利用体外特异位点重组反应构建黄瓜灰霉菌cDNA文库

体外特异位点重组技术应用于cDNA文库的构建,克服了传统文库构建方法中的常见问题。本研究利用这一技术,以能够分离得到植物激活蛋白的黄瓜灰霉菌(B.cinerea)菌株为材料,用TRIZOL试剂提取总RNA,从中分离纯化出mRNA,用预先接有attB2位点的Oligo(dT)引物和SuperScriptTMⅡ反转录酶合成cDNA,双链cDNA与attB1接头连接,经重组、转化后构建了其cDNA文库。文库滴度为2.3×106pfu/mL,文库总容量达2.53×107。随机挑取24个克隆,经酶切检测,平均插入片断为1466bp,重组率达100%。

防治黄瓜灰霉病菌的药剂筛选及增效作用研究

旨在筛选防治黄瓜灰霉病的有效药剂,探讨生物糖脂对灰霉菌杀菌剂药效的影响。采用菌丝生长速率法测定9种不同杀菌剂对黄瓜灰霉菌的室内毒力,根据测定结果,选取3种抑菌效果适中的杀菌剂与生物糖脂复配后进行黄瓜灰霉病盆栽防效试验。毒力测定结果表明,25%啶菌噁唑EC、30%啶酰·咯菌腈SC对黄瓜灰霉病菌菌丝生长抑制显著,EC 50值均小于1.00 mg/L,分别为0.1550 mg/L和0.1789 mg/L,可作为有效药剂用于进一步的田间试验;盆栽防效试验结果表明,3种杀菌剂与生物糖脂混合施用后其防效均有不同程度的提高,说明生物糖脂和所用杀菌剂复配具有增效作用,在生产中可以将杀菌剂与生物糖脂进行复配来更好地防治灰霉病。

抗黄瓜灰霉病菌生防放线菌的筛选及其抑菌机理的初步研究

从济南周围地区10多种作物田采集到土样20份。经室内分离、纯化,获得生防菌菌株85株。采用平板对峙培养、含细菌培养等方法,筛选出对黄瓜灰霉病原菌具有一定拮抗作用的菌株。通过平板对峙培养法筛选出3个对黄瓜灰霉病菌有明显拮抗作用的菌株:RB-2,RB-3,RB-9。其中,菌株RB-3抑菌能力最强,抑菌圈直径达15.8mm。通过放线菌发酵液对孢子萌发的影响,显微镜观察抑菌作用表明,拮抗菌RB-9对抑制菌丝生长、孢子萌发、生长抑制作用最强,孢子萌发率仅为1.25%;其次为RB-2,孢子萌发率为7.28%;RB-3的发酵液影响最小,孢子萌发率为10.59%。后期针对不同温度、不同pH条件下对放线菌发酵液的抑菌活性作了初步的实验研究。