桑树黄化型萎缩病植原体延伸因子基因的克隆及序列分析

利用已报道的引物对fTuf Ay/rTuf Ay,采用PCR技术对桑树黄化型萎缩病植原体延伸因子(EF-Tu)tuf基因片段进行了扩增、测序及序列分析。结果表明,从表现黄化型萎缩病症状的桑树样品中扩增得到预期大小的目的片段。经核苷酸序列测定,扩增得到的延伸因子基因片段为946 bp(GenBank登录号为:GQ268317)。对桑树黄化型萎缩病植原体及16Sr I组中的各亚组代表植原体的延伸因子tuf基因的相似性比较结果表明,桑树黄化型萎缩病植原体与16Sr I组中的MD、PRIVA亲缘关系最近,核苷酸的相似性为99.9%。该序列与已知的16Sr-I各亚组代表植原体构建的进化树表明,桑黄化型萎缩病植原体与tufI-B亚组聚类为一个亚组,归为翠菊黄化植原体组(Candidatus Phytoplasma asteris),即16Sr I组tufI-B亚组,该结果从亚组水平上进一步确定了桑树黄化型萎缩病植原体的分类地位。

桑黄化型萎缩病植原体核糖体蛋白基因操纵子片段序列的扩增与分析

采用PCR技术对桑树黄化型萎缩病植原体核糖体蛋白基因操纵子的部分基因进行扩增,并对扩增片段进行测序及序列分析。结果表明,利用rpF/rpR引物对扩增得到桑黄化型萎缩病植原体核糖体蛋白基因操纵子片段大小为1240bp（GenBank登录号为GQ373255）,该片段包含rps19基因部分序列,rpl22和rps3基因的全部序列。相似性分析表明,该片段的核苷酸序列与16SrⅠ-rp亚组中各代表植原体的rp基因核苷酸序列的相似性为96.6%~99.9%。构建的进化树表明,桑黄化型萎缩病植原体与报道的桑萎缩病植原体（MD）聚类为一个rp亚组,即rpI-B亚组。

桑黄化型萎缩病抗病性鉴定技术研究进展

就桑品种对黄化型萎缩病抗病性鉴定技术的研究进行了综述。介绍了 7种鉴定技术的操作方法 ,并对其进行了简要评价。

桑品种对黄化型萎缩病抗性鉴定方法的研究

桑黄化型萎缩病是由类菌质体（ＭＬＯｓ）引起的，其发生流行与品种抗性密切相关，快速、准确鉴定抗病品种对于抗病品种的选用至关重要。本研究经３年３地比较试验，认为“绿枝贴病皮袋接接种法”鉴定品种抗性较目前采用的诸多方法更为简便实用及快速准确。该法７～９月进行，先在要鉴定品种的两芽绿枝接穗的顶芽以上贴补０．５×０．５ｃｍ的病皮，用透明胶带固定后再接在健砧上，当日横伏密植，植后上盖薄膜，第８天剪除接穗贴病皮处，待嫁接体发芽开叶后调查病芽率，确定品种抗性强弱。

桑黄化型萎缩病及其防治

1．主要症状。发病初期少数枝梢嫩叶皱缩发黄，向反面卷曲，随后腋芽萌发，侧枝丛生，枝短叶小，呈宝塔状。后期桑树全株病变，在夏伐后直接长出猫耳朵状瘦小叶片，细枝丛生，病株无花不结果，根系色泽不鲜艳。所以被蚕农称之为“塔桑”、“聋桑”。

育7210抗桑黄化型萎缩病的鉴定

育7210(湖桑39号×育237号)是由中国农业科学院蚕业研究所孙晓霞等通过有性杂交、亲本选配、组合筛选、株系选拔,于1972年选育出的优良株系。在此基础上,“六五”、“七五”期间进一步进行了品比试验(湖桑32号作对照),结果表明:育7210不仅高产(比湖桑32号增产30％左右)、优质(万头蚕收茧量、万头蚕茧层量分别比湖桑32号高4％、3％、50公斤桑产茧量与湖桑32号相近),且抗病(桑黄化型萎缩病大田自然发病率育7210为0％,湖桑32号为15.68％),但自然发病的观察调查很难正确地反映桑品种(或品系)抗病性,为进一步确定其抗病性,应用人工接种鉴定。

桑树黄化型萎缩病病叶挥发性物质的气质联用(GC/MS)分析

利用气相色谱-质谱联用(GC/MS)技术对桑树健康叶片和黄化型萎缩病感病叶片中的挥发性物质进行了对比分析,共鉴定出60余种挥发性化合物,主要为烃类(烷烃和烯烃)、醇类、酮类和酯类物质。分析表明:健康桑树叶片与黄化型萎缩病感病叶片的挥发物成分和含量不同,其共有成分的种类占50%左右,分别为烯烃类、酸类、醇类、酯类、酰胺类。桑树黄化型萎缩病感病叶特有的物质是苯甲酰胺、2-氧苯甲酰酯和2,3-已二醇。

桑树抗黄化型萎缩病种质资源筛选试验

桑树萎缩病有三种类型:花叶型萎缩病、黄化型萎缩病和萎缩型萎缩病。其中桑树黄化型萎缩病是由植原体引起的植物病害[1]。防治该类型萎缩病的关键措施是进行桑树抗病品种筛选选育。通过对陕西省蚕桑重点实验室桑树品种园及陕南主栽的58个桑树品种抗桑树黄化型萎缩病性能的鉴定,初步筛选出18个抗病品种,通过对其抗病性能的稳定性进行复试检测,最终筛选出凤尾芽变、育237、育2、强桑、湖桑199、葫芦桑等六个高抗品种,推荐为陕南安康地区的推广品种。

桑树黄化型萎缩病植原体溶血素基因MDPH的克隆及生物信息学分析和原核表达

溶血素为细菌分泌的能够使细胞溶解的毒素,是病原菌重要的毒力因子。利用同源克隆技术得到桑树黄化型萎缩病植原体溶血素全长基因,命名为MDPH(GenBank登录号:HQ891118)。MDPH全长717 bp,编码238个氨基酸,预测蛋白质分子质量为27.3 kD,等电点为9.29,氨基酸序列与其它植原体中已分离的溶血素有很高的同源性。蛋白质序列结构预测表明:MDPH的二级结构中富含α-螺旋,其次为β-折叠和无规卷曲,而β-转角仅占5.46%。对蛋白质序列的理化特征预测表明:MDPH有多个亲水和疏水区域,且疏水性强于亲水性;易形成跨膜螺旋,具有7个显著跨膜结构区;蛋白的抗原性较强,不含有明显的信号肽序列,为非经典分泌蛋白。将MDPH的编码区插入原核表达载体pET30a(+),并转化到E.coli BL21中,经过IPTG诱导,MDPH在BL21菌株中成功表达。研究结果为深入探讨MDPH的功能及植原体的致病机制奠定了基础。

桑树品种对黄化型萎缩病抗病性与过氧化物酶关系的研究

不同抗黄化型萎缩病能力的桑品种枝皮的过氧化物酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳表明，品种间同工酶带差异明显，其酶带数目与桑品种抗病性成正相关。不同抗性品种接种类菌原体（ＭＬＯ）后，经不同时段过氧化物酶同工酶酶带区和酶带数与未接种的无明显差异，但酶带均有不同程度的加强，且随着接种后经过日数的增多而加强。因此，认为过氧化物酶是桑树抗ＭＬＯ的机制组分之一。

我县黄化型萎缩病的发生和防治

桑黄化型萎缩病是一种毁灭性的桑树病害。找出该病发生和流行的原因并采取相应的防治措施,对保护现有桑园,提高桑叶产量和质量极为重要。 1 萎缩病发生流行的途径和条件 1.1 引进带病苗木:我县的几次建园高峰期所用苗木,几乎部是从外地老蚕区调入,难免会带入少量萎缩病株,为以后的发病和流行埋下了隐患。 1.2 嫁接传染:桑树萎缩病,不但老桑园中有发生,而且苗圃地中也发现有病株。

采取综合措施防治桑树黄化型萎缩病

桑树黄化型萎缩病,又叫猫耳朵桑和癃桑,是一种合株性传染病害。患黄化型萎缩病的桑树枝短叶小,叶片超前黄落,被害树体逐渐衰竭而枯死。有关试验证明,认真采取综合性防治措施,亦能在很大程度上控制此病。1.防范病原传染试验研究材料证实,桑树黄化型萎缩病可以通过嫁接相互传染,是一种病毒性病害。在生产上进行病、健组织相互嫁接,只要一方带病,嫁接后均会传染对方发病。随着桑树苗木和嫁接材料的流通,原无此病的地区近年也有发现,必须提高警惕。各地在进行桑苗、接根、接穗余缺调剂时,要认真作好调查和检疫工作,对染病桑苗和嫁接材料绝对不能出售或购进。2.控制昆虫传毒桑树黄化型萎缩病的另一种传染途径是通过桑拟菱纹叶蝉和凹缘菱纹叶蝉传染发病的。调查材料证明,桑园桑病的存在越多,传染发病率越高;菱纹叶蝉的虫口越大。

综合防治桑树黄化型萎缩病

桃园乡近年桑园面积成倍增长,但由于盲目从外地调苗,也引进了不少病苗,导致1986年桑树黄化型萎缩病严重暴发。5782亩新老桑园,发病田块占92%,平均发病株率46%;1987年发病田块达100%,平均发病株率65%,发病率在85%以上的桑园达2460亩。尽管做了大量的工作,采取了多种措施,在桑树夏伐后和晚秋季节仅仅淘汰了发病率达90%以上的病园741亩,其它大面积的严重病园,农民不愿意挖除。在病株严重暴发、缺株十分严重,更新难以实施的情况下,我们因势利导地提出了“见一株、挖一株、压二株”的防治设想,并结合治虫、