黄地安消胶囊含药血清抑制NLRP3介导的细胞焦亡对糖尿病认知功能障碍细胞模型的保护作用

探讨黄地安消胶囊(Huangdi Anxiao Capsules,HDAX)含药血清对高糖诱导大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞认知功能障碍的保护作用及可能的分子机制。构建高糖诱导PC12细胞糖尿病认知功能障碍模型,使用mcc950抑制NLRP3。将PC12随机分为正常(control)组、模型(model)组、HDAX含药血清组、NLRP3受体阻断剂(mcc950)组、HDAX含药血清+NLRP3受体阻断剂(HDAX含药血清+mcc950)组。PC12细胞按照分组分别处理后通过MTT法检测细胞增殖活性,Hoechst 33258/PI染色检测细胞焦亡,ELISA法测定PC12中白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-18水平,Western blot检测PC12中突触后致密物(postsynaptic density,PSD)、焦亡相关通路蛋白NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、gasdermin D(GSDMD)、GSDMD-N、裂解的半胱天冬酶-1前体(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-1,cleaved caspase-1)蛋白水平;RT-PCR检测PC12中NLRP3、ASC、GSDMD、caspase-1的mRNA表达量,免疫荧光检测焦亡标志指标GSDMD-N、NLRP3表达情况。结果显示,与control组相比,model组细胞增殖活性显著降低,PI阳性率增加,PSD-95表达降低,促进焦亡相关通路蛋白NLRP3、ASC、GSDMD-N、GSDMD、cleaved caspase-1表达,增加NLRP3、ASC、GSDMD、caspase-1的mRNA含量,同时提升促炎因子IL-18、IL-1β的表达;与model组相比,HDAX含药血清组、mcc950抑制剂组以及HDAX含药血清+mcc950组可以提高细胞存活率,改善PC12细胞形态,显著降低PI阳性率,降低焦亡相关通路蛋白NLRP3、ASC、GSDMD-N、GSDMD、cleaved caspase-1的蛋白表达,减少NLRP3、ASC、GSDMD、caspase-1的mRNA含量,同时抑制促炎因子IL-18、IL-1β的表达。综上,HDAX含药血清可抑制NLRP3介导的细胞焦亡,对高糖诱导PC12细胞认知功能障碍具有保护作用。

基于血清药理学的肝龙胶囊含药血清制备方法的初步探究

目的:利用血清药理学,探究用于肝细胞脂肪变性药效观察的肝龙胶囊(GLC)含药血清的最佳取血时间和含药血清体积分数。方法:C57BL/6J小鼠60只,灌胃GLC(90 mg/kg),每日两次,连续7 d,分别在末次给药0.5、1、2和4 h心脏采血,收集血清。对照组小鼠灌胃同体积的生理盐水。LC-MS/MS技术检测空白血清及不同采血时间含药血清肌苷含量,确定最佳采血时间。应用0%、1%、3%和10%GLC血清处理棕榈酸(PA)刺激的小鼠肝细胞NCTC1469,尼罗红染色检测细胞脂滴生成,RT-qPCR检测细胞内脂肪酸生成基因Fabp1和Scd1,及脂肪酸β-氧化基因Pparα的表达。结果:(1) LC-MS/MS检测发现在末次给药2 h后血清中肌苷浓度最高。(2)尼罗红染色显示GLC血清对PA诱导的肝细胞脂质积累具有剂量依赖性的减少趋势。(3) 1%和3%和10%GLC血清处理均能显著下调PA刺激的肝细胞内Fabp1和Scd1的表达,且具有剂量依赖性的减少趋势;1%、3%和10%GLC血清处理均能显著上调PA刺激的肝细胞内Pparα的表达,且具有剂量依赖性的增加趋势。结论:小鼠给药后2 h的10%GLC血清是用于肝细胞脂肪变性药效观察的最佳血清干预浓度。

基于JAK2/STAT3通路研究周氏固金消瘤汤含药血清对人肺腺癌A549细胞侵袭迁移能力的影响

目的:探讨周氏固金消瘤汤(ZSGJXLT)含药血清对人肺腺癌A549细胞侵袭迁移能力的影响及其机制。方法:应用健康SD大鼠制备ZSGJXLT含药血清与空白血清,将0%(空白血清)及5%、10%、20%、30%、40%ZSGJXLT含药血清作用于A549细胞,CCK-8法测算细胞活性抑制率和半数抑制浓度(IC_(50))。用0%ZSGJXLT(空白对照组)、5%ZSGJXLT(ZSGJXLT低剂量组)、10%ZSGJXLT(ZSGJXLT中剂量组)及20%ZSGJXLT(ZSGJXLT高剂量组)含药血清培养A549细胞,细胞划痕实验及高内涵细胞成像技术观察细胞运动情况;Transwell侵袭及迁移实验观察细胞侵袭及迁移情况;Western blot法检测A549细胞JAK2/STAT3通路相关蛋白表达情况。结果:与空白对照组相比,不同浓度ZSGJXLT含药血清组A549细胞活性受到不同程度的抑制,与时间及浓度呈正相关性,24 h的IC_(50)为25.42%。与空白对照组相比,ZSGJXLT中、高剂量组A549细胞划痕愈合率、细胞移动速度均显著下降(均P<0.05),不同浓度ZSGJXLT含药血清组A549细胞侵袭及迁移数量明显减少(均P<0.05)。与空白对照组比较,ZSGJXLT中、高剂量组A549细胞的p-JAK2、p-STAT3、VEGFA蛋白表达水平显著降低(均P<0.05);不同浓度ZSGJXLT含药血清组MMP-2、MMP-9、N-cadherin蛋白表达有下调趋势,而E-cadherin蛋白表达有上调趋势,呈剂量依赖性,其中ZSGJXLT高剂量组与空白对照组比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:周氏固金消瘤汤含药血清能抑制A549细胞侵袭迁移能力,其机制可能与调控JAK2/STAT3通路有关。

透骨消痛胶囊含药血清对退变关节软骨细胞表达TNF-α、IL-1β的影响

目的观察透骨消痛胶囊含药血清对体外培养的大鼠退变软骨细胞表达肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)的影响,探讨透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的作用机制。方法 4周龄SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,采用Ⅱ型胶原原位杂交法对第3代软骨细胞进行鉴定。用10 ng.mL-1IL-1β干预第3代软骨细胞复制退变软骨细胞模型。模型复制成功后,随机分为模型组和透骨消痛胶囊含药血清组,分别在培养24、48、72 h后用TaqMan real-time PCR法检测各组mRNA表达。结果透骨消痛胶囊含药血清组TNF-αmRNA、IL-1βmRNA相对表达量随着干预时间的延长逐渐下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的部分作用机制是有效抑制退变软骨细胞TNF-α、IL-1β的表达。

透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞外基质表达的影响

背景:软骨细胞代谢异常引起细胞外基质降解和修复失衡是骨性关节炎的重要病理变化。透骨消痛胶囊具有补肾柔肝、活血祛风的功效,临床实验证实其对防治骨性关节炎有较好疗效。目的:观察透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞外基质表达的影响。方法:取SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,第3代软骨细胞同步化后进行干预。50只SD大鼠抽签法随机分为5组,用药量按照人体与动物药物等效剂量换算,空白组:生理盐水进行灌胃;对照组:壮骨关节丸水溶液灌胃;实验组:透骨消痛胶囊水溶液按0.145,0.290,0.580mg/(g·d)进行灌胃。各组均连续给药3d,采血前禁食12h,末次给药1h后腹主动脉采血,制备血清。结果与结论:Ⅱ型胶原免疫组织化学染色可见透骨消痛胶囊实验组Ⅱ型胶原表达强于空白组及对照组;透骨消痛胶囊实验组CollagenⅡ、蛋白聚糖、Aggrecan mRNA基因表达明显升高(P<0.01),Cathepsin K mRNA基因表达明显降低(P<0.01)。提示透骨消痛胶囊含药血清能上调软骨细胞CollagenⅡ、蛋白聚糖、Aggrecan mRNA基因表达,下调Cathepsin K mRNA基因表达,促进细胞外基质合成,调控细胞外基质和软骨细胞之间的动态平衡。

透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞Cyclin D1 mRNA表达的影响

目的:观察透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞CyclinD1 mRNA表达的影响,探讨透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的可能作用机制。方法:采用抽签法将16只12周龄雄性新西兰大白兔随机分为空白组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组4只。低剂量组按5 mL.kg-1体质量以5 mg.mL-1透骨消痛胶囊溶液灌胃,中剂量组按5 mL.kg-1体质量以10 mg.mL-1透骨消痛胶囊溶液灌胃,高剂量组按5 mL.kg-1体质量以20 mg.mL-1透骨消痛胶囊溶液灌胃,空白组按5 mL.kg-1体质量以生理盐水灌胃。每天灌胃2次,连续7 d,最后1 d连续2次灌胃,中间间隔2 h。末次灌胃后3 h提取各组实验兔含药血清低温保存备用。将6只4周龄雄性新西兰兔处死,取其膝关节软骨,置入盛有Ⅱ型胶原酶的培养皿中进行消化,建立软骨细胞体外培养体系,并采用甲苯胺蓝染色法鉴定细胞功能。将体外培养的第3代软骨细胞随机分为空白组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,并分别加入含空白血清、低剂量中药血清、中剂量中药血清、高剂量中药血清的DMEM培养液中继续培养72 h后,采用MTT法检测软骨细胞的增殖情况,采用RT-PCR法检测CyclinD1 mRNA的表达,并在透射电子显微镜下观察细胞形态。结果:Ⅱ型胶原酶消化法成功建立了软骨细胞的体外培养体系,甲苯胺蓝染色可见软骨细胞内呈紫红色异染颗粒。干预72 h后,各组软骨细胞光密度值比较,差异有统计学意义(F=6.209,P=0.004);中剂量组、高剂量组软骨细胞光密度值高于空白组(P=0.005,P=0.002);中剂量组、高剂量组软骨细胞光密度值高于低剂量组(P=0.034,P=0.011)。各组软骨细胞CyclinD1 mRNA表达量比较,差异有统计学意义(F=8.262,P=0.001);中剂量组、高剂量组软骨细胞CyclinD1 mRNA表达量高于空白组(P=0.002,P=0.001);中剂量组、高剂量组软骨细胞CyclinD1 mRNA表达量高于低剂量组(P=0.012,P=0.004);中剂量组、高剂量组可见较多处于分裂期的细胞。结论:透骨消痛胶囊的含药血清能促进软骨细胞G1期正性调节因子CyclinD1 mRNA的表达,从而促进软骨细胞增殖,这可能是透骨消痛胶囊在临床上治疗骨性关节炎具有较好疗效的部分机理,而有关透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的具体作用机制还需作更进一步的深入研究,以便为临床应用提供理论依据。

透骨消痛胶囊含药血清对膝骨关节炎关节滑膜细胞uPA系统及炎性因子的影响

背景:透骨消痛胶囊是治疗骨性关节炎的临床验方,作用机制尚未完全阐明。尿激酶型纤溶酶原激活系统参与软骨细胞外基质降解和滑膜增生,在骨性关节炎发生、发展中起重要作用。目的:观察透骨消痛胶囊含药血清对体外培养的膝骨性关节炎大鼠滑膜细胞表达尿激酶型纤溶酶原激活剂、尿激酶型纤溶酶原激活剂受体、纤溶酶原激活剂抑制剂、基质金属蛋白酶3、白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的影响,探讨透骨消痛胶囊防治膝骨性关节炎的作用机制。方法:采用4%木瓜蛋白酶注射关节腔复制大鼠膝骨性关节炎模型;胶原酶消化法原代培养正常滑膜细胞与骨性关节炎滑膜细胞,将所培养滑膜细胞分为正常组、模型组和透骨消痛胶囊组,前2组细胞用空白血清培养,透骨消炎胶囊用含药血清培养;透骨消痛胶囊含药血清作用骨性关节炎滑膜细胞72 h后,采用Western Blot法检测滑膜细胞中尿激酶型纤溶酶原激活剂、尿激酶型纤溶酶原激活剂受体、纤溶酶原激活剂抑制剂、基质金属蛋白酶3、白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α蛋白的表达。结果与结论:透骨消痛胶囊含药血清组尿激酶型纤溶酶原激活剂、尿激酶型纤溶酶原激活剂受体、基质金属蛋白酶3、白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α蛋白表达量均降低,纤溶酶原激活剂抑制剂表达量升高,与模型组相比均有显著性差异,提示透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的部分作用机制是有效抑制骨性关节炎滑膜细胞尿激酶型纤溶酶原激活剂、尿激酶型纤溶酶原激活剂受体、基质金属蛋白酶3、白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的表达,提高纤溶酶原激活剂抑制剂的表达。

参芪糖肾安胶囊含药血清对脂多糖损伤的肾小管上皮细胞活性、超微结构及NLR蛋白3炎性小体的作用机制

目的探讨参芪糖肾安胶囊含药血清对脂多糖(LPS)损伤的肾小管上皮细胞活性、超微结构及NLR蛋白3(NLRP3)炎性小体的影响。方法随机将HK-2细胞分为空白组(HK-2+75μL 7.5%空白血清)、LPS组(HK-2+LPS+75μL 7.5%空白血清)、低浓度组(HK-2+LPS+75μL 2.5%含药血清+75μL 7.5%空白血清)、中浓度组(HK-2+LPS+75μL 5%含药血清+75μL 5%空白血清)、高浓度组(HK-2+LPS+150μL 10%含药血清)。采用CCK-8法检测细胞存活率;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用电镜检测细胞的超微结构;采用蛋白质印迹检测细胞中NLRP3和caspase-1蛋白表达。结果与空白组相比,LPS组细胞存活率降低,凋亡率及细胞中IL-6、IL-1β、TNF-α水平增高,差异有统计学意义(P<0.05);与LPS组相比,低浓度组、中浓度组和高浓度组细胞存活率均增高,凋亡率及细胞中IL-6、IL-1β、TNF-α水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。LPS组较空白组出现明显的程序性坏死,细胞体积变大,胞膜大量破裂,细胞大量坏死;与LPS组相比,低浓度组、中浓度组和高浓度组细胞均有明显改善,坏死的细胞数量减少,仅可见少量细胞线粒体轻度肿胀和空泡样变,且呈剂量依赖性。与空白组相比,LPS组细胞中NLRP3和caspase-1蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);与LPS组相比,低浓度组、中浓度组和高浓度组细胞中NLRP3和caspase-1蛋白表达降低,且高浓度组细胞中NLRP3和caspase-1蛋白表达低于低浓度组和中浓度组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论参芪糖肾安胶囊含药血清可抑制LPS损伤的肾小管上皮细胞凋亡,增加细胞存活率,改善超微结构,抑制NLRP3炎性小体介导的炎性反应,对急性肾损伤发挥保护作用。

平消胶囊含药血清联合紫杉醇对乳腺癌细胞的作用及机制研究

目的:研究平消胶囊含药血清联合紫杉醇对乳腺癌细胞的作用及机制。方法:用平消胶囊灌喂大鼠以制备平消胶囊含药血清,分别用无药血清、平消胶囊含药血清、紫杉醇、平消胶囊含药血清联合紫杉醇处理乳腺癌MCF-7细胞株,分别依次为对照组、含药血清组、紫杉醇组、联合组。用MTT实验检测药物对乳腺癌细胞的抑制效果;用流式细胞仪检测细胞凋亡情况及周期变化;采用蛋白印迹法检测Bax、Bcl-2、Caspase-3、AMPK和P21蛋白的表达量。结果:与对照组相比,含药血清组、紫杉醇组和联合组中细胞增殖力均被显著抑制,但联合组更明显(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,与对照组相比,含药血清组、紫杉醇组和联合组肿瘤细胞周期G0/G1发生阻滞,细胞凋亡率增大,但联合组效果更显著(P<0.05)。与对照组相比,含药血清组、紫杉醇组和联合组中Bcl-2蛋白均显著下调(P<0.05),Bax和Caspase-3、AMPK和P21蛋白上调,联合组的效果更显著(P<0.05)。结论:平消胶囊含药血清联合紫杉醇可能通过激活AMPK信号通路,诱导凋亡,从而抑制乳腺癌细胞增殖。

透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞活性的影响

目的观察透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞活性的影响。方法 SD大鼠膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,第3代软骨细胞同步化后进行干预,分别确定含药血清的有效干预时间及干预浓度。各组含药血清在有效浓度作用下干预软骨细胞,在有效干预时间点采用MTT法。结果干预后,软骨细胞OD值干预72 h明显高于干预24 h、48 h、96 h(P<0.05);10%含药血清浓度组明显高于5%、20%含药血清浓度组(P<0.01)。确定72 h为有效作用时间,10%为有效作用浓度。在10%含药血清浓度的作用下干预72 h,第3代软骨细胞OD值,透骨消痛胶囊实验组明显高于空白组(P<0.01),实验2组增殖效果最明显(P<0.05)。结论透骨消痛胶囊含药血清能加速软骨细胞增殖,维持软骨细胞活性,其促进软骨细胞增殖作用与药物浓度有关,以中剂量药物浓度(含透骨消痛胶囊29 mg/d)为最佳。

透骨消痛胶囊含药血清对退变软骨细胞表达caveolin-1、p38MAPK的影响

目的观察透骨消痛胶囊含药血清对体外培养大鼠退变软骨细胞表达caveolin-1、p38MAPK的影响,探讨透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的作用机制。方法 4周龄SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,采用Ⅱ型胶原原位杂交法对第3代软骨细胞进行鉴定。用10 ng/mL IL-1β干预第3代软骨细胞复制退变软骨细胞模型。模型复制成功后,随机分为模型组和透骨消痛胶囊含药血清组,分别在培养24 h、48 h、72 h后用TaqMan real-time PCR和Western Blot法检测各组mRNA和蛋白的表达。结果透骨消痛胶囊含药血清组caveolin-1和p38MAPK基因、蛋白相对表达量随着干预时间的延长逐渐下降,统计均有显著性差异(P<0.05)。结论透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的部分作用机制是有效抑制退变软骨细胞caveolin-1、p38MAPK的表达。

化瘀消癥颗粒含药血清对HTR-8/SVneo增殖侵袭迁移及FGA、ITGB3表达的影响

目的研究化瘀消癥颗粒含药血清对人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SVneo)增殖、侵袭、迁移以及纤维蛋白原α链(fibrinogen alpha chain,FGA)、整合素β3(integrinβ3,ITGB3)表达的影响。方法CCK8法检测化瘀消癥颗粒含药血清干预HTR-8/SVneo细胞的增殖情况;Transwell、细胞划痕分别检测化瘀消癥颗粒含药血清(低、中、高浓度组)对HTR-8/SVneo细胞侵袭、迁移的影响;qRT-PCR检测FGA、ITGB3 mRNA表达;Western blot检测FGA、ITGB3蛋白表达。结果化瘀消癥颗粒含药血清高、中、低浓度组对HTR-8/SVneo细胞活性具有明显抑制作用。与对照组相比,各剂量化瘀消癥颗粒含药血清组对HTR-8/SVneo细胞增殖活性均有不同程度的抑制作用(P<0.05);不同剂量HTR-8/SVneo细胞穿过Transwell小室滤过膜数量均低于空白组,其中低剂量组HTR-8/SVneo细胞穿膜率最低(P<0.05)。化瘀消癥颗粒含药血清组FGA、ITGB3蛋白表达下调;低浓度化瘀消癥颗粒含药血清组FGA和ITGB3 mRNA表达下调,中、高浓度化瘀消癥颗粒含药血清组ITGB3 mRNA表达下调。结论化瘀消癥颗粒可能通过调控FGA/ITGB3通路抑制HTR-8/SVneo细胞粘附力,从而达到降低细胞活性的目的。

复方五仁醇胶囊含药血清指纹图谱研究

目的建立复方五仁醇胶囊含药血清指纹图谱,分辨该制剂给药后血中产生的共性的药源性成分,并对这些成分的来源作初步分析,为该制剂血清药化学研究奠定基础。方法大鼠分组灌胃给药制备10批含药血清,高效液相色谱法建立其指纹图谱,并与相同条件下测定的体外制剂和对照品的图谱比对,对其共有峰归属进行分析。结果标出10批含药血清色谱图除血清固有成分外的共有峰13个,其中8个为制剂原形成分,5个为代谢产物,鉴定出3个成分。结论本研究建立的方法准确、可靠,可用于复方五仁醇胶囊血清药化学研究。

复方五仁醇胶囊含药血清指纹图谱与保肝作用的谱效关系

目的:阐明复方五仁醇胶囊保肝作用的药效物质基础.方法:将大鼠灌胃给药分别制备复方五仁醇胶囊及五味子、三七、柴胡、叶下珠4味药的阴性制剂和单味制剂含药血清,对获得的9组含药血清按已经建立的指纹图谱条件进行HPLC测定,同时考察它们对CCL4诱导的损伤肝细胞的增值(MTT法)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)泄漏的影响,最后进行谱效关系分析.结果:指纹图谱显示,单味五味子及三七、柴胡、叶下珠阴性制剂含药血清中均检测到大鼠灌服全方制剂后血液中产生的13个药源性成分,而五味子阴性制剂及单味三七、柴胡、叶下珠含药血清中均未检测到药源性成分;药效结果显示,全方、单味五味子及三七、柴胡、叶下珠阴性制剂含药血清对肝细胞损伤均具有明显的保护作用,而单味三七、柴胡、叶下珠含药血清及五味子阴性制剂含药血清作用不明显,且单味五味子与全方制剂含药血清组之间药效无显著差异.谱效之间具有很好的相关性.结论:复方五仁醇胶囊保肝作用的药效物质基础主要来自君药五味子所含有的木脂素类成分.

消癌解毒方含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用

目的观察消癌解毒方的抗肿瘤作用机理。方法采用人肝癌细胞SMMC-7721,经过细胞培养、MTT法、流式细胞仪Annexin V-FITC法检测消癌解毒方含药血清对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。结果消癌解毒方具有良好的抑制肝癌细胞生长、促进凋亡的作用,尤其以高剂量组〔抑制率为35.8%,凋亡率为(23.0±1.6)%〕的效果最佳,作用程度与化疗药物顺铂〔抑制率为35.3%,凋亡率为(22.8±4.4)%〕相似(P>0.05)。结论消癌解毒方含药血清能抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长,作用机制需要进一步的研究。

银黄清肺胶囊含药血清体外抗流感病毒实验研究

目的:检测银黄清肺胶囊含药血清体外对A型流感病毒的抑制作用。方法:通过体外培养技术进行MDCK细胞培养,以A型流感病毒株感染狗肾细胞(MDCK细胞),采用中药血清学药理方法[1]及MTT[2-3]法,分预防给药(先加药物)、治疗给药(先加病毒)、及直接抑制给药(药物病毒同时加入)3种方式测定银黄清肺胶囊含药血清对A型流感病毒感染MDCK细胞病变的作用。结果:与相应浓度空白血清比较,各浓度银黄清肺胶囊含药血清与利巴韦林片含药血清组,预防、治疗、直接抑制3种给药方式中,A型流感病毒感染MDCK细胞OD值均明显增高(P<0.05);与相应浓度利巴韦林片含药血清组比较,各浓度银黄清肺胶囊含药血清对A型流感病毒感染MDCK细胞OD值无明显差别(P>0.05)。结论:银黄清肺胶囊含药血清体外可以抑制流感病毒在细胞内增殖。

复方五仁醇胶囊含药血清中木脂素类成分的UPLC-MS/MS分析

目的:分析复方五仁醇胶囊大鼠灌胃后消化吸收进入血液的木脂素类成分,以便与该制剂血清药理学研究相结合,阐明其药效物质基础。方法:采用UPLC-MS/MS方法,比较复方五仁醇胶囊含药血清、体外制剂、空白血清及对照品提取离子流色谱图(EIC),并通过质谱图相关离子峰分析,确认进入血液的木脂素类成分。结果:发现制剂中存在的五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素5个木脂素类成分进入血液。结论:这5个木脂素类成分很可能是复方五仁醇胶囊体内直接作用物质的重要组成部分,结合血清药理学作进一步研究有助于阐明该制剂药效物质基础。

银黄清肺胶囊含药血清体外抗呼吸道合胞病毒实验研究

目的研究银黄清肺胶囊含药血清体外抑制呼吸道合胞病毒(RSV)的作用。方法采用观察CPE及MTT法,观察在银黄清肺胶囊含药血清干预下,感染RSV Hep-2细胞的CPE及光密度值,从而比较不同给药方式(预防给药、治疗给药、直接杀灭)及不同药物剂量下银黄清肺胶囊对RSV的抑制作用。结果在三种给药方式中,与相应浓度空白血清比较,各浓度银黄清肺胶囊与利巴韦林片含药血清OD值均明显增高(P<0.05);其中稀释度为3.13%的利巴韦林片含药血清和稀释度为6.25%的银黄清肺胶囊含药血清相比本组其他浓度含药血清OD值均明显增高(P<0.05)。结论银黄清肺胶囊含药血清对RSV有直接灭活作用,对RSV侵入Hep-2细胞有阻断作用,对RSV在Hep-2细胞内增殖有抑制作用。其中稀释度为3.13%的利巴韦林含药血清和稀释度为6.25%的银黄清肺胶囊含药血清相比本组其他浓度含药血清体外抗RSV活性强。

益骨胶囊含药血清对共育体系中破骨细胞活性和凋亡的影响

目的:观察益骨胶囊含药血清在成骨-破骨细胞共育体系中对SD大鼠破骨细胞(OC)活性和凋亡的影响。方法:(1)取1d龄SD大鼠颅骨分离培养成骨细胞(OB),取5d龄SD大鼠四肢股骨、胫骨分离培养OC,建立细胞上清相通但细胞间不相互混杂的平面式成骨-破骨细胞共育体系,实验分为含药血清组和对照组;(2)将10月龄SD雌性大鼠分为益骨胶囊灌胃组和生理盐水对照组,制备含药血清和对照血清;(3)重氮盐法检测抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)和光镜观察骨陷窝数;(4)光镜和荧光显微镜下观察共育体系中OC凋亡情况。结果:含药血清组在48 h7、2 h9、6 h对成骨-破骨细胞共育体系中OC分泌TRACP的活性均明显降低于对照组,OC的存活数明显低于对照组,OC的凋亡率明显高于对照组且呈明显的时效关系;所形成骨吸收陷窝的数目明显低于对照组(P<0.01)。结论:益骨胶囊含药血清在共育体系中能够抑制OC活性,诱导破骨细胞的凋亡。

风湿宁胶囊含药血清对JAK2/STAT3信号通路及相关细胞因子的影响

目的:探讨风湿宁(FSN)胶囊含药血清对JAK2/STAT3信号通路及相关细胞因子的影响。方法:采用Real-time PCR和Western blot技术分别从基因和蛋白的角度来观察各组CIA-FLS细胞中P-JAK2、PSTAT3及其负反馈调节因子SOCS1和SOCS3的含量;采用Real-time PCR技术分别对各组CIA-FLS细胞中VEGF和RANKL的表达情况进行检测。结果:Tofacitinib含药血清+IL-6组、FSN含药血清+IL-6组CIAFLS细胞JAK2、STAT3的mRNA含量和蛋白表达都明显下降(P<0.05),该通路相关细胞因子VEGF和RANKLmRNA的含量也明显减少(P<0.05)。20%FSN含药血清+IL-6组CIA-FLS细胞SOCS3mRNA含量和蛋白表达上升(P<0.05),10%FSN含药血清+IL-6组中VEGF和RANKLmRNA的含量不同程度的减少(P<0.05)。结论:风湿宁胶囊含药血清可能通过对CIA-FLS细胞JAK2/STAT3信号通路的抑制作用进而影响了相关细胞因子VEGF和RANKL的表达,这也可能是风湿宁胶囊能够改善类风湿关节炎血管翳形成和骨破坏的机制之一。