与黄瓜雌性性状连锁的cs-acs1g基因特异片段克隆与鉴定

目的快速、准确划分出黄瓜雌性系是蔬菜育种工作者面临的重大任务,为了弥补目前物理方法鉴定的缺陷,本试验开展分子水平上鉴定的研究。方法从GenBank中查找到cs-acs1g基因序列,根据该序列设计两对引物,然后从黄瓜(C0208)雌性系材料中克隆2个基因片段,利用PCR扩增方法及田间调查手段相结合,验证cs-acs1g基因的2个片段和雌性系之间的相互关系。结果cs-acs1g基因的1013bp片段为黄瓜(CucumissativusL.)雌性系所特有,非雌性系没有此片段,而cs-acs1g基因的540bp片段无品种特异性。结论利用雌性系特异基因进行植株鉴定可以应用到实践中,是一种简便、快捷的可取方法。

Cs-ACS1基因克隆与转化黄瓜研究

采用PCR方法,从全雌系黄瓜基因组DNA中扩增出2333bp的基因片段,BLAST分析结果表明:所克隆的基因序列与Cs-ACS1仅有1个碱基的差异,与Cs-ACS1G的核苷酸序列同源性为98%,而推导氨基酸完全一致;结果表明所克隆的基因为Cs-ACS1基因.构建了该基因的正义表达载体,并导入黄瓜,获得2株转基因植株.

黄瓜性别决定基因相关的分子标记

以不同性别类型的黄瓜高代自交系为材料,根据GenBank中提供的乙烯合成、信号转导有关基因序列、花器官发育相关的黄瓜性别决定蛋白基因、AGMOUS同源异型基因、与性别表达相关的RAPD和ISSR引物,采用Primer Premier 5.00专业引物设计软件,设计可能与性别表达有关特异引物.结果表明,ACS1号引物对(ACS-F1,5′-ATTCAGATGGGT-3′;ACCS-R1,5′-GCCAAAGCTCGACAT-3′),CsACS1G-SCAR引物对(ACS-F1,5′-TTAACTACTTCGGACGGGCATAG-3′;ACCS-R1,5′-AGGTGTTCAGCAAA CATAGGGTG-3′)及RAPD引物S12对不同性别类型的黄瓜基因组DNA的PCR扩增产物表现出明显的多态性.用Mapmaker/Exp 3.0进行连锁分析,发现雌性F基因和ACS_280,CsACS1G-SCAR_430均连锁群,遗传距离分别为31.4,10.0 cM,与S12_280标记不在一个连锁群上.