十六烷基三甲基溴化铵对枯草杆菌(B.subtilis)黄嘌呤缺陷型菌株产生腺苷的影响

在枯草杆菌中 ,嘌呤核苷酸合成途径中存在AMP和GMP转变成IMP的环行途径 ,而在该菌的黄嘌呤缺陷型菌株中IMP至XMP的分枝途径被阻塞 ,同时在该菌株内又有强的 5’ -核苷酸酶活性 ,这使其可以生成腺苷 (AR) ,但反馈抑制是腺苷产率的一个重要影响因素。使用季铵盐阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵 (CTAB)可改善细胞的渗透性 ,减少细胞内产物的反馈抑制 ,促进产物的分泌。结果表明 ,在发酵 60h添加 4%的CTAB能使产率从 3.0 g/l提高到3.6g/l,提高幅度达 2 0 %。

N离子束注入与DES复合诱变选育腺苷高产菌株

为了获得腺苷高产菌株,以肌苷产生菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HSD1206(Ade-、Thi-、SGr)为出发菌株,通过硫酸二乙酯(DES)处理、N离子束注入进行单因子和复合诱变。参照菌种致死率曲线,确定N离子束注入250 s与DES处理10 min为最佳诱变时间。经过多轮诱变和筛选,获得了黄嘌呤、硫胺素、组氨酸三重缺陷型,腺嘌呤脱氨酶活性缺失及磺胺胍抗性菌株DI4-24和DI4-182,其遗传标记为Xan-、Thi-、His-、Deam-、SGr,连续传代后性状稳定,在优化的发酵培养基中发酵后腺苷产量可分别达到18.56 g/L和17.13 g/L。由此证明,通过物理、化学复合诱变,阻断枯草芽孢杆菌营养缺陷型菌株产肌苷途径,打通合成腺苷途径的诱变思路在实验室环境下是可行的。