-associated protein 1 light chain 3II,LC3II)的共定位、PCR与Western Blot检测睾丸组织PINK1、Parkin、选择性自噬接头蛋白62(Selective autophagy adaptor protein 62,P62)、微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3II/I)的表达。结果 与正常组相比,模型组的精子活动力下降(P<0.05),线粒体膜电位比例下降(P<0.05),线粒体超微结构出现核周聚集,嵴受损或丢失,除了碎裂外,还有暗基质,以及外膜不规则,并且受损的线粒体与包括线粒体吞噬体在内的线粒体空泡相关,免疫双染中发现LC3II的存在量明显增多,LC3II与TOMM20的双重标记也增加,自噬相关指标PINK1、Parkin、LC3II/I、P62的基因与蛋白表达增加(P<0.05)。与模型组相比,疏肝补肾毓麟汤高剂量组、疏肝补肾毓麟汤低剂量组、对照组的精子活动力升高(P<0.05),线粒体膜电位比例增加(P<0.05),超微结构下正常形态的线粒体比例明显增多,且线粒体溶酶体的数量也减少,免疫双染中发现LC3II的存在量明显减少,LC3II与TOMM20的双重标记减少,自噬相关指标PINK1、Parkin、LC3II/I、P62的基因与蛋白表达减少(P<0.05)。与对照组相比,高剂量组的线粒体膜电位比例增加(P<0.05);疏肝补肾毓麟汤高剂量组、疏肝补肾毓麟汤低剂量组超微结构下正常形态的线粒体比例明显增多,且线粒体溶酶体的数量也减少,免疫双染中发现LC3II的存在量明显减少,LC3II与TOMM20的双重标记减少,自噬相关指标PINK1、Parkin、LC3II/I、P62的基因与蛋白表达减少(P<0.05)。结论 疏肝补肾毓麟汤能改善精子活力低下症模型大鼠的精子活动力,可能是通过提高模型大鼠的线粒体膜电位水平,保护线粒体功能,下调PINK1、Parkin、LC3 II/I、P62的表达,并畅通自噬流,减轻线粒体的过度自噬来发挥作用。

疏肝补肾毓麟汤治疗肝郁肾虚型弱精症引起男性不育的临床观察

目的观察疏肝补肾毓麟汤治疗弱精症引起的男性不育的临床疗效。方法对临床上符合肝郁肾虚型弱精症男性不育诊断的80例男性患者随机分为两组,其中治疗组40例给予疏肝补肾毓麟汤治疗,对照组40例给予麒麟丸治疗,两组均治疗3个月为1个疗程。治疗前后观察两组精液量、精子浓度、精子活力(a级、a^+b级)的变化判断疗效。结果对照组与治疗组治疗后的临床总有效率分别为55%、80%,治疗组的总有效率大于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。对照组治疗前后精液量及精子浓度无差异(P>0.05),精子活力有明显改善(P<0.01);治疗组治疗前后精液量及精子浓度无差异(P>0.05),精子浓度和精子活力有明显改善(P<0.01)。治疗后两组精液量及精子浓度无差异(P>0.05),治疗组对精子活力的改善优于对照组(P<0.01)。两组在治疗过程中仅对照组患者诉有大便变黑变稀,余无不良反应。结论疏肝补肾毓麟汤治疗弱精症引起的男性不育疗效显著,临床值得推广。

补肾毓麟汤对肾虚性生殖功能障碍大鼠生殖激素影响的实验研究

目的观察补肾毓麟汤对模型大鼠血清生殖激素水平的影响。方法用雷公藤多苷片造成雌、雄性生殖功能障碍大鼠模型,观察补肾毓麟汤和克罗米芬对雌、雄性大鼠血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、睾酮(T)的含量的影响。结果雌性模型大鼠血清FSH、LH、E2含量与正常组比较无显著性差异,而血清T含量高于正常组(P<0.05);补肾毓麟汤、克罗米芬均能降低血清T含量。雄性模型大鼠血清FSH含量与正常组比较无显著性差异,LH、E2含量高于正常(P<0.05,P<0.01),T含量低于正常组(P<0.01);补肾毓麟汤能降低血清LH、E2含量,升高血清T含量;克罗米芬能降低血清LH含量,但对E2、T含量无明显影响。结论雌、雄性模型大鼠血清生殖激素水平有不同程度改变,补肾毓麟汤能调整紊乱的生殖激素水平,疗效优于克罗米芬。

补肾毓麟汤对肾虚性生殖功能障碍大鼠生育力影响的实验研究

目的观察补肾毓麟汤对肾虚性生殖功能障碍大鼠生育力的影响。方法用雷公藤多苷造成雌、雄性生殖功能障碍大鼠模型,观察补肾毓麟汤及克罗米芬对雌性模型大鼠动情周期变化,卵巢、子宫重量;雄性模型大鼠睾丸、附睾重量,精子密度与活率。结果补肾毓麟汤使雌性模型大鼠动情周期正常大鼠数量增加,子宫重量明显升高;使雄性模型大鼠睾丸、附睾重量、精子密度与活率明显升高,与模型组相比有显著性差异(P<0.01)。结论本实验成功地复制了雌、雄性大鼠生殖功能障碍模型,补肾毓麟汤能改善雌、雄性模型大鼠生育力,疗效优于克罗米芬。

补肾毓麟汤对肾虚性生殖功能障碍大鼠血清EGF及生殖器官EGFR表达影响的实验研究

目的:观察补肾毓麟汤对模型大鼠血清EGF含量和生殖器官组织EGFR表达的影响。方法:用雷公藤多苷片造成雌、雄性生殖功能障碍大鼠模型,分别检测模型组、补肾毓麟汤组和克罗米芬组以及正常组雌性大鼠血清EGF含量、卵巢组织EGFR表达,雄性大鼠血清EGF含量、睾丸组织EGFR表达。结果:模型组雌性大鼠血清EGF含量高于正常组(P<0.05),卵巢组织EGFR阳性表达上升;补肾毓麟汤组血清EGF含量较模型组下降(P<0.05),卵巢组织EGFR阳性表达下降;克罗米芬组血清EGF含量仍高于正常组,卵巢组织EGFR阳性表达下降。模型组雄性大鼠血清EGF含量明显低于正常组(P<0.01),睾丸组织EGFR阳性表达下降;补肾毓麟汤组血清EGF含量较模型组显著升高(P<0.01),克罗米芬组血清EGF含量高于模型组(P<0.05);补肾毓麟汤组和克罗米芬组睾丸组织EG-FR阳性表达上升。结论:雌、雄性模型大鼠血清EGF含量紊乱,生殖器官组织EGFR表达异常;补肾毓麟汤能使模型大鼠血清EGF水平恢复正常,能调整模型大鼠生殖器官组织EGFR表达,疗效优于克罗米芬。

补肾培元毓麟汤治疗子宫内膜损伤继发不孕症临床观察

目的探讨补肾培元毓麟汤治疗子宫内膜损伤继发不孕症的临床效果。方法选择南昌市洪都中医院2017年5月—2019年4月治疗的68例子宫内膜损伤继发不孕症患者作为研究对象,根据不同的治疗方法将其分为2组,各34例。接受常规治疗的患者为参照组,接受补肾培元毓麟汤治疗的患者作为研究组。结果研究组患者总有效率94.12%(32/34)高于参照组73.53%(25/34),差异具有统计学意义(P<0.05);研究组20周分娩通过率高于参照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。2组治疗后子宫内膜厚度值相比于治疗前高(P<0.05),2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论对子宫内膜损伤合并不孕症患者实施补肾培元毓麟汤治疗可有效改善患者子宫内分泌环境,刺激内膜增生,从而为妊娠提供良好条件,提高妊娠通过率。

田淑霄教授自拟补肾毓麟汤治疗肾虚型不孕症

自拟补肾毓麟汤是田淑霄教授从事中医妇科治疗的多年经验用方,已在临床治疗肾虚型不孕症方面取得良好疗效。补肾毓麟汤是田淑霄教授自拟针对肾阳虚和肾阴虚两种不孕证型的共用方,其关键在于溯本求源,补肾同调肝脾。临床治疗时,应辨证分型论治,通过对方中药物、药量进行加减化裁,使得肾阴肾阳同补。通过对田淑霄教授自拟补肾毓麟汤治疗不孕症的理法方药进行综合分析,并附医案验证,为临床治疗不孕症提供新的思路和方法。

疏肝补肾毓麟汤联合维生素E软胶囊治疗肝郁肾虚型弱精子症不育症45例多中心随机对照试验

目的观察疏肝补肾毓麟汤治疗肝郁肾虚型弱精子症不育症的临床疗效及安全性。方法采取多中心、随机、对照临床研究设计,在华中地区三所医院招募肝郁肾虚型弱精子症不育症患者95例,按照随机数字表法将患者分为治疗组47例和对照组48例。对照组给予维生素E软胶囊(每日2次,每次100 mg)口服,治疗组在对照组的基础上给予疏肝补肾毓麟汤(每日1剂,早晚饭后30 min,每次约200 ml)口服,两组治疗疗程均为12周。治疗结束后,比较两组患者治疗前后精子浓度、前向运动精子百分率(PR)、总精子活动率[PR+非前向运动精子百分率(NP)]并判断临床疗效,比较治疗前后中医证候评分(包括6个单项症状评分及中医证候总积分)及抑郁-焦虑-压力量化评分表(DASS-21)评分(包括抑郁、焦虑、压力评分)。随访6个月比较两组患者配偶妊娠情况。记录两组患者试验期间不良事件发生情况及生命体征判定安全性。结果治疗组脱落2例,对照组脱落3例,最终两组各45例进入统计分析。两组临床疗效比较,治疗组总有效率86.67%(39/45),对照组为73.74%(33/45),治疗组高于对照组(P<0.05)。两组治疗后PR、PR+NP均较本组治疗前升高,且治疗后治疗组PR、PR+NP高于对照组(P<0.05)。治疗后治疗组腰膝酸软,情志不畅,精冷滑泄,胸胁、少腹胀痛,善太息评分及中医证候总积分均较治疗前降低(P<0.05);治疗后治疗组腰膝酸软,情志不畅,胸胁、少腹胀痛,善太息评分及中医证候总积分均低于对照组(P<0.05)。治疗后治疗组DASS-21评分中抑郁、焦虑、压力评分均较治疗前降低,且治疗后治疗组抑郁评分较对照组降低(P<0.05)。经6个月的随访,治疗组5例和对照组3例患者配偶妊娠,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗过程中两组患者均未发生不良事件,生命体征平稳。结论疏肝补肾毓麟汤可明显提高肝郁肾虚型弱精子症患者总精子活动率,有效改善临床症状及焦虑抑郁情绪,且安全性好。

鹿鞭炮制前后化学成分的研究

用50%乙醇浸出物、氯仿浸出物、总氮、总灰分,18种氨基酸、20种无机元素和2种激素作指标,对鹿鞭炮制前后作了成分分析。鹿鞭与其炮制品的多数成分无明显差片。炮制后能达到去腥、便于粉碎和浸出的目的。

疏肝补肾毓麟汤调节VDAC2基因甲基化影响弱精症大鼠精子线粒体功能改善精子质量

目的:明确疏肝补肾毓麟汤抑制电压依赖性阴离子通道2(VDAC2)基因甲基化,通过环磷酸腺苷/蛋白激酶A(cAMP/PKA)通路,调节线粒体功能,提高精子活力的作用机制。方法:雄性SD大鼠40只随机分成空白组、模型组、疏肝补肾毓麟汤高、低剂量组及左卡尼汀组,每组8只。采用腺嘌呤(0.05 g·kg;)灌胃14 d,复制少弱精症大鼠模型;疏肝补肾毓麟汤组给予疏肝补肾毓麟汤高、低剂量(32.4,8.1 g·kg;)灌胃;左卡尼汀组予以左卡尼汀(0.27 g·kg;)灌胃。全自动精子分析仪检测精子活力;苏木素-伊红(HE)染色观察睾丸组织病理形态学变化;流式细胞法检测精子线粒体膜电位差;免疫荧光法检测睾丸VDAC2的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测睾丸组织VDAC2 mRNA表达;亚硫酸氢盐测序法检测睾丸组织VDAC2基因甲基化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测睾丸组织cAMP表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测睾丸组织PKA蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组精子密度及活动率均显著降低(P<0.01),线粒体膜电位显著增高(P<0.01),睾丸组织VDAC2的mRNA及蛋白,PKA蛋白,cAMP含量均显著降低(P<0.01),VDAC2甲基化程度显著增高(P<0.01);与模型组比较,左卡尼汀组、疏肝补肾毓麟汤高、低剂量组精子密度及活动率、线粒体膜电位均显著升高(P<0.01),睾丸组织VDAC2的mRNA及蛋白,PKA蛋白,cAMP含量均显著升高(P<0.01),VDAC2甲基化程度显著降低(P<0.01);与左卡尼汀组比较,疏肝补肾毓麟汤低剂量组精子密度及活动率、线粒体膜电位均显著降低(P<0.01),睾丸组织VDAC2的mRNA及蛋白,PKA蛋白,cAMP含量表达均显著降低(P<0.01),VDAC2甲基化程度显著升高(P<0.01)。结论:疏肝补肾毓麟汤可能通过抑制VDAC2基因甲基化,增加VDAC2表达,调节cAMP/PKA通路,改变线粒体膜电位增强精子活力。

田淑霄治疗不孕症经验掬萃

田淑霄教授为第三、第四、第五批全国老中医药专家学术经验继承工作指导老师,享受国务院特殊津贴。田老临证50余年,擅长治疗妇科病,对不孕症研究颇深。本文整理了田老治疗不孕症的证治思辨规律及自拟方补肾毓麟汤,总结如下。田老临证尤重脾肾。《素问·上古天真论》曰：＂女子七岁……七七任脉虚,太冲脉衰少,天癸竭,地道不通,故形坏而无子也。＂

精索静脉曲张性不育的病机与治则探讨

根据中医基本理论及临床实践经验,提出了肾虚肝实、虚实夹杂是精索静脉曲张性不育的基本病机的学术观点,进而阐述了肾虚肝实导致精索静脉曲张性不育的机理,介绍了治疗精索静脉曲张性不育的原则和基本经验。

田淑霄治疗不孕症经验

介绍田淑霄教授治疗不孕症的学术经验。田教授认为肾虚是不孕症的主要病因病机,治疗不孕症恒以补肾为第一要法。受张景岳毓麟珠思想启发,创补肾毓麟汤运用于临床,以补肾助孕为核心,益气养血并重。从先天为本、后天为用,阴阳同补、气血同调,乙癸同源、精血兼顾,血肉填精、以资化源等4个方面论述了补肾毓麟汤所蕴含的学术思想。