麦门冬汤合苇茎汤抑制小鼠Lewis肺癌生长的体内实验研究

目的研究麦门冬汤合苇茎汤(简称金方/JIN)对Lewis肺癌小鼠移植瘤的抑制作用并初步探讨药物作用机制。方法皮下注射LLC(Lewis lung carcinoma,Lewis肺癌细胞)于C57/BL6小鼠右腋下,观察小鼠生存期、抑瘤率、胸腺指数和肿瘤组织EGFR/Raf/MEK的表达。结果金方可以显著延长小鼠的生存时间,与对照组相比有显著性差异(P<0.01),金方、DDP组对荷瘤小鼠的抑瘤率分别为35%、89%,金方组胸腺指数明显升高,DDP组胸腺指数明显下降,金方、DDP组的EGFR表达均下降(P>0.05,P<0.01),而各组Raf和MEK表达无显著性差异。结论金方可以显著延长荷瘤小鼠的生存期,有一定的抑制肿瘤增长和增强免疫能力的作用,其机制可能与其下调肿瘤组织中EGFR的表达进而影响其下游信号通路的传导相关。

基于ATF2和JAK2/STAT3信号通路研究麦门冬汤合千金苇茎汤联合顺铂对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用

目的:基于ATF2和JAK2/STAT3信号通路研究麦门冬汤合千金苇茎汤联合顺铂对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长的抑制作用及对免疫功能的影响。方法:建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型,分别给予生理盐水、麦门冬汤合千金苇茎汤、顺铂、麦门冬汤合千金苇茎汤+顺铂,连续给药21 d后,剥取瘤体称量质量并计算抑瘤率,计算胸腺和脾脏指数,HE染色观察肿瘤组织病理学改变;流式细胞仪检测CD4^(+)T淋巴细胞(CD4^(+))、CD8^(+)T淋巴细胞(CD8^(+))的分布与比例;采用ELISA法测定血清TNF-α、IL-10、IL-12、IL-16含量;采用免疫组化法检测肿瘤组织中侵袭转移相关蛋白ATF2、MMP-2、MMP-9的表达;采用Western Blot检测肿瘤组织中JAK2/STAT3信号通路相关蛋白表达。结果:与模型组比较,各给药组瘤质量均显著降低(P<0.01)。与模型组比较,顺铂组小鼠胸腺及脾脏指数均有所降低,而麦门冬汤合千金苇茎汤组与麦门冬汤合千金苇茎汤+顺铂组的胸腺及脾脏指数显著升高(P<0.01),光镜下可见各给药组肿瘤组织坏死程度加大,分裂增殖程度减轻。与模型组比较,各给药组小鼠脾淋巴细胞亚群CD4^(+)/CD8^(+)比值显著升高,血清TNF-α、IL-10、IL-12、IL-16含量及瘤体组织中ATF2、MMP-2、MMP-9、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:麦门冬汤合千金苇茎汤与顺铂单独和联合使用对Lewis肺癌小鼠模型均有显著的体内抗肿瘤作用,同时可增强机体的免疫功能,降低机体炎症水平,其机制可能与下调ATF2、MMP-2、MMP-9表达和干预JAK2/STAT3信号转导通路有关。

麦门冬汤合千金苇茎汤对小鼠Lewis原位肺癌lncRNA,mRNA表达谱的影响

目的:通过对Lewis肺癌原位移植小鼠肿瘤组织长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)和mRNA表达谱的检测,探讨麦门冬汤合千金苇茎汤(金方)抗肺癌的作用机制。方法:C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、金方组(20 g·kg-1·d-1),构建小鼠Lewis原位肺癌模型成功后,次日用金方灌胃开始治疗。应用基因芯片技术,检测与金方抗肺癌作用密切相关的差异lncRNA,mRNA,进行聚类分析,并利用t检验和差异表达的倍数变化,筛选出关键lncRNA,mRNA。运用生物信息学方法预测差异lncRNA调控的靶基因,并对其进行功能和通路分析。应用病理组织学技术,检测各组小鼠肿瘤组织光镜下的差异表现。结果:lncRNA,mRNA芯片杂交结果显示,金方调控了887个lncRNA差异表达,其中上调442个,下调445个(P<0.05)。差异表达的mRNA共610个,其中上调376个,下调234个(P<0.05)。使用GO分析方法,发现下调或上调的靶基因主要参与了细胞代谢调控、信号通路调控等生物学过程(biological process,BP)。靶基因分子功能(molecular function,MF)分析显示,下调或上调的靶基因主要具有DNA结合、蛋白质结合、受体结合和转录因子活性等功能。信号通路预测显示金方可调控Janus激酶/信号转导与转录激活因子(JAK/STAT)等与肺癌的发生发展密切相关的信号通路。病理组织学检查结果证实,与模型组比较,金方能明显改善小鼠肺组织的病理改变。结论:金方可能通过调控多种lncRNA和mRNA的表达及下游相关信号通路来发挥其抗肺癌的作用。

麦门冬汤合千金苇茎汤提取部位对非小细胞肺癌H460细胞毒作用的研究

目的:通过药效评价实验筛选出麦门冬汤合千金苇茎汤(简称金方)的有效部位。方法:MTT法观察不同浓度的金方提取出的8个部位对肺癌NCI-H460细胞和正常人胚肺成纤维细胞HFL-I生长增殖的影响,初步筛选有效部位;平板细胞克隆形成试验,检测有效部位对肿瘤细胞克隆形成能力的影响;同时用流式细胞仪进行细胞周期检测分析,评价有效部位对细胞周期的影响;Hoechst33258染色后在荧光显微镜下观察NCI-H460细胞凋亡的形态变化。结果:不同浓度提取各部位中,6部位对NCI-H460细胞有显著的生长抑制作用;作用72 h后,荧光显微镜下可见NCI-H460细胞核固缩,染色质凝聚等凋亡形态学特征;流式检测显示对NCI-H460细胞主要抑制在S期,并有凋亡细胞出现。结论:麦门冬汤合千金苇茎汤提取各部位中6部位对NCI-H460细胞具有细胞毒作用,可有效抑制肺癌细胞生长,并对人体正常细胞(胚肺成纤维细胞)无显著影响,可以进一步分离筛选组分及单体化合物。