麦胚凝集素的分离与纯制

麦胚凝集素的分离与纯制王者鹏，陈淑凤，郑白玉，荣先国（滨州医学院化学教研室，滨州２５６６０３）麦胚凝集素（ＷｈｅａｔＧｅｒｍＡｇｇｌｕｔｉｎｉｎ，ＷＧＡ）是一种具有抗癌、抗微生物、凝血等多种生物效应的植物凝集素，是一种很有希望的天然抗癌药［１，２］。...

同工麦胚凝集素Ⅱ对乳腺癌细胞的增殖抑制作用

通过增殖抑制试验、细胞形态观察和细胞周期测定,研究了同工麦胚凝集素II(WGAII)对于体外培养的MCF-7和SHZ两种乳腺癌细胞的增殖抑制作用。结果表明最大抑制率均出现于加药后72h,其中SHZ尤为敏感。WGAII对SHZ细胞的LD50为10μg/ml。WGAII作用使细胞皱缩或拉长,部分细胞簇集成团,有些细胞脱壁,细胞表面反光性变差。细胞膜皱缩、外突或粘连,有的小泡破裂,或脱落形成凋亡小体。WGAII将SHZ细胞阻断在G1/S期,干扰了肿瘤细胞的正常增殖活动。

麦胚凝集素的分离纯化和鉴定

目的研究用鸡卵黏蛋白为配基亲和色谱法分离纯化麦胚凝集素,并对纯化的麦胚凝集素进行性质分析。方法先制备鸡卵黏蛋白的亲和吸附剂,然后用其纯化麦胚凝集素。结果此亲和色谱方法使纯化后的麦胚凝集素比其粗提液纯度提高约10 0 0倍,相对分子质量为2 0 4 2 0 ,pI为5 .10。

麦胚凝集素促进对虾免疫功能的初步研究

利用药浴法、注射法及药饵法研究了麦胚凝集素(WGA)促进对虾抗病力的效果。经肌肉注射法感染实验证明三种给药方法均可提高对虾的存活率,其中以药饵法(20mg/kg含量、喂养28d)效果较好,对虾存活率提高17％。表明利用药物促进对虾免疫系统功能,提高对虾抗病能力是一条可行的途径。

麦胚凝集素修饰的EGCG-明胶-壳聚糖纳米粒的制备、表征及体外抗肿瘤活性研究

目的制备麦胚凝集素(WGA)修饰的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)-明胶(Gel)-壳聚糖(Cs)纳米粒,研究其对结肠癌HT-29细胞的作用。方法以明胶及壳聚糖为载体辅料,采用静电自组装的方法制备EGCG-Gel-Cs纳米粒,以包封率为指标,通过Box-Behnken设计-效应面法(BBD-RSM)优化纳米粒的制备处方及工艺,再将经戊二醛活化的WGA修饰到纳米粒表面。采用差示扫描量热分析药物在纳米粒中的存在状态,采用细胞毒性及细胞凋亡实验,比较研究纳米粒与原料药的体外抗肿瘤活性。结果 EGCG-Gel-Cs纳米粒的最优处方:Gel与Cs的质量比为4.2,Gel与EGCG的质量比为2.82,反应温度为34℃,包封率为(74.42±0.074)%。EGCG-Gel-Cs纳米粒粒径为(264.13±6.48)nm,经过修饰后纳米粒粒径为(389.70±9.00)nm。WGA-EGCG-Gel-Cs纳米粒对HT-29细胞的细胞毒性和细胞凋亡率显著高于EGCG原料药。结论 WGA-EGCG-Gel-Cs纳米粒可显著提高细胞毒性作用。

麦胚凝集素与纤维素酶胶体金探针的混合一步法标记

免疫金双标记技术可在超薄切片上同时标记两种不同的细胞组分 ,但传统的方法是用各个探针分别进行标记处理 ,费时费力 ,且两次标记有时相互干扰。本文通过对麦胚凝集素与纤维素酶两种胶体金探针标记条件与标记活性、标记特异性之间关系的分析 ,实现了在一定条件下两种探针混合的一步法双标记 ,极大地提高了工作效率 ,减少了非特异性背景。

麦胚凝集素亲和色谱富集糖肽过程中的肽键裂解

蛋白质的糖基化是最重要的翻译后修饰之一,与蛋白质结构和功能的关系密切。凝集素亲和色谱是蛋白质糖基化研究中很常用的工具,不同的凝集素可以对不同的单糖或寡糖有特异的富集作用。麦胚凝集素(W GA)由于其特异作用的糖型广泛存在而成为使用最多的凝集素之一。在本研究中,发现将W GA用于糖肽亲和富集会导致部分肽段的降解,从而导致后续的肽段序列分析的失败。本文用4种标准蛋白质对这种现象进行了验证,结果表明肽段的降解可以发生在多个位点,其中较多地发生在酪氨酸、苯丙氨酸及亮氨酸的羧基端。这一结果提示:在糖蛋白质组研究中,如果应用W GA富集糖肽并采用质谱进行鉴定,则采用半酶切或非特异性酶切的检索策略更为合适。

响应面法优化麦胚凝集素分离纯化工艺研究

麦胚凝集素是一种具有生物学活性的蛋白质,将其从麦胚中提取、开发,能促进麦胚的综合利用,提高相关生产企业经济效益。依据Box-Behnken试验设计原理,进行饱和度硫酸铵质量分数、甲壳素用量和甲壳素吸附麦胚凝集素时间的响应面优化分析。建立了提取、纯化麦胚凝集素优化工艺的二次多项数学模型。优化麦胚凝集素分离、纯化工艺参数:饱和硫酸铵质量分数为47.5%、甲壳素用量为2.0:1和甲壳素吸附麦胚时间为19 h。优化工艺模型预测麦胚凝集素相对得率的理论值为92.1%,验证试验显示麦胚凝集素实际提取率为92.7%。

麦胚凝集素分离纯化工艺研究

麦胚凝集素是麦胚中一种具有生物学活性蛋白质。根据甲壳素和麦胚凝集素的性质,以甲壳素作为吸附固相,建立了从麦胚中提取、分离和纯化麦胚凝集素的绢丝布袋法工艺。试验结果显示,采用40%~45%的饱和硫酸铵制备粗麦胚凝集素样品时,粗品麦胚凝集素溶液与布袋中甲壳素的使用比例在3∶1~1∶1,甲壳素吸附麦胚凝集素的时间为19 h,SDS-PAGE凝胶电泳显示可获得纯化度近100%的麦胚凝集素样品。纯化的麦胚凝集素相对分子质量为20415。

麦胚凝集素修饰脂质体对小鼠口服吸收胰岛素的促进作用

目的:研究麦胚凝集素修饰的脂质体对正常小鼠口服胰岛素的胃肠吸收促进作用。方法:采用碳化二亚胺交联法制备麦胚凝集素(WGA)修饰的磷脂酰乙醇胺(PE),将WGA-PE掺入胰岛素脂质体中制成凝集素修饰脂质体并证实WGA凝集活性不受影响。正常小鼠灌胃给予7 iu/只胰岛素修饰脂质体溶液,用葡萄糖酶试剂盒测定小鼠血糖,并与同剂量普通胰岛素脂质体比较。结果:麦胚凝集素修饰脂质体在6 h降糖百分率为(41.91±7.53)％.12 h达到(35.90±7.75)％,18 h为(61.13±4.00)％,维持降糖作用24 h。胰岛素普通脂质体几乎没有降糖作用,与生理盐水对照组相当。结论:麦胚凝集素修饰脂质体可能通过对细胞表面特异性受体的结合作用促进大分子药物的胃肠吸收。

麦胚凝集素修饰的胰岛素脂质体对小鼠口服吸收的促进作用

目的 研究不同磷脂组成及麦胚凝集素(WGA)修饰脂质体对正常小鼠口服胰岛素的吸收促进作用。方法 逆相蒸发法制备包裹胰岛素的磷脂酰乙醇胺(PE)脂质体和普通大豆磷脂(主要成分为磷脂酰胆碱,PC)脂质体。将WGA与PE结合物(WGA-PE)分别掺入上述两种磷脂制备的胰岛素脂质体中制成修饰脂质体。正常小鼠按胰岛素剂量每只7 u分别灌胃给予修饰PE脂质体或PC脂质体,未修饰的PE脂质体或PC脂质体,用葡萄糖酶试剂盒测定小鼠血糖。比较不同WGA-PE掺入浓度的影响。结果 WGA修饰PE脂质体、修饰PC脂质体和未修饰PE脂质体口服后4 h血糖分别降至初始水平的(61.10±16.22)％,(64.72±22.90)％和(86.50±22.40)％,8 h降至(48.52±18.36)％,(46.36±15.12)％和(44.40±28.87)％,12 h为(63.65±16.40)％,(35.9±17.75)％和(72.85±24.08)％。PC脂质体几乎没有降糖作用,与生理盐水对照组相当。低浓度WGA修饰脂质体也表现了降糖作用。结论 磷脂类型对脂质体的促进作用有明显影响,PE的促进作用明显强于PC,可能与PE在胃肠道通过氨基磷脂移入酶的快速移入作用有关。但WGA修饰脂质体中,改进胰岛素吸收的程度相近,表明在修饰脂质体中以WGA的特异性结合为主导作用而与磷脂的种类关系不大。

纯化麦胚凝集素三种方法的比较

用经过部分水解的甲壳素作为亲和层析吸附剂，通过常规法、简化法、布包法三种方法从麦胚中纯化了麦胚凝集素。比较这三种方法所得麦胚凝集素的产率和活性，表明简化法为最佳方法。

麦胚凝集素诱导小鼠成纤维细胞L929发生凋亡的研究

目的 :研究麦胚凝集素 (WGA)是否能够诱导小鼠成纤维细胞L92 9发生凋亡及其可能的分子机制。方法 :分别收集以WGA或琥珀酰化WGA(sWGA)处理 2 4h的L92 9细胞 ,经碘化丙啶染色后 ,以流式细胞仪分析细胞凋亡百分率 ,同时以荧光显微镜观察吖啶橙染色细胞的形态。结果 :WGA处理过的细胞 ,其DNA亚二倍体峰 (Sub -G1)即凋亡峰的百分率明显升高 ,且与WGA剂量呈正相关 ;而sWGA处理的细胞则无此现象。同时 ,荧光显微镜观察发现WGA处理的细胞发生核碎裂 ,但sWGA无此作用。结论 :WGA能诱导L92 9细胞发生凋亡 ,而sWGA不能诱导该细胞凋亡 ,提示WGA结合至细胞表面唾液酸残基是其诱导凋亡所必需 ;WGA诱导细胞凋亡的能力可部分解释其细胞毒性。

麦胚凝集素修饰胰岛素固体脂质纳米粒的研究

目的:制备胰岛素固体脂质纳米粒(SLNs)、麦胚凝集素(WGA)修饰固体脂质纳米粒(WGA-SLNs),研究其对口服吸收胰岛素的促进作用。方法:用复乳法制备SLNs,将WGA与磷脂酰乙醇胺(PE)结合物(WGA-PE)掺入SLNs中制成WGA-SLNs;按胰岛素剂量250IU/kg分别灌胃给予高血糖小鼠SLNs或WGA-SLNs,用葡萄糖酶试剂盒测定小鼠血糖。按胰岛素剂量50IU/kg分别灌胃给予大鼠SLNs及WGA-SLNs,分别用葡萄糖氧化酶法(GOD-PAP)和放射免疫法(RIA)测定大鼠血糖及血清胰岛素浓度。结果:高血糖小鼠口服SLNs后,在0.5h血糖降至初始水平的(30.92±11.54)%,1h降至(46.84±10.21)%,4h为(76.83±10.54)%;口服WGA-SLNs后,在0.5h血糖降至初始水平的(37.56±14.66)%,1h降至(30.44±14.55)%,4h为(58.70±11.18)%,维持降糖作用12h。大鼠口服SLNs及WGA-SLNs后均具有降血糖作用,以皮下注射胰岛素溶液为对照,其相对生物利用度分别为4.99%和7.107%。结论:SLNs促进胰岛素的口服吸收,具有一定的降血糖效果。WGA修饰显著促进了胰岛素吸收,证实了凝集素的靶向作用和吸收促进作用。

RP-HPLC法测定口服麦胚凝集素修饰脂质体中胰岛素

目的:建立RP-HPLC方法,测定麦胚凝集素修饰脂质体中胰岛素的含量和包封率。方法:利用逆相蒸发-超声法制备麦胚凝集素修饰胰岛素脂质体,反相高效液相色谱法测定脂质体中胰岛素含量和包封率。利用Phenomenex-C_(18)柱(250mm×4.6mm,5μm),乙腈-0.01％三氟乙酸(300:700)为流动相,测定波长为210nm,建立了HPLC测定胰岛素含量的方法。结果:HPLC测定方法线性范围5～100μg/ml,线性关系良好。普通胰岛素脂质体的包封率为(30.30±2.77)％(n=3),麦胚凝集素修饰脂质体包封率为(69.33±4.54〕％(n=3)。结论:建立的RP-HPLC方法便捷准确,重现性好,可用于测定麦胚凝集素修饰脂质体中胰岛素的含量和包封率。

麦胚凝集素的高效纯化工艺及其稳定性研究

通过单因素和正交试验确定了麦胚凝集素(WGA)的最佳提取条件(提取时间3．4h,甲酸浓度 0．5mol／L,液料比10．15),并建立了利用盐析分级、选择性热处理、部分水解甲壳素亲合层析和凝胶过滤层析对WGA进行高效纯化的工艺。研究了WGA的理化稳定性,发现WGA的活性随常压热处理温度、时间的增加而降低,而且对于湿热处理比干热处理更敏感。WGA在加压蒸汽处理(2．4kg／cm2,20min)和挤压处理 (145℃,140r／min)后完全丧失活性。WGA的活性在pH7．0-8．5范围内最高,在pH≤2．5或H≥11．0时完全丧失。WGA的活性随茶多酚浓度的增加而显著降低,在茶多酚浓度达到15g／L时完全丧失。

甲壳质与麦胚凝集素亲和作用的研究及其应用

凝集素作为一种对专一性糖或糖链结构有亲和作用的蛋白质,在糖蛋白、糖脂及多糖结构的研究中应用日益广泛。麦胚凝集素能专一结合N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)或其聚合物。60年代以来,国内外利用麦胚凝集素(WGA)对GlcNAc的专一性结合特性。

麦胚凝集素的纯化及其与小麦根际促生细菌的亲和作用

植物凝集素可引导植物-微生物之间的相互识别,对植物根际促生细菌的定殖起着重要作用。采用石油醚和丙酮脱脂、甲酸抽提、硫酸铵盐析、热处理、甲壳素亲和层析的方法分离纯化麦胚凝集素(WGA),从小麦胚中纯化WGA的纯化倍数为115.9,血凝活力为6.8 mg/L,产率为0.566 mg/g。为检测WGA与小麦根际细菌的亲和性识别作用,依据Marshall法对纯化的WGA进行异硫氰酸荧光素(FITC)标记;用标记的WGA对小麦根际细菌染色,26株小麦根际促生细菌中23株具有FITC-WGA染色阳性。表明这些FITC-WGA染色阳性的菌株和WGA具有亲和性识别作用,揭示WGA可能影响定殖在小麦根际的促生细菌。

麦胚凝集素沉淀血清糖蛋白及其对原发性肝癌的诊断

麦胚凝集素沉淀血清糖蛋白及其对原发性肝癌的诊断董加喜，钟志生（湖北医学院咸宁分院生化教研室，４３７１００）赵麟，魏尧梅，李建新（第二军医大学生物化学教研室）麦胚凝集素（ＷＧＡ）是麦胚中一种凝集细胞的蛋白质，它能专一性结合Ｎ－乙酰氨基葡萄糖（ＧｌｃＮＡ...

麦胚凝集素的分离纯化及其在亲和层析中的应用

目的 :将分离纯化麦胚凝集素 (WGA)的方法和固定化WGA亲和层析柱的制备方法进行改良 ,从而得到能够有效结合细胞膜受体的亲和层析柱。方法 :依次用去脂抽提、分级盐析、离子交换层析、甲壳素亲和层析的方法分离纯化WGA ;将制备的WGA与用溴化氰活化的琼脂糖 4B(Sepharose 4B)耦联固定。结果 :得到的纯化倍数为 15 8 5倍的WGA单体相对分子质量为 160 0 0 ,表观相对分子质量为 3 2 0 0 0 ,血凝活力为 8 3mg·L-1。WGA Sepharose4B可以与红细胞表面糖基特异性结合。结论 :改良的WGA分离纯化方法和固定化WGA亲和层析柱的制备方法简便、有效 。