猪β-防御素-2在黄曲霉毒素B1致小鼠肠道炎症损伤中的作用

旨在探究猪β-防御素-2(pBD-2)在黄曲霉毒素B1(AFB1)致鼠肠道损伤中的作用。本试验以4周龄KM小鼠为研究对象,将体重相近的30只健康小鼠随机均分为5组,分别为空白对照组(不做任何处理)、DMSO组(1%DMSO灌胃)、AFB1组(0.3 mg/kg AFB1灌胃)、pBD-2组(0.03 mg/kg pBD-2灌胃)和AFB1+pBD-2组(0.3 mg/kg AFB1灌胃28 d后再用0.03 mg/kg pBD-2灌胃28 d),试验持续56 d,通过观察小鼠肠道结构的变化以及采用qPCR和免疫荧光的方法检测炎症相关因子的表达水平。结果:与对照组相比,AFB1组小鼠的平均日增重(ADG)和平均日采食量(ADFI)均呈现显著下降趋势(P<0.05),料重比(F/G)降低,但差异不显著(P>0.05),而小鼠饲喂pBD-2以后ADG和ADFI均较AFB1组显著增加(P<0.05);HE染色结果显示,AFB1导致小鼠空肠黏膜显著损伤,并伴有严重的肠壁变薄,肠绒毛萎缩、稀疏,肠绒毛高度与隐窝深度之比、相对肠绒毛数量及肠壁厚度均显著降低(P<0.05),而使用pBD-2处理小鼠损伤模型,肠道结构可见显著恢复(P<0.05);qPCR和免疫荧光染色结果表明,AFB1处理小鼠可显著上调白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),但对白细胞介素-8(IL-8)的表达水平出现了下调趋势,而用pBD-2处理小鼠损伤模型后可显著下调炎症因子的表达水平,说明pBD-2对AFB1造成的肠黏膜炎症具有缓解作用。本研究结果为AFB1中毒的防控及pBD-2在畜牧生产中的应用提供了科学依据。

HPLC 法测定中药中黄曲霉毒素 B1、B2、G1、G2 的含量

目的:建立中药中的黄曲霉毒素 B1、B2、G1、G2的 HPLC 测定方法。方法:样品经有机溶剂提取、免疫亲和柱净化后,用高效液相色谱-柱后衍生-荧光检测器进行分析测定。结果:黄曲霉毒素 G2、B2在2.25-150pg 范围内线性关系良好,黄曲霉毒素 G1、B1在7.5-500pg 范围内线性关系良好,r>0.9999。回收率在60%-110%之间。结论:该方法快速简便,准确,可作为中药中黄曲霉毒素的含量测定方法。

HPLC同时测定食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2

目的:分析常见种类食物中黄曲霉毒素的含量,为建立食品中黄曲霉毒素的限量指标提供数据,并为大众的健康饮食提供参考。方法:以黄曲霉毒素B1的平均含量为参考选择黄曲霉毒素含量较多的常见食物种类,使用高效液相色谱仪及荧光检测器分析食物中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量。结果:花生酱中含有的黄曲霉毒素最多,平均为2.41μg/kg;大米中黄曲霉毒素的含量次之,平均为0.15μg/kg;花生中黄曲霉毒素的平均含量为0.04μg/kg。结论:高效液相色谱法测定食物中黄曲霉毒素其重现性较好,而且可以一次分别测定出黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量,从结果看来尽管多数食品中均含有黄曲霉毒素,但是其含量均没有超过国家限量标准,其中花生酱中的黄曲霉毒素含量较高。这些数据均可以为大众的健康饮食提供参考。

HPLC法检测发酵玉米粉中的黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2

发酵玉米粉用甲醇∶水(8+2,v+v)提取,经免疫亲合柱(IAC)分离纯化、在线光化学衍生器柱后衍生化后,反相HPLC荧光检测器测定AFT含量。4种毒素在0.5ng/g和2ng/g两个水平下的样品加标回收率平均值分别为B188.0%和93.6%、B285.2%和85.3%、G192.4%和91.5%、G289.6%和85.6%;5次测定的精密度SD值分别为:B12.5和6.3、B23.5和6.0、G12.8和9.0、G22.3和6.9;4种毒素的方法检出限均达到0.05ng/g;样品中4种毒素测定值分别为B1(102±5.4);B2(47±9.2);G1(63±7.4);G2(30±4.9)。

HPLC-MS/MS测定绿豆中黄曲霉毒素G_2、G_1、B_2、B_1

目的建立绿豆中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1的测定方法。方法样品经70%甲醇提取、HLB柱净化后,用高效液相色谱串联三重四极杆质谱进行分析测定。结果黄曲霉毒素G2、B2在0.75~30 pg范围内与峰面积呈良好的线性关系,黄曲霉毒素G1、B1在2.5~100 pg范围内与峰面积呈良好的线性关系,r〉0.999。回收率在61.5%~107.0%之间。结论本法简便快速、结果准确、重现性好,可用于绿豆中黄曲霉毒素的测定。

食品中的黄曲霉毒素(B_1B_2G_1G_2)HPLC法测定探讨

目的探讨高效液相色谱法测定食品中的黄曲霉毒素（B1、B2、G1、G2）的测定方法。方法样品经处理、净化、衍生后，采用不同比例的乙腈、水梯度洗脱，用带有荧光检测器的高效液相色谱仪测定。结果方法的检测限为AFT（B1、G1）1、5μg/kg；AFT（B2、G2）0．5μg/kg。四种黄曲霉毒素的回收率均在87．2％～101．3％，四种黄曲霉毒测定结果的RSD在1．17％～2．76％。结论方法简单、快速、准确，检出限低，回收率高。

17种植物性饲料原料中玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素B1、伏马毒素(B_(1)+B_(2))、赭曲霉毒素A污染调查检测分析及控制建议

为了解掌握玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素B_(1)、伏马毒素(B_(1)+B_(2))、赭曲霉毒素A在植物性饲料原料中的污染状况,指导帮助饲料、养殖企业开展霉菌毒素防控,减少这4种霉菌毒素对饲料、畜产品的危害,最大程度减少经济损失。2022年对17种59份植物性饲料原料进行调查采样,采用液相色谱—串联质谱法、免疫亲和柱净化—高效液相色谱法检测,依据《饲料卫生标准》(GB 13078-2017)判定分析。结果表明:玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素B1、伏马毒素(B_(1)+B_(2))、赭曲霉毒素A在17种植物性饲料原料中的污染状况不同。玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素B1、伏马毒素(B_(1)+B_(2))检出率分别为20.3%、23.7%、25.4%,最大检测值分别为0.784mg/kg、115μg/kg、27.736mg/kg;赭曲霉毒素A检出率为0。从检测结果得出:玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素B_(1)、伏马毒素(B_(1)+B_(2))3种霉菌毒素在17种植物性饲料原料中存在污染,整体污染率35.59%;分别有1种植物性饲料原料中玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素B_(1)超标,其他原料无超标,检出率与超标率不成正比。表明该4种霉菌毒素在植物性饲料原料中污染普遍,对饲料、养殖产品及消费安全造成严重影响和危害。针对该问题,提出控制植物性饲料原料质量安全的建议,为今后开展植物性饲料原料中4种霉菌毒素污染控制提供建议参考。

食品中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的超高效液相色谱—串联质谱检测

建立用超高效液相色谱-串联质谱检测器测定食品中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的方法。样品中残留的黄曲霉毒素经过乙腈(乙腈∶水=84∶16)提取,取经过4000 r/min离心机离心过的上层清液,经装有反相离子交换吸附剂的多功能净化柱,去除脂肪、蛋白质、色素及碳水化合物等干扰物质,氮吹定容后上机至液相质谱联用仪,根据色谱图出峰时间及与之相应标物的特征离子对作对比,对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2定性,再根据标准系列得出的标准曲线,换算出各黄曲霉毒素的含量。

玉米赤霉烯酮与黄曲霉毒素B1对HepG2细胞的联合毒性研究

研究了玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)及黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)单独及联合作用人肝癌HepG2细胞后,多参数细胞生物学指标的变化及凋亡相关靶点基因的表达,并使用效应相加模型对联合毒性方式进行评价。结果显示,ZEA及AFB1均呈时间、剂量依赖性地抑制HepG2细胞活力,其24 h的IC50分别为78.57和18.04μmol/L。与单独组相比,联合组显著(P<0.05)降低细胞活力并增加死亡率,提高细胞膜通透性、钙离子浓度、胞内活性氧(ROS)水平及DNA损伤程度。qRT-PCR结果显示ZEA及AFB1可通过显著(P<0.05)提高p53、Caspase-3、Bax的mRNA表达水平,同时显著(P<0.05)降低Bcl-2的表达来诱导HepG2细胞凋亡。对ZEA和AFB1的联合毒性作用方式进行评价,表现为协同作用。

超高效液相色谱法测定酱油中黄曲霉毒素B_1,B_2,G_1,G_2的含量

研究采用超高效液相色谱仪,配有FLR检测器,采用MycoSep 226多功能净化柱对酱油中的黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2进行测定,得到回收率在83%-105%之间,最小检出限为0.25μg/kg,相关系数均为0.999以上,RSD为2.2%-6.9%,净化效果好。该方法快速、简单、定量准确,能够广泛应用于日常检测工作中。

LC-MS/MS检测莲子中黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2的方法探讨

目的建立LC-MS/MS检测莲子中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的方法。方法收集5批莲子,采用高效液相色谱—串联四极杆质谱联用技术,多反应监测(MRM)模式进行定量检测。结果 1批发霉的莲子中检出黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2。结论该方法专属性强、灵敏度高,可用于莲子中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的同时测定。

高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中黄曲霉毒素G_2、G_1、B_2、B_1

建立了用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定水产品中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1残留量的方法。84%甲醇水溶液提取水产品中4种黄曲霉毒素,正己烷脱脂,HLB固相萃取柱净化。采用电喷雾电离,正离子扫描,选择多反应检测模式(MRM)监测,外标法定量。该法对4种黄曲霉毒素标准曲线的线性回归系数均在0.99以上,黄曲霉毒素G1、B1方法定量限为0.5μg/kg,G2、B2方法定量限为0.3μg/kg。4种黄曲霉毒素的回收率为56%～80%,相对标准偏差1.58%～14.4%。该法灵敏,结果可靠,可用于水产品中黄曲霉毒素的测定。

舒肝丸中的黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2的含量测定及安全性评价

目的:采用高效液相色谱法(HPLC)测定舒肝丸中黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2的含量,并评价舒肝丸中黄曲霉毒素安全性。方法:采用C_(18)柱,流动相为甲醇-乙腈-水(10∶30∶60),色谱柱资生堂C_(18)(150 mm×4.6 mm,5μm),紫外光灯(254nm)衍生,荧光检测器,激发波长λex=360 nm,发射波长λem=450 nm,并对全国流通领域的舒肝丸中黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2进行测定。结果:建立的HPLC法,黄曲霉毒素B_1、G_1在10~50 pg,黄曲霉毒素B_2、G_2在3~15 pg范围内线性良好;平均回收率分别为89.9%,87.9%,86.1%,87.1%,RSD均在3.0%以内。且经对全国流通领域的舒肝丸进行测定,结果全部样品的黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2含量均符合要求,合格率为100%,表明安全性较好。结论:该分析方法操作简便、快速、结果稳定、准确,可为舒肝丸的定量分析方法及安全性评价。

黄曲霉毒素B_1对雏鸡外周血T淋巴细胞亚群及血清IL–2和IFN–γ的影响

为探明黄曲霉毒素B1(AFB1)对雏鸡细胞免疫功能的影响,将100只1日龄艾维茵健康公雏鸡随机分为4组,分别喂以基础日粮(玉米–豆粕型基础日粮,对照)和AFB1日粮(基础日粮中AFB1的添加量分别为0.15、0.3、0.6 mg/kg,分别记为AFB1Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组),试验期21 d。以流式细胞术检测雏鸡外周血T淋巴细胞亚群变化;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测雏鸡血清IL–2和IFN–γ含量变化。结果显示,与对照组相比,AFB1Ⅱ和AFB1Ⅲ组7、14和21日龄雏鸡外周血CD3+,CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴细胞百分比下降明显(P<0.05或P<0.01),血清中IL–2和IFN–γ含量降低(P<0.05或P<0.01),AFB1Ⅰ组雏鸡14日龄的血清IL–2和7日龄的IFN–γ含量降低(P<0.05),表明摄食含黄曲霉毒素B1的日粮可导致雏鸡细胞免疫功能下降。

免疫亲和-衍生-LC测Aflatoxir 免疫亲和-柱后衍生-HPLC法测定黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2

本文采用免疫亲和柱净化结合柱后电化学衍生-HPLC方法，检测了玉米及花生酱中的4种黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2。4种黄曲霉毒素在0．1～10μg／L内线性相关系数R2〉0．99998，检出限（按S／N=3计算）为0．004-0．007μg／L。以10μg／L黄曲霉毒素标准溶液为考察对象，连续6针进样，得出4种黄曲霉毒素的保留时间相对标准偏差RSD〈0．1％，峰面积RSD〈0．3％。实验证明，该方法可有效用于玉米及花生酱等样品中黄曲霉毒素的测定。

HPLC-FLD法同时测定直服丹参粉中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2

目的:建立HPLC-FLD同时测定直服丹参粉中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的方法。方法:样品70%甲醇提取液的分析采用Inertsustain C_(18)色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),柱温:35℃,以甲醇-乙腈-水(40∶18∶42)为流动相,流速为1.0 mL/min,激发波长为360 nm,发射波长450 nm。结果:黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2线性范围分别为9.3~46.5 pg、3.0~15.0 pg、9.3~46.5 pg、3.5~17.5 pg,平均回收率分别为95.1%、90.2%、95.4%、93.3%,RSD分别为1.7%、2.2%、1.6%、1.3%,检测限分别为2.0、1.0、2.0、1.0 ng/kg。50批样品中有9批次检出黄曲霉毒素,检出率为18.0%,均符合相关参考限量标准。结论:该方法简便准确、重复性好,可用于丹参粉的质量控制。

黄曲霉毒素B1诱导性大鼠肝癌超微结构观察及HER-2表达变化

目的探讨黄曲霉毒素B1(AFB1)诱导性大鼠肝癌模型超微结构特征及HER-2 mRNA表达变化规律。方法用AFB1(400μg/kg)间断腹腔注射雄性Wistar大鼠制作肝癌模型,电镜观察大鼠肝组织超微结构。应用RT-PCR技术检测对照组大鼠肝组织,损伤病变、早期癌变和癌变肝组织中HER-2 mRNA的表达水平。结果本组大鼠肝癌模型中,肝细胞呈变性损伤、异型性到癌变;线粒体由增生肿胀到枯竭、空泡变;糖原颗粒呈渐减少等特征性变化。观察到典型肝细胞吞噬细胞现象。HER-2 mRNA在早期癌变、癌变肝组织中的表达水平均显著高于对照组大鼠肝组织和损伤病变肝组织(F=10.89,P=0.001;F=11.48,P=0.000)。结论AFB1诱导性大鼠肝细胞出现变性、异型性及癌细胞渐变的超微结构特征,HER-2异常表达参与AFB1诱导性大鼠早期肝癌的发生。

TiO_2光催化降解花生油中黄曲霉毒素B_1及其动力学研究

为了解负载型TiO_2对花生油中黄曲霉毒素B_1(aflatoxin B_1,AFB_1)紫外光催化降解及其动力学影响,在自制的光催化反应器中,采用负载型TiO_2对花生油进行降解。考察了煅烧温度、光照强度和循环速度对AFB_1降解效果和花生油品质的影响,并通过X-射线衍射和X-射线光电子能谱对TiO_2进行表征分析。结果表明:随煅烧温度增加,锐钛矿晶型衍射峰越来越尖锐,锐钛矿质量分数逐渐减小;400℃时,羟基氧和Ti^(3+)的含量均较高。光催化降解花生油中AFB_1符合准一级动力学模型,最佳工艺为煅烧温度400℃,光照强度26μmol·m^(-2)s^(-1),循环速度800 m L·min^(-1),反应120 min,AFB_1降解率可达73.02%。降解后花生油过氧化值和酸价符合国家标准。

肝癌细胞蛋白磷酸酶2A催化亚基在过氧化氢和黄曲霉毒素B1诱导急慢性肝癌细胞损伤模型中的表达及其对肝癌细胞的影响

目的探讨过氧化氢和黄曲霉毒素B1诱导肝癌细胞急慢性损伤后蛋白磷酸酶2A催化亚基(PP2A)的表达情况。方法采用不同浓度的过氧化氢(0、50、100、200、400、800μmol/L)或黄曲霉毒素B1(0、1.25、2.5、5、10、20、40μmol/L)诱导肝癌细胞(HepG2/Huh-7细胞)2、4、6、8和24、48 h后,倒置显微镜观察细胞形态,刃天青实验检测肝癌细胞活性,Western Blot检测去甲基化PP2A催化亚基C(PP2Ac)和总PP2Ac蛋白的表达情况。两组间比较用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析和析因设计资料两因素方差分析。结果HepG2/Huh-7细胞对过氧化氢和黄曲霉毒素B1诱导敏感,随着过氧化氢和AFB1浓度升高或孵育时间延长,细胞形态发生变化,数量减少。在2、4、6和8 h时间段,100μmol/L及以上浓度的过氧化氢诱导HepG2/Huh-7细胞后,随着过氧化氢浓度的升高,HepG2/Huh-7细胞活性逐渐下降,不同浓度过氧化氢与对照组(0μmol/L)比较,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。在4个不同时间段,两株细胞IC50用两因素方差分析比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05)。在24、48 h时间段,2.5μmol/L及以上浓度黄曲霉毒素B1诱导HepG2/Huh-7细胞后,随着浓度的升高,HepG2/Huh-7细胞活性逐渐下降,不同黄曲霉毒素B1浓度与对照组(0μmol/L)相比,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。在两个不同时间段,两株细胞IC50用两因素方差分析比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05)。用200μmol/L过氧化氢诱导HepG22 h后,总PP2Ac和去甲基化PP2Ac蛋白表达水平与对照组相比升高,差异均有统计学意义(t值分别为-5.553、-2.990,P值分别为0.005、0.040);400μmol/L过氧化氢诱导Huh-7细胞2 h后,总PP2Ac和去甲基化PP2Ac蛋白表达水平与对照组相比升高,差异均有统计学意义(t值分别为0.073、-5.149,P值分别为0.002、0.007)。用10μmol/L黄曲霉毒素B1诱导HepG2细胞2 h后,总PP2Ac和去甲基化PP2Ac蛋白表达水平与对照组相比升高,差异均有统计学意义(t值分别为-4.561、-5.788,P值分别为0.010、0.004);20μmol/L黄曲霉毒素B1诱导Huh-7细胞2 h后,总PP2Ac和去甲基化PP2Ac蛋白表达水平与对照组相比升高,差异均有统计学意义(t值分别为-5.120、-6.144,P值分别为0.007、0.004)。结论过氧化氢和黄曲霉毒素B1诱导肝癌细胞急慢性损伤后细胞形态发生变化,细胞活性降低,总PP2Ac和去甲基化PP2Ac蛋白表达升高。