麦胚无细胞蛋白合成系统研究进展

小麦胚芽作为面粉加工过程中的副产物,具有很高的生物活性,其中包含许多蛋白质合成必需的活性成分,如蛋白质合成场所、蛋白因子及其他相关酶系等。本文综述了在后基因组时代,随着生物技术的发展,以小麦胚芽为原料的无细胞蛋白合成系统在结构蛋白、毒性蛋白和功能蛋白表达方面的优势,阐述了其在蛋白质组学研究和生物制药等领域的重要应用潜力,以期小麦胚芽的深层次开发利用提供了重要依据。

高山被孢霉ω-3脂肪酸脱饱和酶基因在麦胚无细胞蛋白质合成系统中的表达

无细胞蛋白质合成系统具有快速、方便等特点,能表达对活细胞具有一定毒性的膜蛋白和抗菌肽,近年来被广泛应用。以来自产油丝状真菌高山被孢霉多不饱和脂肪酸合成途径中的关键膜结合酶——ω-3脂肪酸脱饱和酶为研究对象,构建了适宜体外表达ω-3脂肪酸脱饱和酶的表达载体p IVEX WG1.4-FADS15,并利用麦胚无细胞蛋白质合成系统实现了对该基因的高效表达。同时,通过在麦胚无细胞蛋白质合成过程中添加脂质体的方法,将所表达的膜蛋白正确定位至脂质体磷脂双分子层,以便目标蛋白质的正确折叠。研究结果显示,在此实验条件下目标蛋白质的表达量达1.8 mg/m L,经碘海醇密度梯度超速离心纯化后,该蛋白质的纯度可以达到90%以上。研究结果为后续对该酶进行催化特性研究和蛋白质晶体结构解析奠定了基础。

麦胚蛋白酶解产物对过氧化氢诱导PC12细胞损伤的抗氧化作用

通过控制不同酶解时间制备麦胚蛋白酶解产物(WGPIH),结合其体外抗氧化活性,采用MTT法比较研究WGPIH对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤模型的抗氧化作用,并利用扫描电镜进一步观察PC12细胞表面微观结构的变化。结果表明:酶解时间为240 min的产物(WGPIH5)在不同抗氧化模型中均呈现最强的活性,Fe2+螯合能力的IC50为(0.37±0.05)mg/mL;WGPIH5质量浓度为5mg/mL时,TEAC值(Trolox)可达(0.81±0.01)mmol/L,可有效抑制亚油酸体系的自氧化;WGPIH5质量浓度为1 mg/mL时,可使H2O2诱导损伤的PC12细胞存活率提高32.85个百分点;扫描电镜观察WGPIH5可保持PC12细胞膜的完整性,减少凋亡小体的出现。

无细胞蛋白质合成系统的研究进展

无细胞蛋白质合成系统是一种以外源mRNA或DNA为模板 ,通过在细胞抽提物的酶系中补充底物和能源物质来合成蛋白质的体外系统 .与传统的体内重组表达系统相比 ,体外无细胞合成系统具有多种优点 ,如可表达对细胞有毒害作用或含有非天然氨基酸 (如D 氨基酸 )的特殊蛋白质 ,能够直接以PCR产物作为模板同时平行合成多种蛋白质 ,开展高通量药物筛选和蛋白质组学的研究等 .本文综述了无细胞蛋白质合成系统的发展历史、系统中合成蛋白质所需的能量供应、遗传模板的稳定性和微型无细胞生物反应器等多方面的研究 ,并探讨了无细胞蛋白质合成系统中存在的难点。

谷氨酰胺与鱼类消化系统生长发育以及肠上皮细胞蛋白质合成和抗氧化能力的关系

谷氨酰胺可提高鱼类肠上皮细胞蛋白质合成能力,增强肠上皮细胞的抗氧化能力,改善肠道黏膜形态结构,促进鱼类消化道和消化腺生长发育。本文就谷氨酰胺对鱼类消化道生长发育、肠上皮细胞蛋白质合成及抗氧化能力的影响及机理做一综述。

麦胚蛋白对系统性红斑性狼疮的作用机制及其功能分析

系统性红斑性狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)因人体免疫系统失调导致人体自身形成抗体来对抗自身的器官或组织,现有治疗手段都有严重的不良反应.根据麦胚的蛋白质全谱,使用GO功能注释和KEGG代谢途径对潜在的麦胚功能蛋白进行分类与分析,重点剖析了麦胚功能蛋白(组蛋白)对系统性红斑狼疮的作用机制,旨在为研究开发植物源免疫活性蛋白提供思路和方法,同时也为医学、生物学、食品工业方面提供宝贵的新资源.

无细胞蛋白合成系统的研究进展

目的无细胞蛋白合成系统作为一种不培养细胞,仍可表达外源mRNA或DNA的蛋白合成系统,逐渐引起越来越多研究人员的关注,为此本文特将一些应用方面的新进展加以概述。方法无细胞蛋白合成系统是首先将细胞破碎,离心回收,再加入氨基酸、ATP和GTP,制备成没有细胞但仍可合成蛋白质的系统。结果随着技术的逐步改进,无细胞蛋白合成系统在蛋白合成方面显示出了优于其它传统蛋白合成系统的优点,并被用于高通量药物筛选和蛋白质组学的研究。结论随着无细胞表达系统的成功应用,其在科研和生物制药生产中的应用前景广阔。

大肠杆菌无细胞蛋白质合成系统的初步研究

在近几年来被广泛研究和应用的大肠杆菌无细胞蛋白质合成系统中,大肠杆菌抽提物的制备、底物浓度的配比以及能量再生体系的选择是最关键的几个因素.以绿色荧光蛋白(GFP)为报导基因,以缺失核酸酶I基因的大肠杆菌A19为实验菌株,通过对大肠杆菌无细胞抽提物制备过程中菌体收集时间、细胞破碎压力、后处理条件等参数的摸索和确定、无细胞蛋白质合成系统中底物浓度配比的正交实验优化以及系统中能量再生体系的比较和选择,制备得到了GFP表达量为154μg/mL的大肠杆菌无细胞蛋白质合成系统,与优化前相比产量提高了29倍.

无细胞系统的基因表达与蛋白质合成

无细胞翻译———利用细胞提取液在体外合成蛋白质，已是国外分子生物学实验室的一项常规技术，但在国内此项技术的利用却几乎是空白．对体外无细胞系统的特性、功能、优缺点及其进展等进行了全面的介绍，以期使国内学者了解和利用这一方便而有效的表达系统，进行应用生物化学与分子生物学的实验研究．

重组红细胞血型糖蛋白A脂质体与麦胚凝集素的相互作用

本研究应用重组的红细胞血型糖蛋白A脂质体．分别与麦胚凝集素和交联有麦胚凝集素的Sepharose 4B(WGA—Sepharose4B)相互作用。结果发现重组的红细胞血型糖蛋白A脂质体与麦胚凝集素作用，有明显的凝集现象；并能结合在交联有麦胚凝集素的Sepharose颗粒周边4B上．从而为人工模拟红细胞膜提供了一可靠的实验依据。

麦胚清蛋白抗氧化肽的筛选及对细胞氧化损伤的保护作用

本研究运用超滤与凝胶层析等分离纯化技术逐级分离麦胚清蛋白中性蛋白酶酶解产物,以氧化自由基吸收能力(oxygen radical absorbance capacity,ORAC)与2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonicacid),ABTS)阳离子自由基清除率为评价指标,筛选具有较高抗氧化活性的产物组分,并以该组分为研究对象,利用液相色谱-串联质谱结合Peptide Ranker数据库活性预测技术筛选出具有高抗氧化活性的小肽,并通过高糖诱导血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)及H2O2诱导HepG2细胞与VSMCs建立细胞氧化应激模型,评价小肽对细胞氧化损伤的保护作用。结果表明,经超滤与层析筛选出分子质量较小的V组分抗氧化活性最高,液相色谱-串联质谱鉴定出该组分主要由20个小肽组成,PeptideRanker预测与抗氧化实验验证发现肽序列LNYPPY(765.3 Da)抗氧化活性最高(ORAC 3.01μmol TE/μmol)、ABTS阳离子自由基清除率(95.58%)。肽序列LNYPPY对H2O2诱导的HepG2细胞和VSMCs氧化损伤具有很好的保护作用,但对高糖诱导的VSMCs异常增殖以及活性氧水平上升无明显影响。综上,肽LNYPPY具有良好的体外抗氧化活性,且对H2O2诱导的细胞氧化损伤具有保护作用,研究可为麦胚清蛋白的开发利用提供重要的理论参考。

无细胞蛋白质合成系统

无细胞蛋白质合成系统相比传统的细胞表达系统有许多优点,包括表达周期短、反应条件容易控制等。该文介绍了无细胞蛋白质合成系统的技术进展及表达控制,并综述了这一系统的应用发展。

麦胚凝集素对红细胞血型糖蛋白A二级结构的影响

麦胚凝集素对红细胞血型糖蛋白Ａ二级结构的影响胡良高，姜厚理，段耀奎，苏雅娴（北京医科大学细胞生物学教研室１０００８３北京医科大学军事医学科学院）血型糖蛋白Ａ（ＧｌｙｃｏｐｈｏｒｉｎＡ，ＧＰＡ）是人红细胞膜上一种重要的单跨膜糖蛋白，是恶性疟原虫，麦胚凝...

一种简捷人胚纤维母细胞非S期DNA合成检测系统的建立

本研究将简单的盖玻片法和人胚纤维母细胞(HEF)结合起来,建立一种简敏感快捷的UQS方法。也即利用HEF在盖玻片上贴壁生长至细胞触合,经含0.5％小牛血清培养基同步培养24h和10mM羟基脲预处理1h后,以每片盖玻片为单位进行药物处理,加入3~H-TdR培养4h后,盖玻片经8％三氯醋酸和甲醇各处理15分钟完成细胞收获,以每片盖玻片为单位作液闪放射活度计数。本系统利用盖玻片法大大简化了药物处理和细胞收获步骤,使一次完成多样本处理成为可能。

枸杞体细胞胚发生中蛋白质代谢动态的立体计量

以宁夏枸杞无菌苗叶片为材料，离体培养并诱导体细胞胚胎发生。根据细胞形态计量学原理，应用数字图像处理软件计量由光学底片经Ａ／Ｄ转换成的数字图像中的蛋白质大分子，对于枸杞体细胞胚发生过程中蛋白质分子的代谢动态进行了量化处理，并对量化结果分析了蛋白质代谢动态与体细胞胚发生。

麦胚提取物对去卵巢大鼠无机盐和骨形成蛋白2的影响

目的 探讨麦胚提取物对去卵巢引起骨质疏松大鼠无机盐和骨形成蛋白 2 (BMP2 )的影响。方法 2 1只雌性 SD大鼠随机分为假手术组、去卵巢模型组、去卵巢加麦胚提取物组 (麦胚提取物 1 0 0 mg/ kg· d) ,1 0 w后测定血清无机盐钙、磷、钠、钾、AL P含量 ,用 SP免疫组织化学检测骨 BMP2 表达。结果 去卵巢组大鼠试验 1 0 w后血清和尿钙、钠和血清 ALP含量显著升高 ;而血清和尿钾降低 ,骨 BMP2 表达下降 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1 )。去卵巢加麦胚后大鼠的尿钙、钠和血清 ALP含量显著降低 ,骨 BMP2 表达增高 (P<0 .0 5)。结论 麦胚提取物可调节去卵巢大鼠血清和尿中钙、钠、钾 ,促进 BMP2 表达 ,预防去卵巢大鼠骨质疏松。

麦胚凝集素红细胞凝集活性检测方法的改进

对红细胞进行蛋白酶处理、戊二醛固定,采用pH7.2等渗磷酸盐作为缓冲液,用光径0.5cm比色池测定凝集活性,读取测定终点的时间以2h为宜.建立的检测方法简单易行,得出的结果具有良好的灵敏度及重现性.

系统性红斑狼疮外周血单个核细胞蛋白组学的初步研究

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)外周血单个核细胞(PBMC)蛋白质组的变化。方法分别提取14例SLE患者及9例健康献血者的PBMC,采用双向电泳技术分离全蛋白质组,对部分差异的蛋白质点进行离子阱高效液相色谱/质谱分析,测定其肽质量指纹图谱,与互联网蛋白质数据库的数据进行比对。结果获得了较好的双向电泳图像,图像分析显示:1例SLE患者、4例健康献血者PBMC蛋白匹配点为1084个,其中SLE患者高表达及特异表达蛋白点为71个及17个,健康献血者高表达及特异表达蛋白点为45个及20个,与所有实验2-DE图谱逐个比对后,对表达差异重复性高的30个蛋白质点进行肽质量指纹图谱分析,经数据库检索后,鉴定出2个胞浆蛋白质酪氨酸转运核糖核酸合成酶(tyrosyl-tRNA synthetase)和斑联蛋白(zyxin)在SLE患者的PBMC中低表达。结论SLE患者PBMC蛋白组学研究可能为深入研究其发病机制、建立新的诊断指标提供一个良好的平台。

单蛋白合成系统研究进展

任何一个蛋白质合成系统的最终目标都是表达所需要的蛋白质(目的蛋白质)而不产生其他的细胞蛋白质。目前,只有两种方法可以成功的表达目的蛋白质:体外无细胞蛋白质合成系统和体内单蛋白生产(SPP)系统。综述现今不同的单蛋白生产系统,讨论他们的应用、优点和缺点。

麦胚球蛋白的体外抗炎活性研究

麦胚球蛋白是一种优质蛋白,在改善身体机能和消除炎症方面有着重要的研究价值。通过脂多糖(LPS)干预巨噬细胞建立炎症细胞模型,对提取麦胚球蛋白的体外抗炎活性进行了探究。通过体外细胞培养研究了麦胚球蛋白对RAW264.7细胞的细胞毒性;利用Griess法研究了麦胚球蛋白对RAW264.7细胞经LPS诱导前后NO产生量的影响;利用ELISA法检测实验组对炎症细胞模型中细胞因子TNF-α含量的影响。结果表明:麦胚球蛋白能显著降低经LPS诱导RAW264.7细胞因子TNF-α和NO的含量,并存在一定的剂量依赖关系。麦胚球蛋白抗炎活性的研究为功能性保健品及抗炎药品原料开发提供了思路。