家蚕墨蝶呤还原酶基因的体外表达及酶活性研究

家蚕(Bombyx mori)黄体色突变体(lem)的幼虫体壁富含墨蝶呤(SP),SP经墨蝶呤还原酶(SPR)的催化作用合成四氢生物蝶呤(BH4)。作为芳香族氨基酸羟化酶的重要辅酶,BH4的缺乏会导致多种神经性代谢综合症。前期研究已克隆获得家蚕SPR基因(BmSpr),确定了BmSpr为lem突变体的遗传本质。本实验将重组质粒pET-24b-BmSpr转化至E.coli不同菌株的感受态细胞,对BmSpr的体外表达条件进行了优化。SDSPAGE和Western Blot的检测结果表明BmSPR融合蛋白能够在原核表达系统中得到稳定表达,酶活性分析结果显示体外表达的重组BmSPR对其底物SP有较好的催化活性。本研究为进一步以从家蚕lem突变体资源大量提纯的SP为底物,利用原核表达BmSPR,开展体外合成BH4的应用基础研究奠定了实验基础。