一种黄曲霉毒素M_1快速检测试纸条检测性能的评估

黄曲霉毒素是天然产生的真菌毒素,是饲料的主要污染源之一。本文对黄曲霉毒素M1快速检测试纸条检测性能指标充分评估,确认其是否符合欧盟CRL Guidelines 2010和519/2014/EC标准。基于欧盟参考实验室方案CRL Guidelines 2010对检测试纸条的精密度、特异性、假阳性率和假阴性率、重复性、稳定性、样本差异影响、批间差异及试剂盒稳定性分别检测,并通过胶体金读数仪对检测数据分析。结果发现:该黄曲霉毒素M1检测试纸条可在10 min中检测牛奶中的黄曲霉毒素M1,肉眼判读定性检测灵敏度为50 ng/L;试纸条特异性良好,除黄曲霉毒素M2(交叉反应为0.86%)外,与呕吐毒素、赭曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素B1等交叉反应均小于0.5%,其余无交叉反应。用胶体金读数仪分析时,试纸条检测灵敏度为21.58 ng/L,定量限为58.11 ng/L;检测60个添加浓度为50 ng/L的牛奶样本时平均值为49.07 ng/L,标准差为6.45 ng/L。因此,该试纸条可作为定性筛选方法检测牛奶中的黄曲霉毒素M1污染,检测能力满足欧盟MRL(50 ng/L)要求。

两种常用适配体的纳米金比色法快速检测牛奶中黄曲霉毒素M_(1)的评价研究

目的:建立基于不同序列长度适配体的纳米金(Gold nanoparticles,AuNPs)比色传感法快速定量检测牛奶中的黄曲霉毒素M_(1)(Aflatoxin M_(1),AFM_(1)),并评价目前文献报道中常用的21(A21)和72个碱基(A72)长度的AFM1适配体在实际样品中的检测性能。方法:采用柠檬酸钠还原法制备AuNPs溶液,加入AFM1适配体及AFM1标准品后,适配体与AFM1特异性结合形成特殊三维结构,随着NaCl溶液加入,AuNPs溶液的稳定性被破坏而发生聚集,导致溶液颜色变化,通过测定AuNPs溶液的吸光值和吸收光谱定量检测AFM1。结果:通过优化适配体浓度、NaCl浓度、反应温度及pH等实验条件,基于适配体A21和A72的AuNPs比色传感法检测AFM_(1)的检测限分别为25.26和5.77μg/L,线性范围均为10~800μg/L,且均具有良好的选择性及特异性,在牛奶中的加标回收率分别为95.7%~103.6%、94.3%~98.2%。结论:A72检测牛奶中AFM1的效果优于A21,可能与适配体长度、构型及亲和性相关。基于适配体A72建立的比色传感法简单、快速、灵敏、特异性强且可视化,为AFM1适配体在乳制品中的应用提供数据参考。

基于金-二硫化钼(Au-MoS_(2))复合材料的电化学传感器检测黄曲霉毒素M_(1)

黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))是影响乳及乳制品安全的主要因素之一。AFM_(1)具有毒性和强致癌性,且在生产过程中难以消除,令消费者的身体健康受到严重威胁。因此,该研究基于金-二硫化钼(Au-MoS_(2))复合材料构建电化学适配体传感器用于牛奶中AFM_(1)检测。分别采用滴涂法和电沉积法将MoS_(2)和纳米金颗粒修饰在玻碳电极表面,从而得到Au-MoS_(2)复合材料修饰的电极。Au-MoS_(2)复合材料修饰电极增加了电极导电性,同时二茂铁(ferrocence,Fc)标记的适配体通过Au—S固定在Au-MoS_(2)复合材料表面,提高了识别元件适配体的负载量。当存在目标物AFM_(1)时,适配体形成一定构象识别AFM_(1),导致Fc信号变化,从而实现对AFM_(1)的定量检测。研究结果表明,MoS_(2)的质量浓度为3.0 mg/mL,沉积电位为-0.2 V,沉积时间为480 s,氯化金浓度为14 mmol/L时,Au-MoS_(2)复合材料修饰后的电极性能最佳。同时,以0.3μmol/L的适配体,Mg^(2+)的浓度为0.01 mol/L的条件下与AFM_(1)孵育1.5 h,Fc的响应电流信号最佳。在上述条件下构建电化学适配体传感器的线性范围为0.015~0.8μg/L,检出限为0.014μg/L。特异性研究结果表明,与干扰毒素(AFM_(2)、AFB_(1)、AFG_(1)、AFG_(2))相比,该传感器对AFM_(1)的响应较高,说明该传感器具有良好的特异性,有良好的应用前景。

食品中黄曲霉毒素M_(1)的间接竞争酶联免疫法的建立

该文建立一种间接竞争酶联免疫法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)快速测定食品中黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))的分析方法。AFM_(1)标准品用甲醇稀释,AFM_(1)标准品与AFM_(1)全抗原竞争结合AFM_(1)单克隆抗体,利用3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine,TMB)单组分显色液显色后,酶标仪测定吸光度。在优化好的条件下,浓度范围为9.743~2.605×10^(3)pg/mL时具有良好的线性关系,相关系数(determination coefficient,R^(2))为0.9927,检出限IC_(10)为3.84 pg/mL,加标回收率为88.43%~105.75%。该方法适用性好、操作简单、灵敏度高,满足食品中AFM_(1)分析检测的需求。

高效液相色谱法测定牛奶中黄曲霉毒素M_(1)的不确定度评定

高效液相色谱法测定牛奶中黄曲霉毒素M_(1)检测结果的不确定度主要来自待测物称量、待测物定容体积、标准溶液配制、高效液相色谱仪以及方法的回收率这5项因素。本文通过大量的实验数据分析得出了牛奶中黄曲霉毒素M_1的含量基本水平在0.2015μg·L^(-1),牛奶中黄曲霉毒素M_(1)含量的不确定度为:X=(0.2015±0.0076)μg·L^(-1),k=2。

含水量对新疆鲜食核桃贮藏期黄曲霉生长及黄曲霉毒素M_(1)积累的影响

目的:提高新疆鲜食核桃的贮藏安全性。方法:以新疆“新2”薄皮核桃为材料,无菌水接种为对照组,黄曲霉菌接种为试验组,将从自然霉变核桃上分离纯化出的黄曲霉菌人工接种至不同含水量(10%,15%,20%,25%,30%)的新疆薄皮鲜食核桃上,探究黄曲霉菌生长量及产毒变化情况。结果:最适宜黄曲霉菌生长繁殖并分泌黄曲霉毒素M_(1)的核桃含水量为15%;随着核桃含水量的升高,黄曲霉菌生长量呈先上升后下降趋势,但各含水量之间的生长量各不相同,且黄曲霉菌生长量与产生黄曲霉毒素M_(1)的量成正比。结论:原料的含水量与黄曲霉菌生长量及产生黄曲霉毒素M_(1)的量有着密切的关系。

磁性纳米颗粒对牛奶黄曲霉毒素M_(1)的检测研究

首先采用共沉淀方法制备了Fe_(3)O_(4)磁性纳米颗粒,并使用3-氨丙基三乙氧基硅烷对纳米颗粒表面进行修饰。通过抗体的偶联反应,成功制备Ab-NH_(2)-Fe_(3)O_(4)磁性纳米颗粒。研究了不同脂肪含量的牛乳对检测结果的影响,结果显示,在3个不同的加标水平下,AFM 1在全脂牛乳、低脂牛乳和脱脂牛乳中的加标回收率均高于90%,回收率随脂肪含量的波动变化极小,并且Ab-NH_(2)-Fe_(3)O_(4)磁性纳米颗粒表现出对于AFM_(1)良好的特异性分离富集能力。

UPLC法测定婴幼儿配方奶粉中黄曲霉毒素M_(1)

目的:研究婴幼儿配方奶粉中黄曲霉毒素M_(1)的超高效液相色谱测定方法。方法:样品经甲醇-水溶液提取,上清液稀释,经免疫亲和柱净化和富集,再氮吹复溶后,用超高效液相色谱仪(荧光检测器)分析测定。结果:黄曲霉毒素M_(1)在0.0515~5.1500 ng·mL^(-1)线性良好,回归方程为Y=4.00×10^(5)X-8.74×10^(3),相关系数为0.999867,检出限为0.02μg·kg^(-1),定量限为0.05μg·kg^(-1);加标回收率在81.0%~90.3%,变异系数为0.72%~3.18%,且正确度较好。结论:该方法灵敏度高、准确性好,适用于测定婴幼儿配方奶粉中黄曲霉毒素M_(1)的测定。

酶联免疫法测定乳粉中黄曲霉毒素M_(1)含量的不确定度评定

[目的]讨论乳粉中黄曲霉毒素M_(1)含量ELISA(酶联免疫法)检测法结果不确定度的量化和评定。[方法]通过建立数学模型,结合鱼骨图分析引入不确定度的各项目因素,并将其引入的不确定度进行具体量化和比较,得到按照置信水平95%,包含因子k=2,则乳粉中黄曲霉毒素M_(1)测定的扩展不确定度为:0.023μg/kg。[结果]采用ELISA法测定乳粉中黄曲霉毒素M_(1)含量结果应表示为0.480±0.023μg/kg。其中,对该不确定度影响较大的因素是标准曲线拟合引入的不确定度。[结论]以后该项检验中,可酌情增加标样或质控样的测试次数,减少该项引入的不确定度对检验结果影响。

生乳中黄曲霉毒素M_(1)快速检测方法的比对

[目的]分析酶联免疫吸附法(ELISA)测定生乳中黄曲霉毒素M_(1)残留量结果的重现性、回收率和精密度,以及胶体金免疫层析法与其结果的呼应度,证实2种方法联合使用的可行性。[方法]用胶体金快速检测试纸条对生乳样品中的黄曲霉素M_(1)进行检测,并用黄曲霉毒素M_(1)ELISA检测试剂盒(鲜奶检出下限为0.018μg/kg)做对照试验。[结果]胶体金快速检测试纸条对生乳中不同浓度黄曲霉毒素M_(1)残留量的检测结果呈现梯度效应,并能与ELISA检测试剂盒的定量检测结果呼应。ELISA法对生乳中黄曲霉毒素M_(1)不同浓度残留量的定量试验结果重现性较好,具有较高的稳定性。回收率为94.83%~100.53%,RSD值在1.11%~3.01%之间。[结论]2种快速检测方法对生乳中黄曲霉毒素M_(1)的测定便捷快速,结果稳定准确、可信度高,可作为乳品企业日常快速进行原奶验收工作的基础数据参考。

超高效液相色谱-串联质谱法测定牛奶中的黄曲霉毒素M_1

目的建立超高效液相色谱-串联质谱测定牛奶中黄曲霉毒素M_1的方法。方法采用Acquityuplc BEH C_（18）液相色谱柱（50 mm×2.1 mm,1.7μm）,梯度洗脱,多反应监测（MRM）。通过黄曲霉毒素M_1与免疫亲和柱中抗体结合,确定了从牛奶中提取黄曲霉毒素M_1的处理条件并优化了质谱的测定参数。结果黄曲霉毒素M_1在0.1-10.0 ng/ml的范围内线性良好,其回归标准曲线方程的相关系数为0.997 8,回收率94.8%-98.2%,RSD为2.34%-3.87%,方法定量限为0.005μg/kg。结论提供了一种有效检测牛奶中黄曲霉毒素M_1的方法。

生鲜乳中黄曲霉毒素M_(1)检测方法研究

通过采用《GB5009.24-2016食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素M族的测定》中高效液相色谱法来测定生鲜乳中黄曲霉毒素M1的含量,在测定过程中使用免疫亲和柱法进行精确定性、定量,然后对生鲜乳及其加标的阳性样品中的黄曲霉毒素M1含量进行测定。结果显示,待测组分的标准系列工作溶液线性关系良好(R^(2)=0.9995),加标回收率为95.00%~105.00%,相对标准偏差为0.50%~2.00%。结果表明,本方法结果准确、重复性好,可用于生鲜乳中黄曲霉毒素M1的检测。

基于还原氧化石墨烯的电化学适配体传感器对黄曲霉毒素M_(1)的检测

本实验基于还原氧化石墨烯(RGO)构建了一种用于黄曲霉毒素M_(1)(AFM_(1))检测的电化学适配体传感器。采用红枣汁还原氧化石墨烯(GO)制备RGO,RGO通过滴涂法修饰在玻碳电极(GCE)表面,利用电沉积法将纳米金修饰在RGO/GCE上,AFM_(1)的适配体(Apt)通过Au-S键固定在Au NPs/RGO/GCE电极表面用于靶标AFM_(1)的捕获。当AFM_(1)存在时,AFM_(1)与适配体特异性结合形成AFM_(1)-Apt复合物,该复合物阻碍了电子的传递,导致电化学信号减弱。对RGO的制备条件进行优化,利用差示脉冲伏安法(DPV)监测电极表面的电化学信号,并对不同类型的毒素(黄曲霉毒素B_(1)、黄曲霉毒素B_(2)、赭曲霉毒素A和伏马毒素B_(1))、不同浓度的AFM_(1)(1×10^(-7)~5×10^(-4) ng/mL)以及羊乳样品进行检测以确定电化学适配体传感器的特异性、灵敏性和实用性。结果表明,GO:红枣汁=2:1(V:V),pH=11时所制备的RGO的导电能力最强。传感器的电信号与AFM_(1)浓度的对数呈线性关系,检测范围为1×10^(-7)~5×10^(-4) ng/m L,检测限为3.3×10^(-5) pg/mL,同时所建立的方法仅对AFM_(1)的检测有响应,而对干扰毒素无响应,说明电化学适配体传感器的特异性良好。使用建立的AFM_(1)电化学适配体传感器对羊奶中的AFM_(1)含量进行测定,发现所构建的传感器具有很高的灵敏性和良好的选择性,有望应用于食品工业中真菌毒素的快速、准确检测当中。

黄曲霉毒素M_(1)与赭曲霉毒素A对小鼠肠道内微生物菌群结构的影响

本试验旨在研究黄曲霉毒素M_(1)(AFM_(1))与赭曲霉毒素A(OTA)对小鼠肠道内微生物菌群结构的影响。试验选用健康的48只4周龄ICR小鼠,随机分成4组,每组12只,对照组灌胃1%二甲基亚砜(DMSO)溶液,AFM_(1)组灌胃3.5 mg/kg BW AFM_(1),OTA组灌胃3.5 mg/kg BW OTA,AFM_(1)+OTA组灌胃3.5 mg/kg BW AFM_(1)+3.5 mg/kg BW OTA,每天灌胃1次,连续灌胃35 d。灌胃结束后,采用16S rRNA测序对小鼠结肠微生物多样性进行分析。结果表明:与对照组相比,AFM_(1)与OTA处理后,不论单独或者混合处理都会导致厚壁菌门、乳杆菌科、乳酸菌属、益生菌拟普雷沃菌属相对丰度显著降低(P<0.05);拟杆菌门、变形菌门、瘤胃球菌科、肠杆菌科、梭菌属相对丰度显著增加(P<0.05)。综合试验结果表明,AFM_(1)、OTA单独及联合处理均改变了小鼠肠道内微生物菌群结构,损伤了肠道微生物屏障功能。

基于群青蓝纳米粒子的免疫层析法快速检测牛奶中的黄曲霉毒素M_(1)

目的建立一种基于群青蓝纳米粒子的免疫层析法(immunochromatographic assay,ICA)快速检测牛奶中的黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))的方法。方法通过离心筛选出合适粒径的群青蓝纳米粒子,经羧基化修饰后与AFM_(1)单克隆抗体通过碳二亚胺法共价偶联,制备免疫探针,用于AFM_(1)检测。实验结果通过肉眼观察并结合Image J软件进行定性定量分析,并对所建立方法的灵敏度、特异性进行评价。结果经条件优化后,该方法定性视觉检出限为0.30 ng/mL,定量限为0.051 ng/mL,与其他真菌毒素无交叉反应,具有良好的特异性。结论该方法可应用于牛奶样品中AFM_(1)检测,样品检测结果符合国家限量标准,同时操作简单、检测快速、易于判断,适用于现场快速初步筛查。

高效液相色谱法测定奶粉中黄曲霉毒素M_(1)的不确定度评定

利用高效液相色谱法测定奶粉中黄曲霉毒素M_(1)含量,对测定结果的不确定度进行评定。通过实验步骤和定量方法建立数学模型,分析不确定度来源,计算合成不确定度和扩展不确定度。结果表明,标准溶液配制、重复性测量、样品处理对测定结果的不确定度贡献较大。在实际工作中,可以通过选择A级标准玻璃器具、优化样品处理方法、重复测定样品来减小结果的不确定度,提高检测结果的准确性。当样品中黄曲霉毒素M_(1)的质量分数为0.522μg/kg时,其扩展不确定度为0.027μg/kg(k=2)。

QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱法测定乳粉中黄曲霉毒素B_(1)和M_(1)

建立了QuEChERS结合高效液相色谱-串联质谱测定乳粉中黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))和黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))的检测方法。乳粉用水复溶,乙腈提取,十八烷基键合硅胶和无水硫酸镁净化,在InertSustain-C_(18)柱(2.1 mm×150 mm,3μm)上分离,乙酸铵溶液-甲醇为流动相,梯度洗脱,电喷雾正离子模式扫描,多反应监测,基质添加外标曲线定量。乳粉中AFB_(1)和AFM_(1)在0.08~20μg/kg范围内线性关系良好,r>0.999。检出限为AFM_(1)0.02μg/kg,AFB_(1)0.03μg/kg,定量限均为0.05μg/kg。在定量限的1、5和10倍添加浓度下,平均回收率为91.5%~100.7%。本方法便捷高效、重现性好、结果准确,可以为日常检测乳粉中黄曲霉毒素提供技术参考。

液相色谱-三重四级杆串联质谱法测定液态乳中黄曲霉毒素M_(1)含量

本研究建立了液态乳中黄曲霉毒素M_(1)的液相色谱-三重四级杆串联质谱测定方法。在定量称量的样品中加入乙腈直接稀释定容,经过涡旋振荡,在高速冷冻离心机上离心,将离心后的上清液过针式过滤器过滤,然后直接注入液相色谱串联质谱仪中进行检测。利用ESI源(正离子模式)、C_(18)液相色谱柱以及SRM方法对样品中的黄曲霉毒素M_(1)进行定性、定量分析。该方法测定结果的相对标准偏差小于7%(n=6),平均回收率大于85%,线性范围为1~10ng/mL,最低检出限为0.011ng/mL。

高效液相色谱法测定运动营养食品中黄曲霉毒素M_(1)方法研究

目的:建立运动营养食品中黄曲霉毒素M_(1)的HPLC的检测方法。方法:样品经提取、过免疫亲和柱净化,再氮吹复溶后用高效液相色谱法测定其中黄曲霉毒素M_(1)的含量。结果:黄曲霉毒素M_(1)在0.05~5.00 ng/mL线性良好,回归方程Y=34616X-68.307,相关系数R^(2)=1,平均回收率为96.78%,检出限为0.07μg/kg。结论:该试验所用方法简单方便,重现性较好,回收率较好,精密度良好,可用于运动营养食品中黄曲霉毒素M_(1)含量的测定。

牛奶中黄曲霉毒素M_(1)残留检测技术的研究进展

牛奶中黄曲霉毒素M_(1)残留对人们健康存在很大危害,因此探索黄曲霉毒素M_(1)残留的检测技术的研究具有重要的意义。本文介绍的黄曲霉毒素M_(1)残留的检测技术有金标试纸法、原位衍生荧光法、液相色谱法,电子鼻法以及光学免疫传感器法。