黄柏提取物对采后梨果实PAL、CHT及GLU的诱导

以鸭梨(Pyrus bretschneideri Rehd.)果实为试材,用黄柏提取物进行处理,研究黄柏提取物对梨果实苯丙氨酸解氨酶(PAL)、几丁质酶(CHT)与β-1,3-葡聚糖酶(GLU)活性的诱导情况及对梨果实褐腐病的防治效果。结果表明:梨果实用黄柏提取物处理后,PAL、CHT活性均有不同程度地提高,GLU活性下降被延缓;黄柏提取物对梨褐腐病具有很好的抑制效果。

黄柏提取物小檗碱对大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生及炎性因子的影响

目的探讨黄柏提取物小檗碱对大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生及炎性因子的影响。方法采用体质量350～400g雄性Wistar大鼠制备颈动脉球囊损伤模型，将40只成模大鼠随机分为模型组和小檗碱组各20只，其中小檗碱组给予小檗碱2．5mg／kg腹腔注射，每天1次，连续14d。另取20只雄性Wistar大鼠仅行颈部切开作为假手术组。实验结束后处死各组大鼠并取左侧颈动脉，经石蜡包埋后进行HE染色，观察病理形态并比较各组血管内膜面积、中膜面积及内膜与中膜面积的比值（I／M），采用酶联免疫吸附法检测各组血清炎症因子[单核细胞趋化因子-1（MCP-1）、C反应蛋白（CRP）、转化生长因子-β（TGF—β）和前列腺素E2（PGE2）]水平，同时采用实时定量PCR法检测左侧颈动脉标本中炎症反应限速酶环氧化酶-2（COX-2）mRNA和磷脂酶A，mRNA水平。结果假手术组血管无内膜增生，且光滑完整；模型组出现严重血管内膜增生，且发生严重管腔狭窄；小檗碱组血管内膜增生受抑制，管腔狭窄获显著缓解。模型组新生血管内膜面积、I／M及血清MCP—1、CRP、TGF—β、PGE2水平和左侧颈动脉COX-2mRNA和磷脂酶A，mRNA水平均明显高于假手术组（P均〈0．05）；小檗碱组上述指标均明显低于模型组（P均〈0．05），但除CRP与假手术组比较差异无统计学意义外（P〉0．05），其余指标水平均明显高于假手术组（P均〈0．05）。结论黄柏提取物小檗碱可抑制大鼠颈动脉球囊损伤后血管内膜增生及炎性反应，可能与其抑制炎症反应限速酶的表达水平有关。

黄柏提取物对大鼠心肌损伤的保护作用

目的:探讨黄柏水提物和醇提物对垂体后叶素和盐酸异丙肾上腺素致大鼠心肌损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法:将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、复方丹参片组、黄柏水提组、黄柏醇提组,建立垂体后叶素和盐酸异丙肾上腺素大鼠心肌损伤模型,检测血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性、心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:与正常对照组比较,垂体后叶素建立的大鼠心肌损伤模型组血清LDH活性、CK活性和心肌组织MDA含量明显升高,心肌组织SOD活性明显降低(P<0.01);盐酸异丙肾上腺素建立的大鼠心肌损伤模型组心肌组织MDA含量明显升高,心肌组织SOD活性明显降低(P<0.01)。与垂体后叶素建立的大鼠心肌损伤模型组相比较,各给药组血清LDH活性、CK活性和心肌组织MDA含量明显降低,心肌组织SOD活性明显升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与盐酸异丙肾上腺素建立的大鼠心肌损伤模型组相比较,各给药组心肌组织中MDA含量明显降低,SOD活性明显升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:黄柏提取液对垂体后叶素和盐酸异丙肾上腺素引起的大鼠心肌损伤有一定保护作用。

黄柏提取物在体外对Vero细胞单纯疱疹病毒1型的抑制作用

目的:观察黄柏提取物在体外对单纯疱疹病毒1型的抑制作用。方法:以HSV-1型病毒感染Vero细胞,检测黄柏提取物对单纯疱疹病毒1型(HSV-1)引起的细胞病变的抑制作用,并用阿昔洛韦作对照。结果:黄柏提取物抗病毒的作用优于西药阿昔洛韦组(P<0.05)。结论:黄柏提取物浓度范围0.31～10mg/ml,对10-2和10-5稀释度HSV-1(Sm44株)所致的Vero细胞病变有剂量依赖性抑制作用,IC50值分别为4.19和1.12mg/ml。

黄柏提取物对Aβ_(1-42)诱导的海马神经细胞的影响

目的:探讨黄柏提取物对Aβ_(1-42)诱导的海马神经细胞的影响及分子机制。方法:分离培养海马神经细胞,将其分为对照组、模型组、模型+黄柏低、中、高浓度组、模型+si-NC组、模型+si-X失活的特异性转录本(XIST)组、模型+黄柏高浓度+pcDNA组、模型+黄柏高浓度+pcDNA-XIST组。MTT检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;Western blot法检测Cleaved-caspase3蛋白表达;RT-qPCR检测XIST表达水平。结果:模型组细胞存活率、S期细胞比例降低,G_(0)-G _(1)期细胞比例、XIST表达水平、凋亡率、Cleaved-caspase3表达水平升高(P<0.05)。不同浓度黄柏提取物处理及抑制XIST表达后,细胞存活率、S期细胞比例升高,G_(0)-G _(1)期细胞比例、XIST表达水平、凋亡率、Cleaved-caspase3表达水平降低(P<0.05)。过表达XIST减弱了黄柏提取物对Aβ_(1-42)诱导的海马神经细胞增殖、凋亡的影响。结论:黄柏提取物抑制Aβ_(1-42)诱导的海马神经细胞凋亡,可能与下调XIST相关。

乳酸链球菌素与一种苦参黄柏提取物的抑菌效果研究

目的研究乳酸链球菌素(nisin)与一种苦参黄柏提取物联合应用的抑菌效果。方法采用抑菌试验研究nisin与苦参黄柏提取物单独用药时对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌效果,采用两因素三水平正交试验设计和分级抑制浓度指数,探索nisin与苦参黄柏提取物的联合抑菌效果。结果nisin对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的最低抑菌浓度分别为0.9375、7.5 mg/ml;苦参黄柏提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的最低抑菌浓度分别为3.125%、6.25%,nisin与苦参黄柏提取物联合应用后对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌效果都为0.5<FIC指数≤1.0,表现均为协同作用。结论nisin与苦参黄柏提取物联合应用时,相比两者单独用药,抑菌效果得到增强。

知柏药对原料提取物对小鼠糖尿病周围神经病变的药效作用

【目的】探讨知柏药对原料的提取物对小鼠糖尿病周围神经病变的药效学作用。【方法】采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ,剂量为30 mg/kg)联合喂食高脂饲料诱导小鼠糖尿病模型,将160只雄性C57BL/6j小鼠随机分为8组,每组20只,分别为正常组,模型组,二甲双胍组(剂量为130 mg/kg),血脂康组(剂量为200 mg/kg),知母提取物高、低剂量组(剂量分别为360、90 mg/kg),黄柏提取物高、低剂量组(剂量分别为135、45 mg/kg),给药24周。分别在给药8周、16周、24周时,测定血浆葡萄糖(GLU)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、胰岛素(INS)水平;给药10周时,进行葡萄糖糖耐量试验(OGTT);给药24周时检测血浆核因子-κB(NF-κB)活性和转化生长因子β1(TGF-β1)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平。【结果】注射STZ 5周后,与正常组比较,模型组体质量先升高后明显下降,而空腹血糖显著升高(P<0.05)。与正常组比较,模型组小鼠FBG、TC、TG、LDL-C、INS水平均显著性升高(P<0.01或P<0.001);血浆NF-κB活性、TGF-β1及SOD水平显著升高,GSH水平显著下降,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.001);与模型组比较,知母提取物高、低剂量组,黄柏提取物高、低剂量组小鼠的FBG、TC、TG、LDL-C、INS水平均有不同程度降低;经连续给药后,知母提取物高剂量组、黄柏提取物高剂量组小鼠血浆中NF-κB活性,TGF-β1及SOD水平均显著降低(P<0.05或P<0.001),血浆GSH水平显著升高(P<0.01)。【结论】知柏药对原料的提取物降糖效果明显,对糖尿病模型小鼠的糖尿病周围神经病变具有明显的保护作用。

黄柏萃取物的抑菌活性及其正丁醇萃取物化学成分分析

研究了黄柏提取物抑菌效果最强萃取相的抑菌活性及化学成分,以期为新型植物源杀菌剂的开发奠定基础。采用超声波辅助醇提取法制备黄柏提取物,依次用等体积的石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取,采用菌丝生长速率法测定各萃取相的抑菌活性,采用GC-MS分析抑菌效果最强萃取相的化学成分。结果表明正丁醇萃取相的抑制作用最强,抑菌率为84.46%,最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)为20 mg/mL、半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,EC50)值为6.480mg/m L。GC-MS分析结果显示,从正丁醇萃取相中分离鉴别出26种化合物,以生物碱、有机酸、苷类、酰胺类等为主,其中相对含量最高的成分是5-(2-噻吩基)-4-嘧啶胺,占52.85%。黄柏枝皮提取物抗真菌活性成分主要存在于正丁醇部位,以生物碱类化合物为主,推测生物碱类化合物是黄柏枝皮抑制植物真菌病害的主要抑菌活性成分,为今后研究黄柏在植物源杀菌剂方面的开发与应用提供了基础和参考依据。

黄柏中总生物碱的制备工艺研究

目的研究优选黄柏中总生物碱的制备纯化工艺条件,为新药研究奠定基础。方法采用紫外分光光度法建立黄柏总生物碱含量分析方法;黄柏总生物碱提取物采用溶剂法制备纯化,以生物碱的含量为指标,按照正交试验法优选纯化工艺参数。结果黄柏总生物碱含量测定方法准确、方便可行;影响黄柏纯化工艺因素的顺序为:醇洗次数>乙醇浓度>乙醇用量,黄柏的最佳纯化工艺为:用相当于沉淀40倍量的80%的乙醇洗4次。结论该纯化工艺适合于黄柏的工业化大生产,操作简便,稳定可控。

HPLC-UV-ELSD同时测定知母黄柏药对提取物中盐酸小檗碱、黄柏碱、知母皂苷BⅡ

目的:建立知母黄柏药对提取物中盐酸小檗碱、黄柏碱、知母皂苷BⅡ的HPLC-UV-ELSD含量测定方法。方法:采用HPLC-UV-ELSD方法,色谱柱:Dikma C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.2%冰醋酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,柱温30℃,UV检测波长280 nm,蒸发光散射检测器检测,漂移管温度46℃,氮气压力1.5 Bar。结果:盐酸小檗碱、黄柏碱及知母皂苷BⅡ的线性范围分别是1.008～3.528μg(r=0.999 5),0.322～1.127μg(r=0.999 6),0.702～2.457μg(r=0.999 8),平均加样回收率分别为100.11%,98.97%,99.56%;其RSD分别为1.08%,0.90%,1.37%。结论:该法简便快速,重复性良好,结果准确可靠,可用于知母黄柏药对提取物中主要有效成分的含量测定。