重组麦芽糖转葡萄糖基酶工程菌发酵条件的优化

对重组麦芽糖转葡萄糖基酶工程菌的发酵条件进行优化,通过单因素试验确定该菌株产麦芽糖转葡萄糖基酶的最佳发酵培养基为:糖蜜0.025g/mL、胰蛋白胨0.015g/mL、MgSO4.7H2O与K2HPO4的质量为7:1、FeSO4.7H2O 0.5g/L;以葡萄糖氧化酶法为指标测得最佳摇瓶发酵条件为:装液量100mL/250mL、转速200r/min、接种量5%、初始pH 7.0、最佳温度37℃、诱导阶段OD600nm=0.6、诱导温度30℃、诱导时间5h、诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)浓度1mmol/L。经优化,重组麦芽糖转葡萄糖基酶的酶活力可达950U/mL,比初始条件下提高了近7倍。

嗜热麦芽糖转葡萄糖基酶的制备及其应用综述

针对目前国内外关于嗜热麦芽糖转葡萄糖基酶的制备及应用进展进行了综述:主要采用基因克隆至常温宿主细胞中,通过宿主细胞的过量表达来完成制备,其应用主要体现在淀粉的优化改性、大环糊精的制备以及功能成分的糖基化修饰等方面.未来研究将集中于酶的多功能催化机制,同时拓展糖基化改性功能成分的种类及转糖基类型.

水生栖热菌Thermusaqu aticus FL-03嗜热麦芽糖转葡萄糖基酶基因的克隆及表达

以水生栖热菌FL-03菌株的基因组DNA为模板,PCR扩增编码嗜热麦芽糖转葡萄糖基酶的基因(MalQ)片段,克隆至pET-28a(+)原核表达载体,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定。重组蛋白经70℃钝化离心除杂蛋白后,经SDS-PAGE检测,可见单一条带。纯化酶液以10%麦芽糖为底物,经TLC法分析表明该酶具有转葡萄糖基的活性,比活力提高近5倍,且活力回收率达70%,具有重要的工业应用前景。